分析与综合——医学遗传学的回顾与思考 被引量：1

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作者 曾溢滔 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期115-116,共2页

系统回顾了医学遗传学的发展历程,从形式遗传学、细胞遗传学、生化遗传学直到近代的分子遗传学;对分析与综合这一贯穿医学遗传学发展史的研究思路讲行评述,并对今后医学遗传学的发展前景作一思考。

关键词 医学遗传学 分析 综合

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双同源盒诱导小鼠胚胎干细胞向胚外内胚层分化的机制研究

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作者 洪磊 郭传亮 +4 位作者 蔡勤 李婉睿 曾溢滔 薛燕 曾凡一 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1359-1369,共11页

目的·探索双同源盒(double homeobox,DUX)蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)向胚外内胚层(extraembryonic endoderm,XEN)分化潜能的影响及可能的作用机制。方法·使用慢病毒体系在mESC中构建过表达DUX细胞... 目的·探索双同源盒(double homeobox,DUX)蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)向胚外内胚层(extraembryonic endoderm,XEN)分化潜能的影响及可能的作用机制。方法·使用慢病毒体系在mESC中构建过表达DUX细胞系,利用流式细胞术检测DUX过表达前后2细胞样细胞(2-cell-like cell,2CLC)的比例,并使用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测2细胞期特异性基因,如内源性Dux、锌指和SCAN结构域的蛋白质4c(zinc finger and SCAN domain containing 4c,Zscan4c)、锌指蛋白352(zinc finger protein 352,Zfp352)和鼠内源性反转录病毒-聚合酶(murine endogenous retrovirus-L polymerase,MERVL-pol)的表达。RT-qPCR检测过表达DUX的mESC多能性因子[nanog homeobox(Nanog)、kruppel-like transcription factor 4(Klf4)、性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,Sox2)、八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,Oct4)]和自然分化状态下各胚层标志性基因[内胚层(endodermal):GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,Gata4)、Gata6、Sox17;外胚层(ectodermal):微Ⅲ型β微管蛋白3(tubulin beta 3 classⅢ,Tubb3)、巢蛋白(Nestin);中胚层(mesodermal):心脏和神经嵴衍生物表达转录本1(heart and neural crest derivatives expressed 1,Hand1)、肌源性分化蛋白1(myogenic differentiation 1,Myod1)、激酶插入结构域受体(kinase insert domain protein receptor,Flk1)]的表达。挖掘公共转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)数据,通过分析胚外内胚层标志基因的表达水平,明确DUX对mESC向胚外内胚层分化的影响;通过对差异基因的功能及通路进行基因本体论(Gene Ontology,GO)富集分析、京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析和基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA),找出DUX作用的信号通路;深入分析已有的染色质免疫共沉淀技术结合二代测序(chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-seq)数据,探究DUX的潜在靶基因。结果·2CLC比例升高和2细胞期标志基因表达上调,证明已成功构建过表达DUX细胞系。分子生物学实验显示过表达DUX后可有效维持mESC的多能性,与公共RNA-seq数据分析结果一致;差异基因分析发现,内胚层基因出现特异性上调;诱导mESC自然分化后,RT-qPCR检测实验表明XEN标志基因(Gata4、Gata6、Sox17)的mRNA表达出现显著上调(P<0.001),而中胚层、外胚层基因没有特异性变化。GSEA结果提示DUX可能激活了视黄醇代谢信号通路,ChIP-seq数据解析进一步揭示在DUX结合的peaks中存在已知的视黄酸受体motif,可激活下游与XEN发育相关的靶基因。结论·DUX与视黄酸信号通路密切关联,预示其激活了视黄酸信号通路,促进mESC倾向XEN分化。 展开更多

关键词 小鼠胚胎干细胞 胚外内胚层细胞 双同源盒 视黄酸信号通路

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医学实验室试剂管理系统的构建与实践

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作者 周密 唐汇祥 +1 位作者 龙凌婕 曾凡一 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2024年第6期209-213,共5页

