明胶亲和层析纯化人血浆纤维连接蛋白及其糖链结构的初探 被引量：6

1

作者 查锡良 任常春 陈惠黎 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1992年第4期297-300,共4页

应用明胶亲和层析并结合凝胶过滤的方法,纯化人血浆纤维连接蛋白(Fn),此法仅二步层析,步骤简化且操作简便。纯化的Fn经凝胶电泳鉴定为一条蛋白条带,免疫鉴定仍保持原有的抗原性,得率为36％。用ConA亲和层析鉴定纯化的Fn分子中糖链结构... 应用明胶亲和层析并结合凝胶过滤的方法,纯化人血浆纤维连接蛋白(Fn),此法仅二步层析,步骤简化且操作简便。纯化的Fn经凝胶电泳鉴定为一条蛋白条带,免疫鉴定仍保持原有的抗原性,得率为36％。用ConA亲和层析鉴定纯化的Fn分子中糖链结构为N-连接型复杂型糖链二天线,此均一糖链结果佐证了Fn的纯度。还对凝胶过滤分离得到的具有Fn抗原性的Fn片段进行了讨论。 展开更多

关键词 纤维连接蛋白 明胶亲和层析 糖链

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SRS－淋巴瘤小鼠淋巴细胞染色质理化性质的研究 被引量：8

2

作者 钟叔平 温博贵 何开玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期378-382,共5页

本实验对正常及ＳＲＳ－淋巴瘤小鼠淋巴细胞染色质进行了化学组分、ＤＮａｓｅⅠ有限度消化、染色质附着蛋白释放，热变性的对比分析。结果表明：（１）ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质的非组蛋白（ｎｏｎ－ｈｉｓｔｏｎｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍ... 本实验对正常及ＳＲＳ－淋巴瘤小鼠淋巴细胞染色质进行了化学组分、ＤＮａｓｅⅠ有限度消化、染色质附着蛋白释放，热变性的对比分析。结果表明：（１）ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质的非组蛋白（ｎｏｎ－ｈｉｓｔｏｎｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＮＨＣＰ）和ＲＮＡ高于正常细胞，提示随着肿瘤的发生染色质转录活性和与转录相关的ＮＨＣＰ呈升高趋势；（２）ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质的ＤＮａｓｅⅠ消化率明显高于正常淋巴细胞，提示肿瘤细胞含有较多优先被核酸酶消化的活性染色质；（３）ＳＲＳ－淋巴瘤细胞较正常淋巴细胞蛋白释放量明显升高，提示参与活性染色质结合的ＮＨＣＰ与染色质活性位点及转录活性有密切相关；（４）ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质比正常淋巴细胞增色效应明显，提示肿瘤细胞比正常细胞染色质结构疏松。 展开更多

关键词 淋巴瘤细胞 活性染色质 热变性

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N-糖链合成抑制剂对NIH3T3细胞粘附作用和整合蛋白表达的影响 被引量：3

3

作者 贺建宇 曹立环 查锡良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期105-108,共4页

研究了Ｎ－糖链合成抑制剂——Ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（ＤＭＭ）和衣霉素（ＴＭ）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞粘附作用和细胞表面α５β１整合蛋白含量的影响．研究结果发现甘露糖苷酶Ⅰ抑制剂－ＤＭＭ处理ＮＩＨ３Ｔ３细胞后... 研究了Ｎ－糖链合成抑制剂——Ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（ＤＭＭ）和衣霉素（ＴＭ）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞粘附作用和细胞表面α５β１整合蛋白含量的影响．研究结果发现甘露糖苷酶Ⅰ抑制剂－ＤＭＭ处理ＮＩＨ３Ｔ３细胞后，３Ｈ－甘露糖（３Ｈ－Ｍａｎ）参入ＮＩＨ３Ｔ３细胞较对照细胞增加一倍，多天线复杂型糖链增加１８％，而细胞表面α５β１整合蛋白与纤连蛋白粘附能力却下降１７％，但对膜整合蛋白α５和β１亚基表达量无明显影响，提示不成熟的糖链对整合蛋白参与的细胞粘附功能有一定影响，但不影响糖蛋白运输及整合到膜上．十四糖二磷酸长萜醇合成抑制剂——ＴＭ为０．５μｇ／ｍｌ时，Ｎ－糖链合成显著抑制，３Ｈ－Ｍａｎ参入减少了５２％，细胞粘附能力下降了３７％，细胞表面膜整合蛋白α５亚基下降了２２％，而β１亚基无明显变化，提示ＴＭ的脱糖基化作用可引起α５亚基转运至细胞膜表面下降，以至影响了细胞的粘附能力．此外，脱糖整合蛋白与纤连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）的结合力下降也是原因之一． 展开更多

