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人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定: 1; 作者窦金民郭莉莉 +4 位作者刘宏磊陈接根黄海燕宋后燕汤其群《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期419-422,426,共5页; 目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋... 展开更多; 关键词人睫状神经营养因子生物活性鉴定纯化克隆 WESTERN印迹背根神经节神经元大肠埃希菌 CNTF 原核表达载体重组表达质粒离子交换层析重组蛋白生物学活性 PCR方法神经元细胞结构基因实验观察细胞存活菌体蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性: 2; 作者张宇清侯敏 +3 位作者王霞孙兴会李平朱运松《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期313-316,共4页; 目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细... 展开更多; 关键词 PAI-2 突变体 TNF-Α 肿瘤坏死因子-Α 细胞凋亡纤溶酶原激活剂抑制物2型; 在线阅读下载PDF 职称材料

PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性: 3; 作者张宇清侯敏 +3 位作者王霞孙兴会李平朱运松《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期531-533,536,共4页; 目的为了进一步了解纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在细胞内的定位对其抗凋亡活性的影响。方法构建绿色荧光蛋白质(EGFP)与PAI-2入核突变体融合蛋白质的表达质粒;转染HeLa细胞,荧光显微镜下比较野生型PAI-2与PAI-2的入核突变体在HeL... 展开更多; 关键词 PAI-2 抗凋亡活性纤溶酶原激活剂抑制物2型肿瘤坏死因子-Α 细胞凋亡; 在线阅读下载PDF 职称材料

人反义VEGF_(121) cDNA表达质粒的构建及其对膀胱癌细胞增殖的影响被引量：1: 4; 作者金建军王跃祥 +4 位作者丁强李纲瞿连喜宋后燕张元芳《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期317-320,共4页; 目的构建人反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,研究反义基因治疗对膀胱癌细胞增殖的影响。方法将VEGF121反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定。用此真核表达重组质粒转染人膀胱癌细胞株T24,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR法测定转染前后... 展开更多; 关键词膀胱癌人反义VEGFl21cDNA 质粒构建反义基因治疗血管内皮生长因子细胞增殖; 在线阅读下载PDF 职称材料

肺癌细胞高、低转移株中uPA基因启动子的序列和活性被引量：1: 5; 作者王丽石李平 +1 位作者谭理朱运松《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期243-246,共4页; 目的　分析人肺巨细胞癌高、低转移株中uPA基因启动子序列差异和这种差异对启动子活性的影响。方法　用PCR分段扩增人肺巨细胞癌高 (95D)和低 (95C)转移细胞株中uPA基因启动子序列 ,将uPA启动子亚克隆到荧光素酶为报告基因的 pGL3 Basi... 展开更多; 关键词肺癌转移株 UPA基因启动子序列活性癌细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

