Notch信号对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞凋亡的保护作用 被引量：6

1

作者 秦秀虹 卢建民 +3 位作者 邵明阳 张珍珍 孙晓晶 马翔 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第9期806-809,815,共5页

目的探讨Notch1信号对高糖情况下多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1[Poly(ADPribose)polymeras-1,PARP-1]和核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的p50亚单位(NF-κB50)介导的人视网膜血管内皮细胞(retinal vascular endothelial cells,... 目的探讨Notch1信号对高糖情况下多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1[Poly(ADPribose)polymeras-1,PARP-1]和核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的p50亚单位(NF-κB50)介导的人视网膜血管内皮细胞(retinal vascular endothelial cells,RVECs)凋亡的抑制作用。方法体外培养人RVECs及HEK293T细胞,并进行传代,同时构建高糖(葡萄糖浓度为30 mmol·L-1)人RVECs细胞模型。构建p CMV-ScriptNotch1和p CMV-Script-DLL4质粒,酶切鉴定后Western Blot法检测重组质粒表达目的基因的效果,同时合成si Notch1并转染高糖培养的人RVECs,Western Blot法检测Notch基因敲除效果。应用免疫共沉淀及Western Blot法检测si Notch1对高糖下PARP-1和NF-κB的相互作用的影响;应用Western Blot法检测高糖条件下Notch1/DLL4上调和下调后人RVECs中PARP-1、p-AKT、NF-κB50及caspase-3的表达变化。结果人RVECs复苏后24 h贴壁,细胞呈扁平梭形,3 d左右细胞开始融合呈铺路石样,单层生长,铺满瓶底,并可见接触抑制现象。免疫共沉淀结果显示高糖组培养的人RVECs其PARP-1结合的NF-κB50的量较正常对照组增加;将si Notch1转染高糖组培养的人RVECs后或同时加入DLL4,则人RVECs中PARP-1结合的NF-κB50的量较前增加显著,提示Notch能抑制高糖下PARP-1和NF-κB50的相互作用。Western Blot检测结果显示高糖条件下,Notch1和DLL4上调后其PARP-1及caspase-3表达量较前显著降低;Notch1下调后其PARP-1及caspase-3表达量较前增加;p-AKT表达量则相反;提示Notch信号能抑制高糖诱导的PARP-1及caspase-3的激活及表达。结论高糖情况下Notch信号可调控PARP-1和NF-κB的相互作用,并抑制PARP-1激活引起的人RVECs的凋亡。 展开更多

关键词 NOTCH1 多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1 核因子-κB 视网膜血管内皮细胞 糖尿病视网膜病变

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多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1通过激活NF-κB途径导致高糖人视网膜血管内皮细胞凋亡 被引量：5

2

作者 卢建民 张珍珍 +2 位作者 郑玥 马翔 秦秀虹 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第2期111-115,共5页

目的探讨多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1[poly(adenosine diphosphate-ribose)polymeras-1,PARP-1]和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在高糖人视网膜血管内皮细胞(retinal vascular endothelial cells,RVEC)中的相互作用及其在人RVE... 目的探讨多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1[poly(adenosine diphosphate-ribose)polymeras-1,PARP-1]和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在高糖人视网膜血管内皮细胞(retinal vascular endothelial cells,RVEC)中的相互作用及其在人RVEC中的表达定位及作用机制。方法体外培养人RVEC及HEK293T细胞,并进行传代,同时构建高糖人RVEC细胞模型。构建PARP-EGFP及Flag-NF-κB质粒,酶切鉴定后转染高糖培养的人RVEC,Western blot法检测重组质粒表达目的基因的效果,并应用Western blot法和免疫共沉淀法检测高糖人RVEC中PARP-1和NF-κB的相互作用。PARP-EGFP和Flag-NF-κB质粒共转染人RVEC,激光共聚焦扫描显微镜检测PARP-1和NF-κB在高糖人RVEC中的定位及其相互作用。结果人RVEC复苏后24 h贴壁,细胞呈扁平梭形,3 d左右细胞开始融合呈铺路石样,单层生长,铺满瓶底,并可见接触抑制现象。成功构建PARP-EGFP及Flag-NF-κB质粒,并有效表达目的基因。免疫共沉淀结果显示PARP-1和NF-κB是相互作用的蛋白质,高糖组NF-κB p50的条带比正常对照组明显增粗,并且高糖情况下PARP-1结合NF-κB的量较正常对照组明显增加。激光共聚焦扫描显微镜结果显示PARP和NF-κB均表达于正常的人RVEC的细胞核和核周区域,当受到高浓度葡萄糖影响后,PARP-1和NF-κB均集中表达于细胞核内,尤以NF-κB最显著。结论 PARP-1和NF-κB是相互作用的蛋白质,血糖增高时,PARP-1可能进入细胞核内并结合同时进入细胞核的NF-κB,激活NF-κB信号通路,引起RVEC凋亡,导致DR的发生。 展开更多