关键词 整合蛋白 细胞粘附 衣霉素 N-糖链

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SRS－淋巴瘤小鼠淋巴细胞活性染色质抗原特异性研究 被引量：3

4

作者 钟叔平 温博贵 何开玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期498-502,共5页

本文用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离正常及ＳＲＳ－淋巴瘤小鼠淋巴细胞染色质ＮＨＣＰ，发现ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质存在１３０Ｋｄ，１２０Ｋｄ，１１０Ｋｄ，９４Ｋｄ，５７Ｋｄ肿瘤相关性ＮＨＣＰ两种染色质经ＤＮａｓｅⅠ有限度消化，优... 本文用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离正常及ＳＲＳ－淋巴瘤小鼠淋巴细胞染色质ＮＨＣＰ，发现ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质存在１３０Ｋｄ，１２０Ｋｄ，１１０Ｋｄ，９４Ｋｄ，５７Ｋｄ肿瘤相关性ＮＨＣＰ两种染色质经ＤＮａｓｅⅠ有限度消化，优先被消化的活性染色质部位释放的蛋白不同。ＳＲＳ－淋巴瘤细胞消化后释放的ＮＨＣＰ多于正常淋巴细胞，并具时相性差异。经多种免疫学方法证实，ＳＲＳ－淋巴瘤ＮＨＣＰ具有肿瘤相关性，它的ＦＬＩＳＡ结果远高于正常淋巴细胞，ＳＲＳ－淋巴瘤染色质有限度消化时ＮＨＣＰ释放的时相性变化，在ＥＬＩＳＡ中得到证实。免疫印迹结果表明：经正常染色质重吸收后的抗ＳＲＳ－淋巴瘤染色质ＮＨＣＰ的抗血清与正常淋巴细胞染色质不显带，而与ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质显出多条阳性带，这些肿瘤相关性ＮＨＣＰ存在于不同处理的样品中。以上结果提示：ＳＲＳ－淋巴瘤相关性ＮＨＣＰ位于活性染色质部位，它们可能是参与肿瘤基因表达的调控蛋白一反式作用因子。 展开更多

关键词 淋巴瘤 染色质 染色体蛋白质 非组蛋白

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视黄酸对人肝癌细胞蛋白激酶的影响 被引量：8

5

作者 刘毅 艾兆伟 陈惠黎 《生物化学杂志》 CSCD 1990年第6期553-557,共5页

视黄酸(RA)处理SMMC-7721人肝癌细胞株72小时后,胞浆、膜性组分的蛋白激酶C(PK-C)的活力及比活力均下降,活力分别下降44.9％和48.8％,比活力下降42.7％和35.0％。然而,胞浆与膜性组分的活力,比活力比值在RA处理前后并无十分明显的变化,... 视黄酸(RA)处理SMMC-7721人肝癌细胞株72小时后,胞浆、膜性组分的蛋白激酶C(PK-C)的活力及比活力均下降,活力分别下降44.9％和48.8％,比活力下降42.7％和35.0％。然而,胞浆与膜性组分的活力,比活力比值在RA处理前后并无十分明显的变化,这提示在RA作用过程中,未发生PK-C的膜-浆转位。蛋白激酶A(PK-A)的变化则相反,RA处理72小时,活力、比活力上升了295％,258％。PK-A/PK-C的活力比值则从0.342增加到1.849,比活力比值从0.210增加到0.897。因PKC和PKA分别和细胞的去分化性增殖和分化有关,故上述结果和我们已报道的RA可抑制SMMC-7721细胞株的增殖和促进其分化相一致。 展开更多

