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测序法及液相芯片杂交法对生殖道人乳头瘤病毒感染分型的比较
被引量：
8
1
作者
齐淑贞
王千秋
+7 位作者
谈玉
沈艳
李波
陈淑丽
程刚
秦红友
尤志学
周兵斌
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期181-185,共5页
目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型方法在临床标本应用中的特异性及敏感性。方法采用通用型引物用PCR方法对尖锐湿疣及宫颈细胞内瘤变组织标本进行HPV DNA检测,测序法及液相芯片杂交法(luminex法)对其进行分型。结果在单型感染中测序法较...
目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型方法在临床标本应用中的特异性及敏感性。方法采用通用型引物用PCR方法对尖锐湿疣及宫颈细胞内瘤变组织标本进行HPV DNA检测,测序法及液相芯片杂交法(luminex法)对其进行分型。结果在单型感染中测序法较为准确,而在多型感染中luminex法占一定优势。结论测序法结合luminex法可以运用在HPV感染标本中的分型。
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关键词
尖锐湿疣
宫颈癌
宫颈上皮细胞内瘤变
人乳头瘤病毒
测序
液相芯片杂交法
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职称材料
人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测
被引量：
1
2
作者
刘建玲
康雪莲
+4 位作者
董辉
王嘉颖
曹琳
徐晓晶
金维荣
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2010年第3期20-23,47,共5页
提取人肝癌组织RNA,通过RT-PCR扩增人SPP2成熟蛋白编码区基因并克隆至原核表达载体pET-22b(+),将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL2l(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,用Ni-NTA柱进行纯化,SDS-PAGE电泳及Western blot检测并证实目的蛋白的表达,...
提取人肝癌组织RNA,通过RT-PCR扩增人SPP2成熟蛋白编码区基因并克隆至原核表达载体pET-22b(+),将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL2l(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,用Ni-NTA柱进行纯化,SDS-PAGE电泳及Western blot检测并证实目的蛋白的表达,通过重组蛋白对木瓜蛋白酶的抑制作用验证其生物学活性。重组质粒测序和酶切结果显示SPP2成熟蛋白基因已成功克隆到pET-22b(+)。IPTG诱导重组菌后有25kDa大小的目的蛋白表达。优化诱导表达条件,获得可溶性表达的目的蛋白,纯化后纯度达90%,western blot表明其具有His标签抗原活性。重组SPP2成熟蛋白可抑制木瓜蛋白酶的水解作用(酪蛋白为底物),重量抑制比为1∶3.1,抑制比活性为2511U/mg。
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关键词
分泌磷蛋白2
基因克隆
原核表达
纯化
生物活性
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职称材料
抗H5N1禽流感病毒VHH抗体库的构建
被引量：
8
3
作者
严安
孙冰玉
+8 位作者
夏立亮
吴标
包文静
车小燕
孙志伟
金维荣
赵国屏
熊慧
王颖
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期44-49,共6页
目的:构建抗H5N1禽流感病毒的小羊驼免疫噬菌体重链可变区抗体库(VHH型抗体库),为抗H5N1的VHH抗体筛选奠定基础。方法:利用H5N1灭活疫苗免疫小羊驼,一定免疫时间后测定小羊驼外周血清中抗体中和活性,分离其外周淋巴细胞,利用RT-PCR方法...
目的:构建抗H5N1禽流感病毒的小羊驼免疫噬菌体重链可变区抗体库(VHH型抗体库),为抗H5N1的VHH抗体筛选奠定基础。方法:利用H5N1灭活疫苗免疫小羊驼,一定免疫时间后测定小羊驼外周血清中抗体中和活性,分离其外周淋巴细胞,利用RT-PCR方法得到VHH抗体片段。通过优化连接和电转化方法,将足量VHH片段与pCANTAB5E连接后电转入大肠杆菌TG1,获得VHH抗体基因库;检测基因库库容以及多样性,并采用血凝抑制试验对噬菌体抗体库进行初步功能性鉴定。结果:利用H5N1灭活疫苗免疫小羊驼四次后,其外周血清中抗体血清抑制效价可达1∶2 560,构建的VHH抗体基因库库容可达3×108,随机挑选14个抗体基因克隆进行测序鉴定,结果显示均为独立克隆,表明所建抗体库多样性好。上述基因库经辅助噬菌体拯救后,得到抗H5N1的噬菌体VHH型抗体初级库,对初级库进行血凝抑制试验,结果呈阳性,表明初级库中存在具有潜在中和活性的抗H5N1抗体。结论:结果表明,已成功构建抗H5N1禽流感病毒的小羊驼免疫噬菌体重链抗体库,为进一步筛选抗H5N1禽流感的重链抗体打下良好基础,并为H5N1的早期临床诊断和治疗提供新的手段。
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关键词
H5N1
噬菌体抗体库
重链可变区抗体
禽流感病毒
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职称材料
题名
测序法及液相芯片杂交法对生殖道人乳头瘤病毒感染分型的比较
被引量：
8
1
作者
齐淑贞
王千秋
谈玉
沈艳
李波
陈淑丽
程刚
秦红友
尤志学
周兵斌
机构
中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所性病科
生物芯片
上海
国家工程研究中心
上海华冠生物芯片有限公司
江苏省人民医院妇科
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期181-185,共5页
