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两种方法对上海及周边地区实验大小鼠螺杆菌携带情况的调查 被引量：3
1
作者 丁聪 冯洁 +2 位作者 谢建云 高诚 胡建华 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第12期66-69,78,共5页
目的了解上海及周边地区实验小鼠、大鼠螺杆菌携带情况,为我国实验动物等级及监测标准的制定提供参考和依据。方法 PCR法共检测了352只小鼠(清洁级101只,SPF级251只),101只大鼠(清洁级69只,SPF级32只);ELISA法共检测了88只小鼠(清洁级26... 目的了解上海及周边地区实验小鼠、大鼠螺杆菌携带情况,为我国实验动物等级及监测标准的制定提供参考和依据。方法 PCR法共检测了352只小鼠(清洁级101只,SPF级251只),101只大鼠(清洁级69只,SPF级32只);ELISA法共检测了88只小鼠(清洁级26只,SPF级62只),165只大鼠(清洁级84只,SPF级81只);并对其中88只小鼠、101只大鼠的PCR和ELISA法阳性检测率进行比较。结果 PCR法检测小鼠平均阳性率为35.8%(126/352),清洁级阳性率为51.5%(52/101),SPF级阳性率为29.5%(74/251);大鼠平均阳性率为70.3%(71/101),清洁级阳性率为69.6%(48/69),SPF级阳性率为71.9%(23/32);ELISA法检测小鼠平均阳性率为15.9%(14/88),清洁级阳性率为19.2%(5/26),SPF级阳性率为14.5%(9/62);大鼠平均阳性率为52.7%(87/165),清洁级53.6%(45/84),SPF级51.9%(42/81);88只小鼠PCR法阳性检测率为72.7%(64/88),ELISA法阳性检测率为15.9%(14/88);101只大鼠PCR法阳性检测率为70.3%(71/101),ELISA法阳性检测率为49.5%(50/101)。结论上海及周边地区实验大鼠、小鼠中皆存在着不同程度的螺杆菌感染,两种方法阳性检出率比较结果表明回盲部内容物PCR法较检测血清中抗螺杆菌抗体ELISA法更为敏感。 展开更多
关键词 螺杆菌 PCR ELISA 流行病学调查
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实验大鼠和小鼠多种细菌PCR检测与分析 被引量：6
2
作者 冯洁 谢建云 +3 位作者 魏晓锋 冯丽萍 张泉 高诚 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期89-93,116,共6页
目的调查上海市实验动物生产设施大鼠、小鼠细菌携带状况。方法比较国内外实验动物细菌监测方案,选取螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌作为检测项目,分别于2014年和2016年收集样品共计848... 目的调查上海市实验动物生产设施大鼠、小鼠细菌携带状况。方法比较国内外实验动物细菌监测方案,选取螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌作为检测项目,分别于2014年和2016年收集样品共计848份,采用PCR方法对上述6种病原体进行检测。结果 SPF级设施均无金黄色葡萄球菌污染,清洁级设施2014年无肺炎克雷伯杆菌污染,其它病原体在不同级别设施内均有不同程度的污染,所有清洁级设施均存在螺杆菌和牛棒状杆菌污染。螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌和牛棒状杆菌在不同级别动物上均检出阳性。螺杆菌、绿脓杆菌阳性率呈下降趋势,而啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、肺炎克雷伯杆菌阳性率则呈上升趋势。结论本研究全面、系统地分析了上海地区实验大鼠、小鼠细菌携带状况,为提高实验动物质量和饲养管理水平起促进作用,为我国实验动物国家标准的修订和完善提供依据和参考。 展开更多
关键词 大鼠 小鼠 细菌 PCR
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啮齿动物螺杆菌多重PCR检测方法的建立 被引量：4
3
作者 李瑞娇 冯洁 +2 位作者 谢建云 胡建华 高诚 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第12期35-40,共6页
目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp... 目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp、324 bp目的条带。最佳退火温度为52℃,镁离子浓度为2.0mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,引物浓度为0.625μmol/L。在此条件下多重PCR同时检测的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌敏感度均为10 fg。结论本实验建立的多重PCR是一种敏感、特异、高效的方法,为同时检测啮齿动物中肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 肝螺杆菌 胆汁螺杆菌 啮齿类螺杆菌 多重PCR
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培养法和 PCR法用于实验大、小鼠细菌检测的比较分析 被引量：9
4
作者 冯洁 谢建云 +2 位作者 冯丽萍 魏晓锋 高诚 《中国比较医学杂志》 北大核心 2015年第8期23-26,共4页
目的比较培养法和PCR法对实验大、小鼠的细菌检测效果。方法分别采用传统细菌分离培养结合生化鉴定方法和PCR方法,对78只SPF级大鼠和422只SPF级小鼠进行检测,对两种方法的检测结果进行比较分析。结果 78只SPF级大鼠均未检测出阳性。422... 目的比较培养法和PCR法对实验大、小鼠的细菌检测效果。方法分别采用传统细菌分离培养结合生化鉴定方法和PCR方法,对78只SPF级大鼠和422只SPF级小鼠进行检测,对两种方法的检测结果进行比较分析。结果 78只SPF级大鼠均未检测出阳性。422只SPF级小鼠,培养法检测阳性率7.11%(30/422),其中金黄色葡萄球菌10只,绿脓杆菌22只,肺炎克雷伯杆菌2只。PCR法检测阳性率7.58%(32/422),其中金黄色葡萄球菌10只,绿脓杆菌25只,肺炎克雷伯杆菌2只。结论 PCR法的敏感性高于培养法,操作简便、快捷,适用于实验动物细菌的快速诊断和大规模的质量筛查。 展开更多
关键词 培养法 PCR法 实验动物 细菌
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肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立及初步应用 被引量：5
5
作者 冯洁 张泉 +4 位作者 钱淼 谢建云 胡建华 高诚 高崧 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期50-55,共6页
根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86... 根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86.9fg/L,是普通PCR所需模板量的1/10。本研究建立的LAMP快速检测方法具备操作简单、特异性好、灵敏度高的优点,结果易于观察,对仪器设备要求低,适宜推广应用。 展开更多
关键词 肝螺杆菌 环介导等温扩增 检测
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啮齿柠檬酸杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2
6
作者 冯洁 谢建云 +3 位作者 张泉 魏晓锋 胡建华 高诚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期393-397,共5页