关键词 肝癌细胞 蛋白激酶 视黄酸

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人胎盘纤连蛋白N糖链结构研究 被引量：3

6

作者 查锡良 李月彬 +2 位作者 巨同忠 李季 陈惠黎 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第5期515-520,共6页

分离纯化了人胎盘纤连蛋白（Ｆｎ），经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带，纯化Ｆｎ仍保持其搞原性，得率为３８．７％。根据植物凝集素识别专一糖链结构的原理，应用斑点印迹法，亲和层析法和Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳研究糖链结构，结果证... 分离纯化了人胎盘纤连蛋白（Ｆｎ），经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带，纯化Ｆｎ仍保持其搞原性，得率为３８．７％。根据植物凝集素识别专一糖链结构的原理，应用斑点印迹法，亲和层析法和Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳研究糖链结构，结果证实：１．人胎盘Ｆｎ分子中含有复杂型Ｎ糖链（包括二天线和大于二天线的结构）以及高甘露糖型和／或杂合型Ｎ糖链；复杂型Ｎ糖链中含有平分型ＧｌｃＮＡｃ，糖链末端也可连有唾液酸；２．胰糜蛋白酶水解而获得的明胶结合片段（４４ｋＤ）含有二天线和多天线复杂型糖链，也可接有平分型ＧｌｃＮＡｃ；３．肝素结合片段（３０ｋＤ）以及明胶、肝素均不结合的Ｆｎ片段不含有多天线复杂型Ｎ糖链。 展开更多

关键词 纤连蛋白 N连接型 糖链 植物凝集素 胎盘

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蛋白激酶与细胞分化—两种分化诱导剂对酪氨酸蛋白激酶的抑制 被引量：9

7

作者 柴希运 秦慧 陈惠黎 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第2期162-167,共6页

在报道视黄酸(RA)是人肝癌细胞株SMMC-7721分化诱导剂的基础上,本文继续报道8-溴-环磷酸腺苷对该细胞也有分化诱导作用,两者都抑制细胞的增殖,降低γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)比活力和升高(ALP)碱性磷酸酶的比活力。在10μmol/LRA和0.5mmol/... 在报道视黄酸(RA)是人肝癌细胞株SMMC-7721分化诱导剂的基础上,本文继续报道8-溴-环磷酸腺苷对该细胞也有分化诱导作用,两者都抑制细胞的增殖,降低γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)比活力和升高(ALP)碱性磷酸酶的比活力。在10μmol/LRA和0.5mmol/L-8-Br-cAMP处理细胞1、3、5天后,胞液和膜性组分中的酪氨酸蛋白激酶(TPK)的比活力均降低,其中RA对胞液TPK的作用在早期较明显,约降低30％,而对膜性TPK的影响则随培养天数而逐渐增加,至第5天下降达50％以上。8Br-cAMP则相反,对胞浆TPK的抑制主要发生在3天以后;约抑制43—53％,而对膜性组分则抑制率逐日降低,在第一天较为明显。因TPK是一个细胞增殖恶变的标志,故RA和8-溴-cAMP对TPK的抑制进一步证明这两种分化诱导剂对SMMC-7721细胞的逆转作用。 展开更多

关键词 酪氨酸 蛋白激酶 细胞分化

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视黄酸对人肝癌细胞表面N糖链类型及天线数的影响 被引量：2

8

作者 董素才 杨小平 陈惠黎 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第6期680-684,共5页