为实现医学实验试剂管理的信息化、网络化建设,以提升医学实验室管理质量和能力,设计了一套医学实验室试剂管理系统。该系统集成了基础设置、试剂入库、试剂出库、库存管理模块,通过钉钉平台及氚云开发工具实现低成本、定制化的管理功... 为实现医学实验试剂管理的信息化、网络化建设,以提升医学实验室管理质量和能力,设计了一套医学实验室试剂管理系统。该系统集成了基础设置、试剂入库、试剂出库、库存管理模块,通过钉钉平台及氚云开发工具实现低成本、定制化的管理功能定制。该系统的构建遵循CNAS按照国际标准ISO15189:2022对医学实验室质量和能力认可的要求,实现了自助扫码出库、过期与低库存预警、多仓库管理和多项目独立管理等功能,兼具开发周期短、管理高效、便于维护等特点。实践表明,该系统可以满足医学实验室教学、科研工作中试剂管理的需求以及精准实验室标准化的管理要求,并在医学实验室试剂管理中起到了良好示范作用,为实验室其他应用场景提供有益借鉴。 展开更多

关键词 试剂管理 医学实验室 管理系统

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牛胚胎性别鉴定与取样胚胎移植应用技术的研究 被引量：42

4

作者 胡明信 吴学清 +6 位作者 曾溢滔 黄英 陈美珏 高建明 谢富强 张美兰 任兆瑞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第6期487-495,共9页

本研究应用ＰＣＲ技术扩增牛ＳＲＹ序列进行奶牛胚胎性别鉴定。经１０９枚鲜、冻胚的移植，获鲜胚移值妊娠率５８．６％（３４／５８），常规冷冻胚胎移植妊娠率４４．４％（１２／２７），一步细管冷冻解冻胚胎移值妊娠率１６．７％（... 本研究应用ＰＣＲ技术扩增牛ＳＲＹ序列进行奶牛胚胎性别鉴定。经１０９枚鲜、冻胚的移植，获鲜胚移值妊娠率５８．６％（３４／５８），常规冷冻胚胎移植妊娠率４４．４％（１２／２７），一步细管冷冻解冻胚胎移值妊娠率１６．７％（４／２４）。犊牛性别验证与ＳＲＹ鉴定结果均相符合。实验中对胚胎发育时期的划分，胚胎质量评定和胚龄的确定，胚龄与受体发情时间在移植中的关系，胚胎的切割取样，取样胚胎的冷冻进行了研究。 展开更多

关键词 牛 胚胎 SRY 性别鉴定 移植

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氯化高铁血红素诱导K562细胞中β-珠蛋白基因表达的研究 被引量：2

5

作者 贾春平 陈美珏 +1 位作者 黄淑帧 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期399-402,共4页

以绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报道基因,构建了在β-珠蛋白启动子驱动及HS2元件调控下的重组表达载体HG,用脂质体转染法将其转染到K562细胞中,并用RT-PCR方法及流式细胞仪检测氯化高铁血红素（Hm）对K562细胞中β-珠蛋白基因表达及重组... 以绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报道基因,构建了在β-珠蛋白启动子驱动及HS2元件调控下的重组表达载体HG,用脂质体转染法将其转染到K562细胞中,并用RT-PCR方法及流式细胞仪检测氯化高铁血红素（Hm）对K562细胞中β-珠蛋白基因表达及重组载体HG在K562细胞中瞬时表达的影响。结果显示:用30μmol/L Hm诱导K562细胞24、28及72h后,不仅其γ-珠蛋白mRNA水平升高,其β-珠蛋白mRNA水平也明显上升,而且这种诱导作用在诱导24、48h后比较明显;Hm还可增强重组表达载体HG在K562细胞中的瞬时表达。提示Hm诱导红系分化的机理可能与γ-β-珠蛋白基因的转换机制相关。 展开更多

