-
题名携带sFlt-1基因片段的慢病毒载体的构建及表达
被引量：2
- 1
-
-
作者
吴强
张敏
宋蓓雯
贾丽丽
杜新华
江丹
-
机构
上海市交通大学附属第六人民医院眼科
-
出处
《眼科研究》
CSCD
北大核心
2009年第2期137-140,共4页
-
基金
上海市登山计划资助项目(064119543)
-
文摘
目的分别建立携带可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)不同基因片段的慢病毒表达质粒,为进一步研究sFlt-1不同基因片段表达的蛋白生物学功能奠定基础。方法以人新鲜胎盘组织提取的cDNA为模板,进行RT-PCR扩增,制备sFlt-1基因片段sFlt-1(2-3)和sFlt-1(2-4)。扩增片断经限制性内切酶BamHI和SalI双酶切后,插入慢病毒载体pRRL-GFP中,构建慢病毒表达质粒pRRL/sFlt-1(2-3)及pRRL/sFlt-1(2-4),与慢病毒包装载体pMDLg/pRRE、包被载体PRSV/REV、pMD2.G共转染人胚肾细胞(HEK293T),获得重组慢病毒Lenti.sFlt-1(2-3)及Lenti.sFlt-1(2-4),并感染人视网膜色素上皮(RPE)细胞,通过RT-PCR和Western blotting验证Lenti.sFlt-1(2-3)及Lenti.sFlt-1(2-4)在人RPE细胞的表达。结果经酶切鉴定及基因测序证实pRRL/sFlt-1(2-3)和pRRL/sFlt-1(2-4)的序列与GenBank中的序列完全一致,并且包装成病毒后能有效感染人RPE细胞。结论本实验成功构建了分别携带sFlt-l基因第2-3和第2-4免疫球蛋白样区域编码序列的慢病毒载体,包装成病毒后能有效感染人RPE细胞。
-
关键词
SFLT-1
慢病毒载体
视网膜新生血管
基因治疗
-
Keywords
sFlt-1
lentiviral vector
retinal neovascularization
gene therapy
-
分类号
R774.1
[医药卫生—眼科]
-