本文采用系列凝集素柱层析法，并配合外切糖苷酶处理研究了在视黄酸作用１－５天过程中人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ糖结构的变化。结果表明，ＲＡ促进＾３Ｈ－甘露糖参入细胞表面Ｎ糖链，使高甘露糖型Ｎ糖的百分比下降，... 本文采用系列凝集素柱层析法，并配合外切糖苷酶处理研究了在视黄酸作用１－５天过程中人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞表面Ｎ糖结构的变化。结果表明，ＲＡ促进＾３Ｈ－甘露糖参入细胞表面Ｎ糖链，使高甘露糖型Ｎ糖的百分比下降，复杂型百分比长升，并促进二天线Ｎ糖链的生物合成，使多天线特别是四天线和Ｃ２，Ｃ２１ｂ三天线Ｎ糖链的合成减少。结果提示。 展开更多

关键词 视黄酸 肝肿瘤 细胞 N糖链

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诱发大鼠肝癌早期病变中蛋白激酶和磷脂的变化 被引量：1

9

作者 刘毅 于秉治 +1 位作者 林峰 陈惠黎 《生物化学杂志》 CSCD 1991年第1期125-128,共4页

近年来发现蛋白激酶不但参与细胞的代谢调节,还与细胞的增殖和分化密切相关。除酪氨酸蛋白激酶是某些癌基因的表达产物外,钙-磷脂依赖性蛋白激酶(又称蛋白激酶C,PK-C)是促癌剂TPA(12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-aeetatc)的受体。作者... 近年来发现蛋白激酶不但参与细胞的代谢调节,还与细胞的增殖和分化密切相关。除酪氨酸蛋白激酶是某些癌基因的表达产物外,钙-磷脂依赖性蛋白激酶(又称蛋白激酶C,PK-C)是促癌剂TPA(12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-aeetatc)的受体。作者在前文中曾报导:分化诱导剂视黄酸可使人肝癌细胞株SMMC-7721中蛋白激酶C的活力明显降低;而蛋白激酶A(cAMP依赖性蛋白激酶,PKA)则明显增加。本文研究化学诱发大鼠肝癌早期病变中这两种蛋白激酶的变化,观察有无和视黄酸处理时相反的改变。 展开更多

关键词 肝癌 蛋白激酶 磷脂

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糖尿病患者高密度脂蛋白与受体结合的研究

10

作者 雷涛 顾建新 +1 位作者 陈惠黎 朱禧星 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期239-242,共4页

目的和方法：对糖尿病Ⅰ组（ＨｂＡ１ｃ为７０６％±０６０％）Ⅱ组（ＨｂＡ１ｃ为１１９７％±１６５％）各７例及对照组（ＨｂＡ１ｃ为４８５％±０２０％）６例的高密度脂蛋白（ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉ... 目的和方法：对糖尿病Ⅰ组（ＨｂＡ１ｃ为７０６％±０６０％）Ⅱ组（ＨｂＡ１ｃ为１１９７％±１６５％）各７例及对照组（ＨｂＡ１ｃ为４８５％±０２０％）６例的高密度脂蛋白（ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＤＬ）糖化进行检测，同时将ＨＤＬ抗血清提纯为抗ＨＤＬＩｇＧ并用辣根过氧化物酶（ｈｏｒｓｅｒｄｉｓｈｐｅｒｉｏｘｉｄａｓｅ，ＨＲＰ）标记。用酶联免疫受体法测定ＨＤＬ与培养的人胚肺成纤维细胞（ｈｕｍａｎｌｕｎｇｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＬＦ）受体特异结合。结果：Ⅰ、Ⅱ组及对照组糖化值分别为３９２６±８１０、７２９４±６４０和２０４０±１１０Ｇｌｙｃｏｇｒｏｕｐ／ＨＤＬ，Ⅰ、Ⅱ组ＨＤＬ的细胞受体特异结合低于对照组（Ｐ＜００１），Ⅱ组低于Ⅰ组（Ｐ＜００１）。结论：糖尿病患者ＨＤＬ糖化高于正常人。 展开更多

关键词 糖尿病 高密度脂蛋白类 受体 HDL

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佛波酯(TPA)促进NIH3T3细胞α_5β_1整合蛋白的合成

