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猪圆环病毒2型LAMP可视化快速检测方法的研究 被引量:4
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作者 胡瑞丽 倪建平 +5 位作者 赵笑 赵庆 史斌 赵桓震 赵斌安 赵凯 《上海农业学报》 CSCD 2016年第1期23-28,共6页
本研究旨在建立有效的针对猪圆环病毒2型(PCV2)的诊断技术及开发试剂盒。采用环介导等温扩增方法(LAMP)检测猪圆环病毒2型(PCV2),对PCV2的ORF2基因设计出3对特异性引物,扩增PCV2基因的最佳温度和时间优化到59℃孵育55 min。用该方法对... 本研究旨在建立有效的针对猪圆环病毒2型(PCV2)的诊断技术及开发试剂盒。采用环介导等温扩增方法(LAMP)检测猪圆环病毒2型(PCV2),对PCV2的ORF2基因设计出3对特异性引物,扩增PCV2基因的最佳温度和时间优化到59℃孵育55 min。用该方法对临床样品进行检测,LAMP检测对PCV2的检测限为10拷贝/μL,而常规PCR检测法的检测限为1 000拷贝/μL,表明LAMP检测法灵敏度高。该检测法不会与猪圆环病毒Ⅰ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎的猪病毒和轮状病毒发生交叉反应。用建立起的LAMP检测法对1 100个临床样品进行检测,950个样品被检测出为阳性样品。稳定性试验表明该试剂盒可以耐受至少40次的反复冻融。结果显示,该方法建立的猪圆环病毒2型诊断方法灵敏度高,特异性强,稳定性好。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 环介导等温扩增 检测 诊断试剂盒
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非洲猪瘟病毒检测技术概述 被引量:2
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作者 张皖静 张琪 +5 位作者 张晓霞 吴文静 杨丹 袁文天 许燕 赵凯 《上海农业学报》 2021年第6期128-131,共4页
非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种具有急性、烈性、高度接触性的传染病,致死率高达100%,传播范围十分广泛,由于目前尚无有效的疫苗对这种病毒进行免疫预防,必须进行检测、扑杀和隔离,才能阻断病毒的传播,因此亟需建立简便、快速、有... 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种具有急性、烈性、高度接触性的传染病,致死率高达100%,传播范围十分广泛,由于目前尚无有效的疫苗对这种病毒进行免疫预防,必须进行检测、扑杀和隔离,才能阻断病毒的传播,因此亟需建立简便、快速、有效的核酸检测方法。通过介绍当前使用的非洲猪瘟病毒的检测方法,归纳出各种方法的优缺点,并对非洲猪瘟病毒检测技术的发展方向进行阐述。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 非洲猪瘟检测技术 环介导等温扩增(LAMP) 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) 聚合酶链式反应(PCR)
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猪圆环病毒2型(PCV2)LAMP现场可视化快速检测试剂盒主要原材料的研究 被引量:2
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作者 张琪 张皖静 +5 位作者 张晓霞 赵悦琪 吴文静 袁文天 许燕 赵凯 《上海农业学报》 2020年第6期66-71,共6页
选择上海闪晶分子生物科技有限公司、南京诺维赞生物科技有限公司、北京蓝谱生物科技有限公司的Bst酶和LAMP反应缓冲液,进一步对猪圆环病毒2型(PCV2)环介导等温扩增(LAMP)试剂盒的原材料进行了研究。结果表明:南京诺维赞生物科技有限公... 选择上海闪晶分子生物科技有限公司、南京诺维赞生物科技有限公司、北京蓝谱生物科技有限公司的Bst酶和LAMP反应缓冲液,进一步对猪圆环病毒2型(PCV2)环介导等温扩增(LAMP)试剂盒的原材料进行了研究。结果表明:南京诺维赞生物科技有限公司的试剂较好,该厂家的原材料可实现试剂盒检测性能的最优化。该组合灵敏度高,阳性参考品稀释度为10-11(5个病毒∕μL)可进行反应,且特异性较好。本研究可为后续药证申报奠定基础,同时为其他相关LAMP诊断试剂盒的药证申报提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 环介导等温扩增(LAMP) 原材料研究 药证申报
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猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测试剂盒原材料研究
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作者 张晓霞 张琪 +5 位作者 张皖静 赵悦琪 吴文静 杨丹 许燕 赵凯 《上海农业学报》 2021年第1期71-75,共5页
通过对比3家公司生产的Taq酶、PCR反应缓冲液和UDG酶,对已建立的猪圆环病毒2型(PCV2)荧光定量PCR检测试剂盒中阳性参考品、最低检测限参考品、精密性参考品和阴性参考品进行制备。结果表明:Takara宝生物工程(上海)有限公司生产的Taq酶、... 通过对比3家公司生产的Taq酶、PCR反应缓冲液和UDG酶,对已建立的猪圆环病毒2型(PCV2)荧光定量PCR检测试剂盒中阳性参考品、最低检测限参考品、精密性参考品和阴性参考品进行制备。结果表明:Takara宝生物工程(上海)有限公司生产的Taq酶、PCR反应缓冲液和上海博彩生物科技有限公司生产的UDG酶的试剂组合扩增效率最高,荧光增长值的平均值达182464,各组合间Ct值无显著性差异。本试验可为相关荧光定量PCR检测试剂盒的药证申报提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 荧光定量PCR检测试剂盒 原材料研究 参考品制备
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