关键词 多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1 核因子-ΚB 视网膜血管内皮细胞 糖尿病视网膜病变

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强力霉素诱导携带人血管内皮生长因子A-shRNA的1/2型重组腺相关病毒的包装及鉴定 被引量：3

3

作者 秦秀虹 范松涛 +1 位作者 卢建民 张珍珍 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第3期224-228,共5页

目的通过Helper-Free腺相关病毒包装系统包装由强力霉素(doxycycline,DOX)诱导的携带hVEGFA-shRNA-GFP的1/2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV),测定病毒滴度并检测其对人视网膜血管内皮细胞(human ret-inal va... 目的通过Helper-Free腺相关病毒包装系统包装由强力霉素(doxycycline,DOX)诱导的携带hVEGFA-shRNA-GFP的1/2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV),测定病毒滴度并检测其对人视网膜血管内皮细胞(human ret-inal vascular endothelial cell,HRVEC)血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor,VEGFA)的敲除作用。方法将AAV-293细胞复苏、培养后传代。用磷酸钙转染法将质粒pAAV-hVEGFA-shRNA-GFP、1/2型腺相关病毒质粒(pAAV1/2)和pHelper质粒共转染AAV-293细胞,包装生成带有hVEGFA-shRNA-GFP的1/2型rAAV,将此rAAV感染AAV-293细胞,荧光显微镜观察病毒转染和感染效率。斑点杂交法测定病毒滴度。将HRVEC分为3组培养,正常对照组、HRVEC+rAAV组及HRVEC+rAAV+DOX诱导组,Western-blotting法检测VEGFA的敲除作用。结果 3种质粒共转染AAV-293细胞,发现病毒包装过程中细胞培养基颜色由红色变为橘黄色,细胞变圆并脱离培养皿底部,漂浮于培养基中。荧光显微镜下观察可见,24h后AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP),72h表达GFP细胞数比例可达95%～100%;共转染成功,包装得到DOX诱导的携带有hVEGFA-shRNA-GFP的1/2型rAAV,斑点杂交法检测病毒滴度为1015v.g.·L-1。HRVEC于重组病毒感染后第3天高表达GFP。免疫印迹法检测正常对照组、HRVEC+rAAV组及HRVEC+rAAV+DOX诱导组HRVEC中VEGFA表达量的变化发现:HRVEC+rAAV组其VEGFA表达量较正常对照组明显下降,HRVEC+rAAV+DOX诱导组其VEG-FA表达量较HRVEC+rAAV组明显降低。提示rAAV对细胞内VEGFA具有显著的敲除作用,并且DOX有加强VEGFA敲除的作用,病毒包装成功。结论 DOX诱导的携带有hVEGFA-shRNA-GFP的1/2型rAAV的包装获得成功,收获病毒具有较高滴度,能成功地感染HRVEC,并对HRVEC的VEGFA具有明显敲除作用,同时DOX有加强VEGFA敲除的作用,为眼底新生血管疾病基因治疗的研究提供了实验基础。 展开更多

关键词 重组腺相关病毒 SHRNA 强力霉素 血管内皮生长因子

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自发荧光技术在病理性近视黄斑变性诊治中的研究进展 被引量：2