11

作者 贺建宇 方新初 +1 位作者 曹立环 查锡良 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第1期61-65,共5页

佛波酯(TPA)是潜在促肿瘤剂,也是蛋白激酶PKC激活剂.TPA能在极低浓度下替代DG激活PKC,从而导致一系列细胞功能变化.应用100nmol/LTPA作用于NIH3T3细胞,观察NIH3T3细胞的粘附变化,发现TPA可促进NIH3T3细胞与基质纤连蛋白的粘附,进一步研... 佛波酯(TPA)是潜在促肿瘤剂,也是蛋白激酶PKC激活剂.TPA能在极低浓度下替代DG激活PKC,从而导致一系列细胞功能变化.应用100nmol/LTPA作用于NIH3T3细胞,观察NIH3T3细胞的粘附变化,发现TPA可促进NIH3T3细胞与基质纤连蛋白的粘附,进一步研究Fn的主要受体α5β1整合蛋白在细胞表面含量,发现TPA作用24h使α5及β1含量分别增加523%和516%.应用3H甘露糖标记N糖链和凝集素柱层析方法分析TPA作用后细胞N糖链总量和组分比,结果均与对照组相仿,说明是通过增加细胞合成整合蛋白α5及β1亚基含量实现的.在TPA作用于细胞的同时,加入PKC抑制剂Sphingosine,发现α5、β1含量和细胞与Fn的粘附均回复至对照组水平,提示TPA增加α5β1整合蛋白合成而增加的细胞与Fn粘附作用,是由PKC介导完成的.此外还发现酪氨酸蛋白激酶抑制剂也阻断TPA增加α5β1整合蛋白含量的作用. 展开更多

关键词 整合蛋白 细胞粘附 蛋白激酶C 佛波酯

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SRS－淋巴瘤细胞染色质超敏位点相关蛋白的研究

12

作者 钟叔平 何开玲 温博贵 《生物化学杂志》 CAS CSCD 1994年第6期747-749,共3页

ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质超敏位点相关蛋白的研究钟叔平，何开玲，温博贵（汕头大学医学院生化教研室，汕头５１５０３１）自１９７６Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ首先报道脱氧核糖核酸酶Ｉ（ＤＮａｓｅＩ）优先消化鸡红细胞核活性基因以来。有... ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质超敏位点相关蛋白的研究钟叔平，何开玲，温博贵（汕头大学医学院生化教研室，汕头５１５０３１）自１９７６Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ首先报道脱氧核糖核酸酶Ｉ（ＤＮａｓｅＩ）优先消化鸡红细胞核活性基因以来。有关ＤＮａｓｅＩ优先水解超敏位点（Ｄ... 展开更多

关键词 淋巴瘤 SRS-淋巴瘤 染色质 超敏位点 蛋白相关

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佛波酯对NIH3T3细胞整合蛋白α_5亚基表达的影响

13

作者 涂立宇 范俊 查锡良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第6期780-783,共4页

１００ｎｍｏｌ／Ｌ佛波酯（１２－Ｏ－ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｂｏｌ１３－ａｃｅｔａｔｅ，ＴＰＡ）作用于ＮＩＨ３Ｔ３细胞２４ｈ，流式细胞仪检测到细胞表面整合蛋白α５亚基含量增加５２．３％．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方... １００ｎｍｏｌ／Ｌ佛波酯（１２－Ｏ－ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｂｏｌ１３－ａｃｅｔａｔｅ，ＴＰＡ）作用于ＮＩＨ３Ｔ３细胞２４ｈ，流式细胞仪检测到细胞表面整合蛋白α５亚基含量增加５２．３％．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法测定结果亦表明整合蛋白α５亚基ｍＲＮＡ量增加，于２ｈ时达到高峰，为对照的４．１４倍．蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）的活性增加趋势与之基本一致．运用ＰＫＣ的抑制剂鞘氨醇（ｓｐｈｉｎｇｏ－ｓｉｎｅ）和酷氨酸激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ，ＴＫ）抑制剂４，５，７－三羟基异黄酮（ｇｅｎｅｓｔｅｉｎ）进一步研究，发现两者均可抑制佛波酯对整合蛋白α５亚基表达的上调作用．提示佛波酯对ＮＩＨ３Ｔ３细胞整合蛋白α５亚基表达的调控与ＰＫＣ和ＴＫ均有关． 展开更多