基金
病毒学国家重点实验室开放研究基金(Ⅱ-200506)~~
文摘
目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型方法在临床标本应用中的特异性及敏感性。方法采用通用型引物用PCR方法对尖锐湿疣及宫颈细胞内瘤变组织标本进行HPV DNA检测,测序法及液相芯片杂交法(luminex法)对其进行分型。结果在单型感染中测序法较为准确,而在多型感染中luminex法占一定优势。结论测序法结合luminex法可以运用在HPV感染标本中的分型。
关键词
尖锐湿疣
宫颈癌
宫颈上皮细胞内瘤变
人乳头瘤病毒
测序
液相芯片杂交法
Keywords
condyloma acuminatum
cervical cancer
cervical intraepithelial neoplasia
human papillomaviruses
sequencing
luminex
分类号
R752.53 [医药卫生—皮肤病学与性病学]
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职称材料
题名
人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测
被引量：
1
2
作者
刘建玲
康雪莲
董辉
王嘉颖
曹琳
徐晓晶
金维荣
机构
西北大学生命科学学院
国家人类基因组南方研究中心
上海华冠生物芯片有限公司
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2010年第3期20-23,47,共5页
基金
上海市自然科学基金资助项目(07ZR14083)
文摘
提取人肝癌组织RNA,通过RT-PCR扩增人SPP2成熟蛋白编码区基因并克隆至原核表达载体pET-22b(+),将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL2l(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,用Ni-NTA柱进行纯化,SDS-PAGE电泳及Western blot检测并证实目的蛋白的表达,通过重组蛋白对木瓜蛋白酶的抑制作用验证其生物学活性。重组质粒测序和酶切结果显示SPP2成熟蛋白基因已成功克隆到pET-22b(+)。IPTG诱导重组菌后有25kDa大小的目的蛋白表达。优化诱导表达条件,获得可溶性表达的目的蛋白,纯化后纯度达90%,western blot表明其具有His标签抗原活性。重组SPP2成熟蛋白可抑制木瓜蛋白酶的水解作用(酪蛋白为底物),重量抑制比为1∶3.1,抑制比活性为2511U/mg。
关键词
分泌磷蛋白2
基因克隆
原核表达
纯化
生物活性
Keywords
secreted phosphoprotein 2
gene cloning
prokaryotic expression
purification
biological activity
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
抗H5N1禽流感病毒VHH抗体库的构建
被引量：
8
3
作者
严安
孙冰玉
夏立亮
吴标
包文静
车小燕
孙志伟
金维荣
赵国屏
熊慧
王颖
机构
上海
人类基因组研究中心卫生部重点疾病与健康重点实验室
上海
市免疫学研究所
南方医科大学
北京军事医学科学院
生物
工程研究所
上海华冠生物芯片有限公司
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期44-49,共6页
基金
国家863项目资助(2006AA02A252)
上海市教委第五期重点学科(J50207)资助
文摘
目的:构建抗H5N1禽流感病毒的小羊驼免疫噬菌体重链可变区抗体库(VHH型抗体库),为抗H5N1的VHH抗体筛选奠定基础。方法:利用H5N1灭活疫苗免疫小羊驼,一定免疫时间后测定小羊驼外周血清中抗体中和活性,分离其外周淋巴细胞,利用RT-PCR方法得到VHH抗体片段。通过优化连接和电转化方法,将足量VHH片段与pCANTAB5E连接后电转入大肠杆菌TG1,获得VHH抗体基因库;检测基因库库容以及多样性,并采用血凝抑制试验对噬菌体抗体库进行初步功能性鉴定。结果:利用H5N1灭活疫苗免疫小羊驼四次后,其外周血清中抗体血清抑制效价可达1∶2 560,构建的VHH抗体基因库库容可达3×108,随机挑选14个抗体基因克隆进行测序鉴定,结果显示均为独立克隆,表明所建抗体库多样性好。上述基因库经辅助噬菌体拯救后,得到抗H5N1的噬菌体VHH型抗体初级库,对初级库进行血凝抑制试验,结果呈阳性,表明初级库中存在具有潜在中和活性的抗H5N1抗体。结论:结果表明,已成功构建抗H5N1禽流感病毒的小羊驼免疫噬菌体重链抗体库,为进一步筛选抗H5N1禽流感的重链抗体打下良好基础,并为H5N1的早期临床诊断和治疗提供新的手段。
关键词
H5N1
噬菌体抗体库
重链可变区抗体
禽流感病毒
Keywords
H5N1 Phage display antibody library Variable domain of heavy chain antibody Avian influenza virus
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
测序法及液相芯片杂交法对生殖道人乳头瘤病毒感染分型的比较
齐淑贞
王千秋
谈玉
沈艳
李波
陈淑丽
程刚
秦红友
尤志学
周兵斌
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测
刘建玲
康雪莲
董辉
王嘉颖
曹琳
徐晓晶
金维荣
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2010
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
抗H5N1禽流感病毒VHH抗体库的构建
严安
孙冰玉
夏立亮
吴标
包文静
车小燕
孙志伟
金维荣
赵国屏
熊慧
王颖
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
8
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职称材料
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