关键词 氯化高铁血红素 诱导 K562细胞 Β-珠蛋白 基因表达

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反义核酸对β-地中海贫血基因(IVS-2-654C→T)剪接缺陷抑制作用的研究 被引量：2

6

作者 宫澜 孙琼 +2 位作者 任兆瑞 黄淑帧 曾溢滔 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第5期39-43,共5页

应用体外转录和体外剪接系统，以体外转录产生的特异性反义RNA封闭IVS－2－654→T突变基因中3’隐匿剪接位点和5’异常剪接位点，使之失去活性，以减少异常加工的mRNA，且部分恢复了正常剪接途径，其正常剪接mRNA的水平［β／（β十β... 应用体外转录和体外剪接系统，以体外转录产生的特异性反义RNA封闭IVS－2－654→T突变基因中3’隐匿剪接位点和5’异常剪接位点，使之失去活性，以减少异常加工的mRNA，且部分恢复了正常剪接途径，其正常剪接mRNA的水平［β／（β十β）］从处理前的0．25上升到处理后的0．46—0．61。研究结果提示了应用反义核酸临床治疗β－地贫（IVS－2－654C→T突变）的可能性。 展开更多

关键词 反义核酸 地中海贫血 基因剪接缺陷 基因治疗

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除精浆对海门山羊精液冷冻效果影响的初步研究 被引量：3

7

作者 李拥军 黄永宏 +1 位作者 田华荣 李亚东 《中国草食动物》 2003年第6期12-13,共2页

选用海门山羊进行除精浆对精液冷冻效果影响的研究。选用三个处理组进行除精浆试验 ,结果表明以 10 0 0r/min ,10分钟处理组效果最好 ,其冷冻解冻后精子活力显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,采精穿卵试验 (SPA)亦表明其精子穿卵活力显... 选用海门山羊进行除精浆对精液冷冻效果影响的研究。选用三个处理组进行除精浆试验 ,结果表明以 10 0 0r/min ,10分钟处理组效果最好 ,其冷冻解冻后精子活力显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,采精穿卵试验 (SPA)亦表明其精子穿卵活力显著高于对照组 (P <0 0 5 )。研究表明除精浆后进行海门山羊精液冷冻具有良好的效果。 展开更多

关键词 海门山羊 精液 精浆 冷冻 采精穿卵试验 SPA 精子活力 稀释液 离心

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可用于基因表达研究的转基因小鼠乳腺上皮细胞模型的构建 被引量：1

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作者 蒋世忠 闫亚彬 +3 位作者 谢飞 王娟 黄英 任兆瑞 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期955-960,共6页

目的建立转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,为研究乳腺内环境因素调控外源基因的表达和制备高效表达外源基因的乳腺生物反应器提供研究平台。方法通过机械破碎和胶原酶消化的方法获取人转铁蛋白(hTF)转基因小鼠的乳腺上皮细胞,并进行体外原... 目的建立转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,为研究乳腺内环境因素调控外源基因的表达和制备高效表达外源基因的乳腺生物反应器提供研究平台。方法通过机械破碎和胶原酶消化的方法获取人转铁蛋白(hTF)转基因小鼠的乳腺上皮细胞,并进行体外原代培养。经胰蛋白酶纯化后,绘制乳腺上皮细胞生长曲线;免疫组织化学方法检测角蛋白18的表达;透射电子显微镜(透射电镜)观察乳腺上皮细胞超微结构;流式细胞仪检测细胞周期分布;显微镜下分析乳腺上皮细胞核型。将牛催乳素真核表达载体(pCMV-bPRL)转染至转基因乳腺上皮细胞中,检测外源bPRL的表达。结果乳腺上皮细胞生长曲线呈"S"形;免疫荧光组织化学分析结果显示hTF转基因小鼠乳腺上皮细胞角蛋白18呈阳性表达;透射电镜观察发现乳腺上皮细胞胞核较大、偏位,有双核或多核,胞质丰富,空泡、粗面内质网、高尔基体丰富;流式细胞仪检测结果显示:乳腺上皮细胞增殖活跃,G2/M期+S期细胞占15%;细胞核型分析结果显示处于分裂期的细胞具有正常的二倍体,染色体完整。pCMV-bPRL转染乳腺上皮细胞24 h后,上清液中检测到bPRL的表达。结论体外培养的转基因乳腺上皮细胞具有类似体内细胞的生物学特征,并可表达真核表达载体,为研究环境因素对乳腺功能的影响及制备乳腺生物反应器提供了一种细胞模型。 展开更多