4

作者 徐吉 樊莹 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第3期290-292,共3页

眼底自发荧光是一种新近发展的眼底成像技术,作为一种非侵入性的技术手段,已经较好的运用于眼底疾病的诊断和治疗。目前,在黄斑变性,尤其是老年性黄斑变性的诊治方面已经得到较为广泛的运用,随着研究的深入和拓展,其荧光的产生以及变化... 眼底自发荧光是一种新近发展的眼底成像技术,作为一种非侵入性的技术手段,已经较好的运用于眼底疾病的诊断和治疗。目前,在黄斑变性,尤其是老年性黄斑变性的诊治方面已经得到较为广泛的运用,随着研究的深入和拓展,其荧光的产生以及变化的机制也在不断完善。同样,由于自发荧光技术在近视性黄斑变性时显像表现不同,因此,这种技术也为更好地诊治高度近视引起的黄斑变性提供了新的研究手段。 展开更多

关键词 自发荧光 病理性近视 黄斑变性

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小胶质细胞在糖尿病视网膜病变中的作用 被引量：9

5

作者 易秋雪 张敬法 柳林 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期2048-2052,共5页

糖尿病视网膜病变(DR)作为糖尿病最常见的并发症之一,是世界范围内工作人群主要的致盲疾病。DR曾被认为是视网膜微血管病变。随着研究的不断深入,视网膜神经元病变和中低度炎症也被证实是DR的重要发病机制。小胶质细胞是视网膜内的常驻... 糖尿病视网膜病变(DR)作为糖尿病最常见的并发症之一,是世界范围内工作人群主要的致盲疾病。DR曾被认为是视网膜微血管病变。随着研究的不断深入,视网膜神经元病变和中低度炎症也被证实是DR的重要发病机制。小胶质细胞是视网膜内的常驻巨噬细胞,主要分布在内层视网膜,负责监控视网膜内微环境变化。在异常刺激下,小胶质细胞活化并与视网膜内不同类型的细胞发生复杂的相互作用。在DR中,小胶质细胞被激活,活化的小胶质细胞内关键因子或多条通路被激活,产生大量的炎症因子、趋化因子等。同时,活化的小胶质细胞增殖能力及迁移增强,外层视网膜内小胶质细胞数量增多。小胶质细胞的过度活化最终引起视网膜神经元凋亡、血-视网膜屏障破坏,导致视力丢失。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 小胶质细胞 炎症 血-视网膜屏障

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黄斑囊样水肿的病因及治疗进展 被引量：9

6

作者 冯竞仰 樊莹 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第12期1196-1200,共5页

黄斑囊样水肿是许多眼部病变的并发症,亦是导致严重视功能障碍的主要原因,可继发于糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞、眼部炎症、白内障、视网膜色素变性及其他眼内手术等。临床上主要依靠OCT及FFA联合诊断。目前有许多治疗黄斑囊样水... 黄斑囊样水肿是许多眼部病变的并发症,亦是导致严重视功能障碍的主要原因,可继发于糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞、眼部炎症、白内障、视网膜色素变性及其他眼内手术等。临床上主要依靠OCT及FFA联合诊断。目前有许多治疗黄斑囊样水肿的方法,包括口服药物、玻璃体内药物注射、激光、手术治疗等,各种治疗方法都有其优缺点。本文主要对黄斑囊样水肿的病因及治疗进展作一综述。 展开更多

