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单纯疱疹病毒1型US12基因siRNA筛选及其对病毒增殖的影响
被引量：
2
1
作者
李深
任哲
+7 位作者
王巧利
向阳飞
王一飞
胡巢凤
戚仁斌
陆大祥
张庶民
张佩琢
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期528-532,共5页
目的:筛选高效沉默单纯疱疹病毒1型(HSV-1)US12基因的siRNA,研究siRNA沉默US12基因后对HSV-1增殖的影响。方法:构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,设计并化学合成3对靶向US12基因的siRNA,与pEGFP-N1-US12融合表达质粒共转染Vero细胞,流式...
目的:筛选高效沉默单纯疱疹病毒1型(HSV-1)US12基因的siRNA,研究siRNA沉默US12基因后对HSV-1增殖的影响。方法:构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,设计并化学合成3对靶向US12基因的siRNA,与pEGFP-N1-US12融合表达质粒共转染Vero细胞,流式细胞术筛选高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对细胞内US12 mRNA表达水平的抑制效果,空斑减数实验评价siRNA对HSV-1增殖的抑制效果。结果:共转染实验筛选出高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siR-NAS121、siRNAS122及siRNAS123。3对siRNA均能显著降低感染细胞US12 mRNA的表达水平,但空斑减数实验均未发现3对siRNA对HSV-1的增殖有显著抑制效果。结论:成功构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,筛选到高效抑制US12基因表达的3对siRNA,但是对病毒的体外增殖无显著影响,表明US12表达的立即早期蛋白ICP47的功能可能与HSV-1体外增殖无直接相关。
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关键词
SIRNA
RNA干扰
基因
US12
单纯疱疹病毒1型
在线阅读
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职称材料
人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用
被引量：
2
2
作者
任哲
张美英
+7 位作者
王一飞
朱钦昌
张春龙
陆大祥
胡巢凤
李久香
张佩琢
杨志荣
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期2444-2447,共4页
目的:快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA,为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础。方法:应用RT-PCR扩增人HSV-1F株UL40基因,将其连接到pEGFP-N1构建pEGFP-N1-UL40融合蛋白表达质粒。将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质...
目的:快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA,为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础。方法:应用RT-PCR扩增人HSV-1F株UL40基因,将其连接到pEGFP-N1构建pEGFP-N1-UL40融合蛋白表达质粒。将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质粒共转染Vero细胞,通过观察绿色荧光蛋白报告基因的表达筛选高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。结果:倒置荧光显微镜观察发现设计的4对siRNA中siRNA3和siRNA4能明显降低绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪检测证明siRNA3和siRNA4对目的基因沉默效率分别达到76.99%和84.00%。结论:成功构建了人HSV-1 UL40基因融合表达载体pEGFP-N1-UL40,并利用该载体筛选出2对高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。
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关键词
疱疹病毒Ⅰ型
人
基因
UL40
SIRNA
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职称材料
题名
单纯疱疹病毒1型US12基因siRNA筛选及其对病毒增殖的影响
被引量：
2
1
作者
李深
任哲
王巧利
向阳飞
王一飞
胡巢凤
戚仁斌
陆大祥
张庶民
张佩琢
机构
暨南大学生物医药研究开发基地
暨南大学医学院病理生理学系
中国药品生物制品检定所
上海吉玛制药技术有限公司
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期528-532,共5页
基金
国家863资助项目(No.2006AA02A226)
国家自然科学基金联合资助项目(No.U0632010)
+1 种基金
植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室自主课题(No.0807E21211)以及开放课题(No.0807B11211)
211工程经费资助
文摘
目的:筛选高效沉默单纯疱疹病毒1型(HSV-1)US12基因的siRNA,研究siRNA沉默US12基因后对HSV-1增殖的影响。方法:构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,设计并化学合成3对靶向US12基因的siRNA,与pEGFP-N1-US12融合表达质粒共转染Vero细胞,流式细胞术筛选高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对细胞内US12 mRNA表达水平的抑制效果,空斑减数实验评价siRNA对HSV-1增殖的抑制效果。结果:共转染实验筛选出高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siR-NAS121、siRNAS122及siRNAS123。3对siRNA均能显著降低感染细胞US12 mRNA的表达水平,但空斑减数实验均未发现3对siRNA对HSV-1的增殖有显著抑制效果。结论:成功构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,筛选到高效抑制US12基因表达的3对siRNA,但是对病毒的体外增殖无显著影响,表明US12表达的立即早期蛋白ICP47的功能可能与HSV-1体外增殖无直接相关。
关键词
SIRNA
RNA干扰
基因
US12
单纯疱疹病毒1型
Keywords
siRNA
RNA interference
Genes
US12
Herpes simplex virus 1
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用
被引量：
2
2
作者
任哲
张美英
王一飞
朱钦昌
张春龙
陆大祥
胡巢凤
李久香
张佩琢
杨志荣
机构
四川大学生命科学学院
暨南大学生物医药研究与开发基地
暨南大学医学院
上海吉玛制药技术有限公司
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期2444-2447,共4页
基金
广东省工业攻关计划项目(2005A10904001)
暨南大学重点实验室开放基金资助项目(No2005)
文摘
目的:快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA,为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础。方法:应用RT-PCR扩增人HSV-1F株UL40基因,将其连接到pEGFP-N1构建pEGFP-N1-UL40融合蛋白表达质粒。将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质粒共转染Vero细胞,通过观察绿色荧光蛋白报告基因的表达筛选高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。结果:倒置荧光显微镜观察发现设计的4对siRNA中siRNA3和siRNA4能明显降低绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪检测证明siRNA3和siRNA4对目的基因沉默效率分别达到76.99%和84.00%。结论:成功构建了人HSV-1 UL40基因融合表达载体pEGFP-N1-UL40,并利用该载体筛选出2对高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。
关键词
疱疹病毒Ⅰ型
人
基因
UL40
SIRNA
Keywords
Herpesvirus 1, human
Gene, UL40
siRNA
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
单纯疱疹病毒1型US12基因siRNA筛选及其对病毒增殖的影响
李深
任哲
王巧利
向阳飞
王一飞
胡巢凤
戚仁斌
陆大祥
张庶民
张佩琢
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用
任哲
张美英
王一飞
朱钦昌
张春龙
陆大祥
胡巢凤
李久香
张佩琢
杨志荣
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
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