关键词 转基因小鼠 乳腺上皮细胞 真核表达载体 牛催乳素

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牛血清白蛋白(BSA)对海门山羊精液冷冻效果影响的初步研究 被引量：4

9

作者 李拥军 黄永宏 +1 位作者 俞晓荣 李亚东 《中国草食动物》 2003年第z1期136-,共1页

用冷冻稀释液添加BSA进行影响海门山羊冷冻精液品质的研究。选用三个处理组进行比较试验,结果表明:以添加6％BSA处理组效果最好,其冷冻解冻后精子活力高于对照组,但差异不显著(P>0.05),而SPA试验表明精子穿卵活力极显著高于对照组(P&... 用冷冻稀释液添加BSA进行影响海门山羊冷冻精液品质的研究。选用三个处理组进行比较试验,结果表明:以添加6％BSA处理组效果最好,其冷冻解冻后精子活力高于对照组,但差异不显著(P>0.05),而SPA试验表明精子穿卵活力极显著高于对照组(P<0.01)。研究表明在冷冻稀释液中添加BSA进行海门山羊精液冷冻具有良好的效果。 展开更多

关键词 海门山羊 BSA 冷冻精液

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APM和Liped两程序在β-地中海贫血特征连锁分析上的比较研究

10

作者 吕宝忠 陈捷 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1992年第6期16-19,共4页

Liped程序已广泛地应用在遗传方式明确的遗传病(或性状)家系的连锁分析上,具有精确、简便、快速和多效(如还可考虑突变的影响,以及依赖年龄的外显率等分析上)诸优点;但显然不能用于遗传方式尚未搞清的遗传病家系的连锁分析。晚近由Week... Liped程序已广泛地应用在遗传方式明确的遗传病(或性状)家系的连锁分析上,具有精确、简便、快速和多效(如还可考虑突变的影响,以及依赖年龄的外显率等分析上)诸优点;但显然不能用于遗传方式尚未搞清的遗传病家系的连锁分析。晚近由Weeks编制的APM(Affected-Fedigree-Member,暂译为家系患者连锁分析)程序突破了Liped程序的上述局限性,具有更广泛的应用,且有更强的检测力;但该法只能估计连锁的显著性,还不能揭示连锁强度,因而还难以用于人类整个基因组的序列分析研究上。 本文以一个β-地中海贫血特征的大家系为实例,对上述两程序作了具体的比较研究。结果表明了上述两程序分别具有的优缺点,因此在连锁分析上可相互补充。 展开更多

关键词 APM Liped 连锁分析 地中海贫血

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羟基脲(Hu)治疗β-地中海贫血的研究——Hu对珠蛋白基因表达的影响

11

作者 黄淑帧 任兆瑞 +5 位作者 陈美珏 许洪平 曾溢滔 G.P.Rodgers 曾凡一 A.N.Schechter 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1993年第7期1-5,共5页

关键词 地中海贫血 珠蛋白 羟基脲 基因

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反义c-fos寡脱氧核苷酸对淋巴瘤细胞株SAC-IIB_2恶性表型抑制的研究 被引量：4

12

作者 殷连华 孔宪寿 +1 位作者 严开平 郑颂国 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第1期58-60,共3页