关键词 黄斑囊样水肿 视网膜 玻璃体内注射 口服药物 玻璃体切割术

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细胞因子信号抑制因子3与糖尿病视网膜病变 被引量：1

7

作者 李倩 郑志 许迅 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第8期785-788,共4页

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是一种常见的糖尿病慢性并发症,早期的视网膜血管渗漏和晚期的新生血管形成是其重要的病理改变,而血管内皮生长因子以及各种炎症因子、瘦素、血管紧张素II等在其发病中发挥重要作用。细胞因... 糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是一种常见的糖尿病慢性并发症,早期的视网膜血管渗漏和晚期的新生血管形成是其重要的病理改变,而血管内皮生长因子以及各种炎症因子、瘦素、血管紧张素II等在其发病中发挥重要作用。细胞因子信号抑制因子3作为调节细胞因子信号通路的一种重要蛋白,通过调节Janus激酶/信号转导转录激活因子(JAK/STAT)信号通路,抑制上述各种因子的作用,成为未来治疗DR的新靶点。本文就细胞因子信号抑制因子3在DR发病中的作用进行综述。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 细胞因子信号抑制因子3 Janus激酶/信号转导转录激活因子

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视锥-视杆营养不良的发病分子机制研究现状 被引量：1

8

作者 顾蕾 韩冬梅 +2 位作者 舒婉婷 冯亚兰 吴星伟 《临床眼科杂志》 2015年第4期381-383,共3页

视锥-视杆营养不良(CoRD)是一类以黄斑区先出现光感受器细胞萎缩凋亡的遗传性眼底疾病,视锥视杆相继受损并且以视锥细胞受损为主。CoRD部分进展型病例的视网膜萎缩范围可随病程逐渐扩大至视网膜周边部。其遗传方式包括常染色体隐性遗传(... 视锥-视杆营养不良(CoRD)是一类以黄斑区先出现光感受器细胞萎缩凋亡的遗传性眼底疾病,视锥视杆相继受损并且以视锥细胞受损为主。CoRD部分进展型病例的视网膜萎缩范围可随病程逐渐扩大至视网膜周边部。其遗传方式包括常染色体隐性遗传(ar CoRD),常染色体显性遗传(ad CoRD),X-染色体连锁遗传(CoRD3)。随着基因检测技术的发展和普及,目前已经定位的突变基因有21个。本文主要就各个基因所表达的蛋白功能归类,探讨CoRD发病的可能机制作一综述。CoRD的生化分子机制大致可分为以下5类:光传导通路、视网膜代谢、视网膜组织的发育和维持、细胞结构蛋白及胞内运输异常和光感受器突触及胞内电传导异常。 展开更多

关键词 视锥-视杆营养不良 致病基因 发病机制

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IGF-1参与调控眼球生长的研究进展 被引量：1

9

作者 邹悦 樊莹 《国际眼科杂志》 CAS 2012年第7期1304-1307,共4页

眼球生长是一个在视觉信号诱导下的主动过程,视网膜、脉络膜和巩膜都参与了这一过程,并且有多种信号分子在调控眼球生长的过程中发挥了重要作用。IGF-1作为一种强有力的促生长因子在维持和控制细胞生长、增殖、分化、成熟和再生等方面... 眼球生长是一个在视觉信号诱导下的主动过程,视网膜、脉络膜和巩膜都参与了这一过程,并且有多种信号分子在调控眼球生长的过程中发挥了重要作用。IGF-1作为一种强有力的促生长因子在维持和控制细胞生长、增殖、分化、成熟和再生等方面具有重要作用,在眼内也有广泛的表达,并且参与了眼科多种疾病的发生发展。近年来,它在调控眼球生长过程中发挥的作用受到了广泛的关注。本文对IGF-1在促进眼球主动生长的调控作用展开综述。 展开更多

关键词 眼球生长 胰岛素样生长因子1 近视

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高度近视黄斑劈裂的研究进展 被引量：3

10

作者 冯竞仰 樊莹 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第4期384-387,共4页

视网膜劈裂是高度近视常见并发症之一。发生在中心凹处的劈裂称为黄斑劈裂。如在其病程中同时合并有视网膜脱离、黄斑裂孔、视网膜前膜、玻璃体视网膜牵拉等疾病可导致视力下降。临床上主要借助OCT来观察其形态特征。目前有许多治疗黄... 视网膜劈裂是高度近视常见并发症之一。发生在中心凹处的劈裂称为黄斑劈裂。如在其病程中同时合并有视网膜脱离、黄斑裂孔、视网膜前膜、玻璃体视网膜牵拉等疾病可导致视力下降。临床上主要借助OCT来观察其形态特征。目前有许多治疗黄斑劈裂的方法,包括玻璃体手术、巩膜手术、激光治疗等,各有优缺点。本文主要对高度近视黄斑劈裂的病因、转归及治疗新进展作一综述。 展开更多

