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含有HA或myc基因的融合表达载体构建及应用研究
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作者 王琪 方向东 +2 位作者 陈淳 顾建新 戚正武 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期175-178,共4页
目的构建含有HA和myc编码序列的真核细胞融合表达载体,用于验证两种蛋白质之间的相互作用。方法利用寡核苷酸合成和PCR技术,扩增HA和myc的部分编码序列。在哺乳动物细胞表达载体pcDNA3的基础上,构建了pcDNA3HA和pcDNA3myc两种真核融合... 目的构建含有HA和myc编码序列的真核细胞融合表达载体,用于验证两种蛋白质之间的相互作用。方法利用寡核苷酸合成和PCR技术,扩增HA和myc的部分编码序列。在哺乳动物细胞表达载体pcDNA3的基础上,构建了pcDNA3HA和pcDNA3myc两种真核融合表达载体。结果将两种候选蛋白的编码序列分别克隆于上述融合载体,转染Cos7细胞后的表达产物,可利用抗HA或myc的mAb进行Westernblot和免疫共沉淀。结论利用上述系统,可验证两种候选蛋白在哺乳动物细胞中是否具有相互作用。 展开更多
关键词 融合表达载体 哺乳动物细胞 免疫共沉淀 MYC基因 HA基因 载体构建
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TNF-α基因与依托泊甙联合诱导胶质瘤凋亡的实验研究
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作者 张荣 周良辅 +3 位作者 周范民 王晨 王宇倩 顾建新 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期29-31,共3页
目的在体外水平(in vitro)建立对胶质瘤杀伤作用的 TNF-α基因/VP16系统,研究该系统诱导胶质瘤凋亡的作用。方法用逆转录病毒载体将TNF-α基因转染人胶质瘤细胞株SHG-44,经生长抑制试验,比较转TNF-... 目的在体外水平(in vitro)建立对胶质瘤杀伤作用的 TNF-α基因/VP16系统,研究该系统诱导胶质瘤凋亡的作用。方法用逆转录病毒载体将TNF-α基因转染人胶质瘤细胞株SHG-44,经生长抑制试验,比较转TNF-α基因前后 SHG-44细胞对依托泊甙(Etioposide, VP16)的敏感性,并通过形态学及流式细胞仪检测 VP16诱导转基因细胞凋亡的情况。结果生长抑制试验表明,转染TNF-α基因后的SHC-44细胞对yP16的敏感性是转基因前细胞的10倍(P<0.01),IC50为0.8μg/mL。流式细胞检测表明,VP16对转TNF-α基因细胞有较强的诱导凋亡的能力。结论VP16对转TNF-α基因SHG-44细胞诱导凋亡的能力大大增加,表明TNF-α基因/VP16系统对胶质瘤的基因治疗有效。 展开更多
关键词 胶质瘤 基因治疗 TNF-Α基因 依托泊甙 凋亡
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PAI-1在TGFβ_1基因和反义TGFβ_1基因转染人肝癌细胞株中的表达 被引量:1
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作者 林文生 张农 +2 位作者 张颂文 顾建新 郭慕依 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期221-223,共3页
目的 :通过对人肝癌细胞株 (SMMC 772 1)转染TGF β1基因及反义TGF β1基因 ,观察该细胞PAI 1表达的变化。方法 :采用电穿孔法进行基因转染 ,并用Westernblot、Northernblot法加以鉴定后 ,分别应用Westernblot及Northernblot观察该细胞... 目的 :通过对人肝癌细胞株 (SMMC 772 1)转染TGF β1基因及反义TGF β1基因 ,观察该细胞PAI 1表达的变化。方法 :采用电穿孔法进行基因转染 ,并用Westernblot、Northernblot法加以鉴定后 ,分别应用Westernblot及Northernblot观察该细胞表达PAI 1mRNA的变化。结果 :过表达的TGF β1细胞克隆PAI 1mRNA表达均高于对照组 ,而低表达TGF β1者PAI 1mRNA表达低于对照组。结论 :TGF β1可能通过上调肝癌细胞PAI 1的表达 ,在肝癌浸润和转移过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 肝肿瘤 TGF-β1 PAI-1 基因转染 肿瘤侵润