已发现SAC-IIB_2淋巴瘤细胞株中原癌基因c-fos呈过度表达.针对小鼠c-fos cDNA第2-7编码序列,设计合成了18聚反义、正义和无义的寡脱氧核苷酸.结果发现,反义c-fos寡脱氧核苷酸能促使SAC-IIB_2的细胞形态向成熟阶段分化并抑制其增殖速率,... 已发现SAC-IIB_2淋巴瘤细胞株中原癌基因c-fos呈过度表达.针对小鼠c-fos cDNA第2-7编码序列,设计合成了18聚反义、正义和无义的寡脱氧核苷酸.结果发现,反义c-fos寡脱氧核苷酸能促使SAC-IIB_2的细胞形态向成熟阶段分化并抑制其增殖速率,同时降低其对裸鼠的致瘤性及Fos蛋白的表达,但对SAC-IIB_2的细胞动力学没有明显的影响.而正义和无义的c-fos寡脱氧核苷酸没有相应的作用.提示反义c-fos寡脱氧核苷酸能特异地抑制小鼠淋巴瘤SAC-IIB_2细胞的恶性表型. 展开更多

关键词 淋巴瘤 细胞株 c-fox 寡脱氧核苷酸 反义技术

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奶牛体外受精胚胎的性别控制研究 被引量：1

13

作者 李晓晨 李华 +2 位作者 蔡勤 曹辉 黄英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第11期119-122,共4页

为加速母牛胚胎的生产,实现性控制胚胎产业化和体外扩繁优质品种的奶业工程发展,本研究在体外受精技术(invitro fertilization,IVF)不断成熟和完善的基础上,通过对牛非性控IVF胚胎与常规人工受精体内胚胎移植的妊娠成功率及其两者出生... 为加速母牛胚胎的生产,实现性控制胚胎产业化和体外扩繁优质品种的奶业工程发展,本研究在体外受精技术(invitro fertilization,IVF)不断成熟和完善的基础上,通过对牛非性控IVF胚胎与常规人工受精体内胚胎移植的妊娠成功率及其两者出生后牛的性别比例进行比较分析,结果发现,两组妊娠成功率基本相同,且IVF胚胎出生的公牛比例高于体内胚;采用性控和非性控精液进行IVF试验,并对非性控IVF胚胎及性控IVF胚胎用牛Y染色体性别决定特异基因(SRY)核心序列进行分子生物学性别鉴定,结果显示,性控IVF胚胎的公牛比例显著低于普通IVF胚胎;此外,作者还比较了性控IVF与普通非性控IVF的囊胚发育率,结果显示两者并无显著差异。以上研究结果证明,体外扩繁优质良种母牛的奶业工程必须依靠性别控制体外授精技术来提高其效率和有效性。 展开更多

关键词 牛体外扩繁技术 体外受精 胚胎移植 性别控制

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试管牛和试管羊胚胎性别的鉴定 被引量：49

14

作者 黄淑帧 陈美珏 +4 位作者 黄英 孙琼 陆建英 任兆瑞 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期65-68,共4页

奶牛和山羊的卵母细胞经过体外成熟、体外受精和体外发育至桑椹期 ,在显微操作下 ,吸取4～6个胚胎细胞 ,应用巢式PCR技术对其DNA进行SRY基因的测定以进行胚胎性别鉴定。共有27枚转有外源基因的试管牛胚胎和207枚转基因试管羊胚胎进行了... 奶牛和山羊的卵母细胞经过体外成熟、体外受精和体外发育至桑椹期 ,在显微操作下 ,吸取4～6个胚胎细胞 ,应用巢式PCR技术对其DNA进行SRY基因的测定以进行胚胎性别鉴定。共有27枚转有外源基因的试管牛胚胎和207枚转基因试管羊胚胎进行了SRY基因检测。选取10枚经过性别鉴定的牛胚胎移植于8头受体母牛和124枚已知性别的羊胚胎移植于44头受体母羊 ,移植后妊娠率分别为37 5% (牛 ,3/8)和61 4% (羊 ,27/44)。最后产生1头分娩牛犊和2头流产胎牛以及14头分娩羊羔和2头流产胎羊 ,它们的性别与胚胎性别鉴定的结果完全相符。 展开更多