关键词 黄斑劈裂 高度近视 病因 转归

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豹纹状眼底在近视性黄斑病变中的相关研究进展 被引量：2

11

作者 吕含怡 许迅 《临床眼科杂志》 2020年第1期86-89,共4页

豹纹状眼底是最早期的近视性黄斑病变(MM),表现为眼底后极部脉络膜大血管结构清晰可见,主要由视网膜色素上皮及脉络膜毛细血管的透光性增加所致。依据标准眼底照片建立的豹纹状眼底严重程度分级标准以及根据豹纹状改变所在位置建立的分... 豹纹状眼底是最早期的近视性黄斑病变(MM),表现为眼底后极部脉络膜大血管结构清晰可见,主要由视网膜色素上皮及脉络膜毛细血管的透光性增加所致。依据标准眼底照片建立的豹纹状眼底严重程度分级标准以及根据豹纹状改变所在位置建立的分类标准有助于进一步探究其发生及发展的特点及影响因素。目前研究发现影响近视性豹纹状眼底的危险因素包括更高的年龄、更高的近视屈光度、更长的眼轴及更薄的脉络膜厚度,其中年龄、屈光度、眼轴长度等的因素将会影响豹纹状眼底的进一步加重及进展。展望未来,不同年龄层面的豹纹状眼底有不同的发展规律,仍需要长期大样本的纵向随访研究来进一步揭示近视性豹纹状眼底的进程及预后,为临床提供预防及干预的可靠依据。 展开更多

关键词 豹纹状眼底 近视性性黄斑病变 危险因素

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培哚普利及高糖对RF/6A细胞SOCS3表达的影响

12

作者 李倩 郑志 +1 位作者 顾青 许迅 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第3期201-204,共4页

目的探讨培哚普利及高浓度葡萄糖对猴视网膜脉络膜内皮细胞(RF/6A)中细胞因子信号抑制因子3(suppressor of cytokine signaling3,SOCS3)表达的影响及机制。方法 RF/6A细胞分别用高浓度葡萄糖(25mmol.L-1)孵育0h、2h、4h、8h、24h、48h... 目的探讨培哚普利及高浓度葡萄糖对猴视网膜脉络膜内皮细胞(RF/6A)中细胞因子信号抑制因子3(suppressor of cytokine signaling3,SOCS3)表达的影响及机制。方法 RF/6A细胞分别用高浓度葡萄糖(25mmol.L-1)孵育0h、2h、4h、8h、24h、48h;用高糖(25mmol.L-1)、培哚普利(10μmol.L-1)、Janus激酶(janus kinase2,JAK2)抑制剂AG490(10μmol.L-1)、活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC,10mmol.L-1)分别干预24h后,采用Western blotting及RT-PCR检测细胞中SOCS3蛋白及mRNA的表达。结果 正常培养条件下,RF/6A细胞中SOCS3蛋白低水平表达,高糖刺激2h、4h、8h、24h均较0h明显升高(P<0.001),高糖刺激48h时下降到正常水平,与0h相比差异无统计学意义(P>0.05)。AG490、NAC均可抑制高糖作用后SOCS3蛋白和mRNA的表达升高,与高糖组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。培哚普利则可显著上调RF/6A细胞中SOCS3蛋白及mRNA表达,与高糖组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.001)。结论 高糖及培哚普利可显著上调视网膜脉络膜血管内皮细胞中SOCS3表达;培哚普利的这一作用可能与其对ROS/JAK2/STAT3通路的抑制有关。 展开更多

关键词 高糖 培哚普利 细胞因子信号抑制因子3 Janus激酶/信号转导转录激活因子

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作者/读者来信

13

作者 牛蔚然 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第8期1698-1698,共1页

关键词 眼科 杂志 研究生

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