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在大鼠发育过程中β1,4半乳糖基转移酶的组织分布及其变化的研究
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作者 江松敏 李溪冰 +1 位作者 邵东敏 顾建新 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第2期195-199,共5页
用HPLC纯化了荧光标记的底物(Gnβ1-2Ma1-6(Gnβ1-2Mα1-3)Mβ1-4Goβ1-4Gn-PA)用β-1,4-半乳糖基转移酶的荧光标记底物的HPLC测定方法,测定了在发育过程中大鼠肝,肾,脑中的酶活性的变化,结果表明,(1)在正常成年大鼠中,各... 用HPLC纯化了荧光标记的底物(Gnβ1-2Ma1-6(Gnβ1-2Mα1-3)Mβ1-4Goβ1-4Gn-PA)用β-1,4-半乳糖基转移酶的荧光标记底物的HPLC测定方法,测定了在发育过程中大鼠肝,肾,脑中的酶活性的变化,结果表明,(1)在正常成年大鼠中,各组织酶活性具有组织特异性,(2)不同的发育期,其酶活性不同。胎鼠(孕20d,以下同)时最高,以后就渐渐下降,各组织酶活力变化幅度是不一致的,这些变化的生理意义有待子进一步研究. 展开更多
关键词 半乳糖基转移酶 发育 酶活性 组织分布
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细胞诱导分化剂对HL60细胞β-1,4-半乳糖基转移酶活性的影响 被引量:1
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作者 江松敏 吴国强 顾建新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第1期97-102,共6页
用荧光标记的受体底物(Gnβ1-2Mα1-6(Gnβ1-2Mα1-3)Mβ1-4Gnβ1-4(Fucα1-6)Gn-PA),结合高效液相层析(HPLC)建立了细胞β-1,4-半乳糖基转移酶的活性检测方法.研究了HL6... 用荧光标记的受体底物(Gnβ1-2Mα1-6(Gnβ1-2Mα1-3)Mβ1-4Gnβ1-4(Fucα1-6)Gn-PA),结合高效液相层析(HPLC)建立了细胞β-1,4-半乳糖基转移酶的活性检测方法.研究了HL60细胞在体外低血清培养后不同的时间其酶活性的变化,发现12至24h酶活性达到一个高峰,为50.14pmol/min(106cel),此时细胞处在分裂间期,其它各测定时间变化不大.用PMA,RA等细胞诱导分化剂处理HL60细胞株时,发现其活性发生了较明显的变化,PMA诱导的细胞其酶活性在24h变化最大,升高到对照的1.32倍;而RA处理的细胞其酶活性在72h变化最大,升高到对照的2.15倍. 展开更多
关键词 半乳糖基转移酶 细胞诱导分化剂
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在大鼠诱发肝癌中β1,4半乳糖基转移酶的高效液相层析测定
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作者 江松敏 李溪冰 +1 位作者 邵东敏 顾建新 《上海医科大学学报》 CSCD 1996年第4期261-265,共5页
研究大鼠诱发肝癌与β1,4半乳糖基转移酶(β1,4GT)的相关性。用高效液相层析(HPLC)纯化了荧光标记的受体底物(Gnβ1-2Mα1-6(Gnβ1-2Mα1-3)Mβ1-4Gnβ1-2Gn-PA),用β1,4GT... 研究大鼠诱发肝癌与β1,4半乳糖基转移酶(β1,4GT)的相关性。用高效液相层析(HPLC)纯化了荧光标记的受体底物(Gnβ1-2Mα1-6(Gnβ1-2Mα1-3)Mβ1-4Gnβ1-2Gn-PA),用β1,4GT的荧光标记受体底物的HPLC测定方法测定了大鼠诱发肝癌中肝组织的酶活性,发现随着诱癌周数的增加,肝脏酶活性逐渐增高,在第14周癌前期时酶活性达到最高,以后有所回落,但仍保持在高于对照组的水平。同时我们也发现,在胎鼠(孕20d)及出生第一天中酶活性与癌前期相似,说明在肝组织增生期此酶非常活跃。 展开更多
关键词 肝肿瘤 半乳糖基转移酶 高效液相色谱
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