为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(C.rodentium)esp B基因的方法,本研究根据Gen Bank中登录的C.rodentium esp B基因序列设计1对特异性引物,建立了C.rodentium SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示,在102拷贝/μL^108拷贝/μL浓度... 为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(C.rodentium)esp B基因的方法,本研究根据Gen Bank中登录的C.rodentium esp B基因序列设计1对特异性引物,建立了C.rodentium SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示,在102拷贝/μL^108拷贝/μL浓度范围内标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系。该方法仅对C.rodentium进行特异性扩增,而对牛棒状杆菌、鼠伤寒沙门菌、嗜肺巴斯德杆菌、支气管鲍特杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。其检测灵敏度可达24拷贝/μL。组内和组间试验变异系数均小于1%,重复性良好。临床样品初步应用结果显示,荧光定量PCR阳性检出率为56.36%(31/55),常规PCR阳性检出率为30.91%(17/55),二者符合率为74.55%。本研究建立的C.rodentium SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法为实验动物C.rodentium的检测和流行病学调查提供了技术支撑。 展开更多
关键词 啮齿柠檬酸杆菌 SYBR Green I 荧光定量PCR
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PEPCK不同启动子调控报告基因表达效率的比较
7
作者 王学斌 冯洁 +2 位作者 杨玉琴 谢建云 陈国宏 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第3期225-228,共4页
目的构建两种不同的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子调控报告基因表达质粒,比较该启动子在各种细胞系中的表达效率。方法采用PCR克隆大鼠PEPCK启动子1323 bp和560 bp两条片段,将两个PEPCK启动子片段插入pGL4.26-Luc2报告质粒中... 目的构建两种不同的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子调控报告基因表达质粒,比较该启动子在各种细胞系中的表达效率。方法采用PCR克隆大鼠PEPCK启动子1323 bp和560 bp两条片段,将两个PEPCK启动子片段插入pGL4.26-Luc2报告质粒中,将重组质粒转染到肝脏细胞系和脂肪细胞系,以非脂肪或肝脏细胞系做对照,比较PEPCK驱动荧光素酶表达效率。结果通过酶切鉴定及基因测序,证明pGL4.26-PEPCK-Luc2荧光素酶表达质粒构建成功,且能够在体外表达荧光素酶。结论两种同片段的PEPCK启动子在各细胞系中的表达效率差异无显著性。 展开更多
关键词 重组质粒 表达效率 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶
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3种条件性致病菌三重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：15
8
作者 冯洁 谢建云 +1 位作者 胡建华 高诚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1389-1395,共7页
本研究旨在建立一种能同时检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa）、肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae,K.pneumoniae）的三重PCR检测方法。根据金黄色葡萄球菌... 本研究旨在建立一种能同时检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa）、肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae,K.pneumoniae）的三重PCR检测方法。根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌toxR基因、肺炎克雷伯杆菌PhoE基因设计并合成引物,在单一PCR条件基础上优化建立三重PCR反应条件,并进行特异性、敏感性和重复性分析及与细菌分离培养的比对试验。结果显示,3对引物均能特异性扩增出目的条带,大小分别为484、278和368bp。最佳退火温度在56~59℃之间,引物浓度均为0.2μmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,Mg2＋浓度为2.5mmol/L。3种细菌间无交叉反应。对支气管鲍特杆菌等其他8种实验动物常见致病菌均无交叉反应。最低能同时检测到10-5 ng/μL的细菌基因组DNA。3次重复结果一致,表明建立的三重PCR方法重复性好。同时采用细菌分离培养法和三重PCR方法对30份实验小鼠样本进行检测,对比结果显示三重PCR方法检出率略高于细菌分离培养法,细菌分离培养法呈阳性的样品,三重PCR方法均能检出。结果表明,本试验建立的三重PCR检测方法具有特异、敏感、高效等优点,为实验动物细菌快速检测和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 三重PCR 金黄色葡萄球菌 绿脓杆菌 肺炎克雷伯杆菌
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仙台病毒核蛋白的原核表达及鉴定 被引量：1
9
作者 魏晓锋 胡建华 高诚 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第4期32-36,共5页
本研究从一株鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)中扩增获得核蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因,将其克隆入pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。将原核表达产物作为免疫原,免疫BALB/C小鼠,制备获得抗NP的特异性多抗,经间接免疫... 本研究从一株鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)中扩增获得核蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因,将其克隆入pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。将原核表达产物作为免疫原,免疫BALB/C小鼠,制备获得抗NP的特异性多抗,经间接免疫荧光法和Western blot法检测,该表达产物原具有良好的免疫原性。将该产物纯化作为包被抗原,建立了一种检测SeV感染的间接ELISA方法。通过H1N1流感病毒、H9N2流感病毒、新城疫病毒阳性血清进行交叉试验表明:该间接ELISA方法有很好的特异性。这为实验动物仙台病毒抗体的检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 仙台病毒 核蛋白 原核表达 ELISA
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