胚胎干细胞来源的内皮细胞构建内皮化血管支架被引量：1: 6; 作者钟贞杨健 +3 位作者李平谭理应其龙宋后燕《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期335-339,共5页; 目的探索胚胎干细胞定向分化为血管内皮细胞,并用于构建内皮化血管支架,为临床心血管疾病治疗提供实验基础。方法采用改良后单层分化体系,血管内皮生长因子(VEGF)作为独立诱导因子定向诱导胚胎干细胞分化为血管内皮细胞,用RT-PCR法检测... 展开更多; 关键词胚胎干细胞分化内皮化血管支架; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定: 1; 作者窦金民郭莉莉刘宏磊陈接根黄海燕宋后燕汤其群; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室; 出处《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期419-422,426,共5页; 文摘目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。; 关键词人睫状神经营养因子生物活性鉴定纯化克隆 WESTERN印迹背根神经节神经元大肠埃希菌 CNTF 原核表达载体重组表达质粒离子交换层析重组蛋白生物学活性 PCR方法神经元细胞结构基因实验观察细胞存活菌体蛋白; Keywords human ciliary neurotrophic factor recombinant protein expression and purification dorsal root ganglion; 分类号 R394.8 [医药卫生—医学遗传学] R927 [医药卫生—药学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性: 2; 作者张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室; 出处《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期313-316,共4页; 基金国家自然科学基金(30070412)资助项目; 文摘目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细胞,RT-PCR鉴定,筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株。用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性,并利用计算机同源模建,比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化。结果突变体PAI-2M能抑制TNF-α诱导的Hela细胞凋亡,而PAI-2D则不能。PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象,而PAI-2D CD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化。结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性,而与PENF结构域(PENF73～76)无关。; 关键词 PAI-2 突变体 TNF-Α 肿瘤坏死因子-Α 细胞凋亡纤溶酶原激活剂抑制物2型; Keywords Cells Cloning Computer aided analysis; 分类号 Q513.2 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性: 3; 作者张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室; 出处《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期531-533,536,共4页; 基金国家自然科学基金(30070412)资助项目; 文摘目的为了进一步了解纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在细胞内的定位对其抗凋亡活性的影响。方法构建绿色荧光蛋白质(EGFP)与PAI-2入核突变体融合蛋白质的表达质粒;转染HeLa细胞,荧光显微镜下比较野生型PAI-2与PAI-2的入核突变体在HeLa细胞内分布的差异;用MTT法检测PAI-2入核突变体抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导细胞凋亡的活性。结果在核定位序列的引导下,几乎所有的PAI-2都进入了细胞核,而野生型PAI-2则弥散分布于HeLa细胞内。MTT法检测发现,当PAI-2被定位于细胞核内时,丧失其抗凋亡的功能。结论 PAI-2在细胞内的定位能影响其抗凋亡的活性,并且当用TNF-α诱导HeLa细胞凋亡时,野生型PAI-2在细胞内的分布没有发生明显的改变。; 关键词 PAI-2 抗凋亡活性纤溶酶原激活剂抑制物2型肿瘤坏死因子-Α 细胞凋亡; Keywords Assays Cells Cloning DNA Microscopic examination; 分类号 Q55 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人反义VEGF_(121) cDNA表达质粒的构建及其对膀胱癌细胞增殖的影响被引量：1: 4; 作者金建军王跃祥丁强李纲瞿连喜宋后燕张元芳; 机构复旦大学附属华山医院泌尿外科上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室; 出处《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期317-320,共4页; 基金卫生部临床重点(97030221)资助项目; 文摘目的构建人反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,研究反义基因治疗对膀胱癌细胞增殖的影响。方法将VEGF121反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定。用此真核表达重组质粒转染人膀胱癌细胞株T24,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR法测定转染前后T24细胞中VEGF mRNA表达,ELISA法检测转染前后T24细胞中VEGF蛋白表达。利用MTT法、软琼脂克隆形成试验、流式细胞仪和电镜等检测转染前后T24细胞的生物学性状。结果获得反义VEGF121 cDNA质粒表达重组质粒。VEGF121反义RNA部分阻断了T24细胞中VEGF表达,转染后肿瘤细胞VEGF mRNA和VEGF蛋白表达都明显减少;转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变。结论成功构建了反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,转染该质粒可明显抑制膀胱癌细胞增殖,为膀胱癌的基因治疗提供了一定的实验依据。; 关键词膀胱癌人反义VEGFl21cDNA 质粒构建反义基因治疗血管内皮生长因子细胞增殖; Keywords vasular endothdial growth factor antisense cDNA consrtuction bladder cancer proliferation; 分类号 R737.14 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名肺癌细胞高、低转移株中uPA基因启动子的序列和活性被引量：1: 5; 作者王丽石李平谭理朱运松; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室; 出处《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期243-246,共4页; 基金国家自然科学基金 ( 3 0 170 3 98)资助项目; 文摘目的　分析人肺巨细胞癌高、低转移株中uPA基因启动子序列差异和这种差异对启动子活性的影响。方法　用PCR分段扩增人肺巨细胞癌高 (95D)和低 (95C)转移细胞株中uPA基因启动子序列 ,将uPA启动子亚克隆到荧光素酶为报告基因的 pGL3 Basic载体上 ,转染 95D或 95C细胞 ,分析启动子活性。结果　 95D与 95C细胞uPA基因启动子序列中有 3个位点碱基的差别 ,95D分别是 - 1933bp为“T” ,- 4 2 4bp为“C” ,- 96bp为“G” ,而 95C分别为“C”、“T”、“T”。这些不同对启动子活性的影响未见差别。在 - 2 14 3/ - 182 4之间存在uPA基因启动子的增强子序列 ,在 - 182 4 / - 4 0 8之间存在uPA启动子的负性调控序列。结论　uPA在 95D与 95C细胞中表达的差别不是直接由于启动子序列差别引起的。; 关键词肺癌转移株 UPA基因启动子序列活性癌细胞; Keywords urokinase-type plasminogen activator high and low metastatic human lung cancer cell strains promoter sequence tumor invasion and metastasis; 分类号 R734.2 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名胚胎干细胞来源的内皮细胞构建内皮化血管支架被引量：1: 6; 作者钟贞杨健李平谭理应其龙宋后燕; 机构复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室英国爱丁堡大学干细胞研究中心; 出处《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期335-339,共5页; 文摘目的探索胚胎干细胞定向分化为血管内皮细胞,并用于构建内皮化血管支架,为临床心血管疾病治疗提供实验基础。方法采用改良后单层分化体系,血管内皮生长因子(VEGF)作为独立诱导因子定向诱导胚胎干细胞分化为血管内皮细胞,用RT-PCR法检测分化时程各时间点内皮特异性标志的表达,用免疫荧光法检测分化体系中的内皮细胞蛋白标志。将分化成熟的内皮细胞种植于支架表面,构建内皮化血管支架。结果胚胎干细胞全能性分子标志Oct3／4,早期内皮标志Flk-1,Tie-2,PECAM-1,以及成熟内皮标志VE-cadherin在胚胎干细胞分化体系中呈现一定的转录时序性;免疫荧光结果显示分化细胞Flk-1,VE-cadheiin阳性,血管支架被表达VE-cadherin的内皮细胞覆盖。结论我们改良了胚胎干细胞分化为血管内皮细胞的方法,并用于探索内皮化血管支架的构建。; 关键词胚胎干细胞分化内皮化血管支架; Keywords Embryonic stem cell differentiation endothelialization stent; 分类号 R362 [医药卫生—病理学] Q813.7 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定	窦金民郭莉莉刘宏磊陈接根黄海燕宋后燕汤其群	《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2005	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性	张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松	《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2003	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性	张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松	《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2003	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	人反义VEGF_(121) cDNA表达质粒的构建及其对膀胱癌细胞增殖的影响	金建军王跃祥丁强李纲瞿连喜宋后燕张元芳	《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2003	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	肺癌细胞高、低转移株中uPA基因启动子的序列和活性	王丽石李平谭理朱运松	《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2004	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	胚胎干细胞来源的内皮细胞构建内皮化血管支架	钟贞杨健李平谭理应其龙宋后燕	《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2007	1	在线阅读下载PDF 职称材料