关键词 体外受精 性别鉴定 早期胚胎 转基因家畜

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应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合 被引量：12

15

作者 肖艳萍 奚鹰 +1 位作者 黄文英 黄英 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期232-236,共5页

应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%～ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %～ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %～ 96 %的间期核未出现杂交信号。结... 应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%～ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %～ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %～ 96 %的间期核未出现杂交信号。结果表明 ,该FISH实验条件能对转基因整合位点进行高效特异检测。本文分析的两家系转基因小鼠均为单位点整合 ,但整合位点不同。各家系内F1到F4 代的转基因小鼠均可检出整合染色体 ,且整合位点相同 ,表明外源基因稳定整合并遗传给后代。 展开更多

关键词 荧光原位杂交 检测 人凝血因子Ⅸ 转基因小鼠 染色体 整合位点

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山羊β酪蛋白基因克隆及序列分析 被引量：9

16

作者 王强 陈美珏 +2 位作者 任兆瑞 黄淑帧 曾溢滔 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期17-23,共7页

用LongPCR技术克隆山羊 β酪蛋白 (CSN2 )全基因 13.7kb的序列 (GenBank登录号 :AF4 0 90 96 ) .利用PCR RFLP方法鉴定第 14和 192位氨基酸残基相应的核苷酸序列中出现的 2个多态性位点 ,其中第 192位氨基酸残基处的TspRⅠ位点是Saanen... 用LongPCR技术克隆山羊 β酪蛋白 (CSN2 )全基因 13.7kb的序列 (GenBank登录号 :AF4 0 90 96 ) .利用PCR RFLP方法鉴定第 14和 192位氨基酸残基相应的核苷酸序列中出现的 2个多态性位点 ,其中第 192位氨基酸残基处的TspRⅠ位点是Saanen奶山羊CSN2基因中新发现的 1个多态性位点 .生物信息学方法分析山羊CSN2基因可见 ,非编码区中的SINE和LINE序列内含多种乳蛋白基因表达调控元件 。 展开更多

关键词 山羊 β酪蛋白 基因克隆 PCR-RFLP 序列分析

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核型异常的两性畸形山羊2例报告 被引量：4

17

作者 陆建英 陈雪银 +1 位作者 黄英 任兆瑞 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期160-162,共3页

本文报道2例两性畸形的山羊,它们均具雌雄两套生殖器官,染色体组型分析显示它们均为性染色体嵌合体,核型为60,XX XY,两头畸形山羊的XX细胞系的比例分别为42%和54%,XY细胞系的比例分别为58%和46%。

关键词 山羊 两性畸形 性染色体异常

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应用荧光原位杂交分析移植山羊体内的人源细胞 被引量：2

18

作者 肖艳萍 陈美珏 +3 位作者 盛敏 巩芷娟 王舒 黄淑帧 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期129-133,共5页

目的 应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析人造血干细胞(human hematopoietiestem cell,hHSC)经宫内移植至山羊体内后人源细胞的存在、比例及其动态变化。 方法 用人特异17号染色体卫星DNA探针对13头移植山... 目的 应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析人造血干细胞(human hematopoietiestem cell,hHSC)经宫内移植至山羊体内后人源细胞的存在、比例及其动态变化。 方法 用人特异17号染色体卫星DNA探针对13头移植山羊进行间期FISH(interphase FISH,IFISH)分析,并用人男性特异Y染色体卫星DNA探针对其中2头移值人男性HSC的山羊进行IFISH分析。标本采用外周血细胞滴片、骨髓涂片和肝脏组织印片。结果 在13头移植山羊中,11头山羊体内有人源细胞存在,其中2头为人男性细胞,证实这些山羊为人/山羊异种移植嵌合体;人源细胞比例随山羊月龄递减,最长已存活21个月;所检测月龄段的移植山羊外周血、骨髓和肝脏组织中人源细胞比例小于1‰,但其中2头山羊肝脏组织中人源细胞集中一处,局部比例高达207.92‰和392.41‰。结论 FISH检测出人源细胞能在山羊体内存在并长期存活,表明山羊是经宫内移植hHSC的合适受体;人源细胞在外周血和骨髓中比例低,而在肝脏组织局部比例高,提示山羊肝脏组织局部内环境适于人源细胞存活、增殖和分化。 展开更多