关键词 佛波酯 整合蛋白 NIH3T3细胞 PKC

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磷脂酰肌醇－4－激酶的的免疫分析

14

作者 张泽林 陈惠黎 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第1期16-21,共6页

在纯化猪肝微粒体磷脂酰肌醇－４－激酶（ＰＩ－４－Ｋ）的基础上，制备该酶的免疫血清、提纯ＩｇＧ，并建立了ＰＩ４－Ｋ的ＥＬＩＳＡ，进行不同组织中ＰＩ４－Ｋ的免疫沉淀分析和免疫定量。结果证明：猪肝微粒体ＰＩ４－Ｋ的抗血清或... 在纯化猪肝微粒体磷脂酰肌醇－４－激酶（ＰＩ－４－Ｋ）的基础上，制备该酶的免疫血清、提纯ＩｇＧ，并建立了ＰＩ４－Ｋ的ＥＬＩＳＡ，进行不同组织中ＰＩ４－Ｋ的免疫沉淀分析和免疫定量。结果证明：猪肝微粒体ＰＩ４－Ｋ的抗血清或抗体ＩｇＧ可沉淀猪肾和猪肺的微粒体膜、猪肝细胞膜和人中性粒细胞细胞膜ＴｒｉｔｏｎＸ－１００增溶液（ＴＸＳＭ）中的ＰＩ４－Ｋ，表明不同组织、不同亚细胞器和不同种属的ＰＩ４－Ｋ有相似的抗原性。猪肝、肾、肺、胃、小肠和大肠ＴＸＳＭ中ＰＩ４－Ｋ的活力和酶蛋白含量相仿，急性中性粒细胞白血病患者的中性粒细胞膜上ＰＩ４－Ｋ的含量和活力都增加３．５倍左右．加上ＰＩ４－Ｋ抗体沉淀各组织ＰＩ４－Ｋ活力和酶蛋白的百分率基本相同，支持文献报道组织中微粒体或细胞膜中的ＰＩＫ主要是ＰＩ４－Ｋ，而免疫性不同的ＰＩ３－Ｋ含量极少的观点． 展开更多

关键词 免疫分析 ELISA 白血病 磷脂酰肌醇 激酶 PI-4-K

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佛波酯对SMMC-7721人肝癌细胞粘附及整合蛋白基因表达的调控作用 被引量：1

15

作者 傅剑 王静英 +1 位作者 张月娥 查锡良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期212-217,共6页

用促癌剂佛波酯（ＰＭＡ）作用于ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞，研究细胞表面的主要粘附分子α５β１整合蛋白基因表达及相应细胞粘附行为的改变．用１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ作用ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞，发现其作用因时间的长... 用促癌剂佛波酯（ＰＭＡ）作用于ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞，研究细胞表面的主要粘附分子α５β１整合蛋白基因表达及相应细胞粘附行为的改变．用１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ作用ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞，发现其作用因时间的长短而异，作用３０、６０、１２０ｍｉｎ分别增加细胞与纤连蛋白（Ｆｎ）粘附１８．８％、３８．７％和５６．６％，作用６、１２ｈ分别降低４４．０％、３７．４％，而不影响与多聚赖氨酸的粘附．使用足量的抗α５和／或抗β１单抗预先封闭细胞与Ｆｎ的结合点，再将细胞与Ｆｎ粘附，发现α５单抗单独使用可将ＳＭＭＣ－７７２１细胞与Ｆｎ的粘附抑制２０％左右，β１单抗则抑制１４％，两者联合使用时可封闭４０％左右的粘附，提示该细胞表面存在除α５β１外的其它整合蛋白在介导着细胞与Ｆｎ的粘附．进一步应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，分析整合蛋白基因表达，发现１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ抑制α５亚基转录，以３０ｍｉｎ最明显，抑制达８３．１％，作用６、１２ｈ抑制率仍为４６．６％、４３．６％．还就ＰＭＡ影响细胞粘附和整合蛋白基因表达的可能机理作了讨论． 展开更多