关键词 人造血于细胞 荧光原位杂交 移植 山羊

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山羊β-酪蛋白基因启动子指导人血清白蛋白基因在小鼠组织中的特异性表达 被引量：5

19

作者 曹新 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期518-520,共3页

对本所构建的pcDNA3.1- β6 .7hALBm表达载体行尾静脉注射直接转染哺乳期母鼠的活体组织。通过RT-PCR检测hALBm基因在小鼠几种组织中的表达来研究该构建体的组织特异性。结果 :构建体在受试鼠组织中的表达显示了较好的乳腺组织特异性。... 对本所构建的pcDNA3.1- β6 .7hALBm表达载体行尾静脉注射直接转染哺乳期母鼠的活体组织。通过RT-PCR检测hALBm基因在小鼠几种组织中的表达来研究该构建体的组织特异性。结果 :构建体在受试鼠组织中的表达显示了较好的乳腺组织特异性。说明构建具有较长 5′端上游乳蛋白调控区的乳腺特异性表达载体对组织特异性表达是必需的。 展开更多

关键词 启动子 表达载体 特异性表达 山羊β-酪蛋白基因 人血清白蛋白

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TPO内含子Ⅴ可显著增强人血小板生成素基因在乳腺细胞中的表达 被引量：4

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作者 宁云山 李妍 +3 位作者 周明乾 周宏伟 王小宁 曾溢滔 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期537-541,共5页

人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)基因组包括6个外显子和5个内含子,内含子在其表达过程中可能扮演着重要作用.为了研究人TPO基因组中不同内含子对TPO表达的影响,构建可在转基因动物乳腺中高水平表达人TPO的乳腺特异性表达质粒.本研究... 人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)基因组包括6个外显子和5个内含子,内含子在其表达过程中可能扮演着重要作用.为了研究人TPO基因组中不同内含子对TPO表达的影响,构建可在转基因动物乳腺中高水平表达人TPO的乳腺特异性表达质粒.本研究以65kb的山羊β-casein启动子为调控元件,构建了包括人TPOcDNA(pTPOA)、TPOintronⅠ-TPOcDNA(pTPOB)、ΔTPOintronⅠ-TPOcDNA(pTPOC)、TPOintronⅤ-TPOcDNA(pTPOD)和TPOgDNA(pTPOE)等5种TPO乳腺特异性表达质粒,并在人乳腺细胞HC-11细胞上进行了瞬间表达研究.在转染48h后,通过双抗体夹心的ELISA方法定量分析上述质粒在HC-11细胞上的表达水平.结果表明,含有内含子Ⅴ的pTPOD的表达量最高,而含有整个基因组TPO的pTPOE表达水平最低.为了进一步证实pTPOD可在乳腺细胞中高水平表达,将pTPOD经脂质体包埋后注射到泌乳期山羊的乳腺中.结果显示,在山羊乳汁中可连续14d检测到人TPO的表达.上述实验证实,人TPO基因组中的内含子V可显著提高TPO在HC-11细胞内的表达水平,并提示内含子Ⅴ中可能含有特殊的调控序列. 展开更多

关键词 人血小板生成素 内含子 基因表达 山羊β-casein

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