关键词 细胞粘附 整合蛋白 基因表达 佛波酯 肝肿瘤

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正常人及肝细胞癌患者肝脏及血浆中丙酮酸激酶同工酶免疫测定 被引量：1

16

作者 刘金波 郑榕岚 陈惠黎 《生物化学杂志》 CSCD 1990年第1期82-87,共6页

分别从人肝及鼠肝中高度纯化L型和M_1型丙酮酸激酶(Pyk),制备相应的免抗血清。从抗血清中纯化IgG并水解成F(ab')_2,进而还原成Fab',后者与辣根过氧物酶(HRP)交联成Fab'-HRP,再利用这两种复合物建立了各自的高灵敏夹心ELISA... 分别从人肝及鼠肝中高度纯化L型和M_1型丙酮酸激酶(Pyk),制备相应的免抗血清。从抗血清中纯化IgG并水解成F(ab')_2,进而还原成Fab',后者与辣根过氧物酶(HRP)交联成Fab'-HRP,再利用这两种复合物建立了各自的高灵敏夹心ELISA来免疫定量L及M_2型(与鼠M_1-Pyk有交叉免疫)Pyk,结果发现:正常人肝中95％的Pyk为L型,M_2-Pyk仅占5％,而肝细胞癌中L-Pyk降至正常肝的3.5％,M_2-Pyk却增至正常的14.6倍,以致M_2-Pyk占总量的95.5％。免疫组化研究进一步证实定量的结果,正常人肝L-Pyk染色呈强阳性。M_2-Pyk染色较弱,而肝细胞癌恰好相反,L-Pyk染色明显减退,而M_2-Pyk不仅癌组织染色很深,癌周组织也明显深于正常,而且愈近癌巢,染色愈深。测定血浆Pyk,发现正常人L-Pyk占89.9％,M-Pyk(以M_2计)仅占10.1％。肝细胞癌患者血浆L-Pyk略见降低,为正常值的79.6％,p值在0.02～0.05之间,但血浆M型Pyk明显升高至正常的4.59倍,占Pyk总量的39.6％,并证明主要来源于肝癌组织中的M_2,故M_2-Pyk有可能成为肝细胞癌诊断的新指标。 展开更多

关键词 丙酮酸激酶 肝肿瘤 免疫测定

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胆红素对人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的别构效应 被引量：2

17

作者 夏初临 陈惠黎 《生物化学杂志》 CSCD 1989年第4期301-306,共6页

胆红素是人胎盘谷胱甘肽S—转移酶(GST—π)的别构效应剂,在胆红素存在下,底物谷胱甘肽(GSH)呈同促正协同效应:胆红素浓度愈高,Hill氏系数(n_H)也愈大,胆红素本身对酶的结合也呈同促正协同效应。胆红素还能加速GST-π在缺乏疏基保护剂... 胆红素是人胎盘谷胱甘肽S—转移酶(GST—π)的别构效应剂,在胆红素存在下,底物谷胱甘肽(GSH)呈同促正协同效应:胆红素浓度愈高,Hill氏系数(n_H)也愈大,胆红素本身对酶的结合也呈同促正协同效应。胆红素还能加速GST-π在缺乏疏基保护剂时的自然失活,加速GST-π的氨基被2,4,6—三硝基苯磺酸(TNBS)、胍基被丁二酮以及羧基被N-乙基-N’-(3-二甲胺基丙基)羧二亚胺(EDC)的修饰,但却抑制N-乙基顺丁二酰亚胺(NEMI)对疏基的修饰,胆红素这种对失活作用的影响可能和胆红素引起GST-π空间构象的变化有关,对其他可能性也作了讨论。 展开更多

关键词 胆红素 谷胱甘肽 转移酶

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