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激光显微切割分选少量胃癌细胞中PSCA基因的SNP分析 被引量:2
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作者 杨祎 郭妍 +2 位作者 赵小东 刘炳亚 邵志峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期567-573,共7页
随着基因组关联分析方法的应用,越来越多与胃癌相关的易感基因被发现.易感基因的多态性检测已逐步进入胃癌临床诊断和研究.然而,利用少量胃粘膜细胞开展单核苷酸多态性(SNP)分析对胃癌进行早期诊断常遇下述困难,一是少量胃癌细胞混杂在... 随着基因组关联分析方法的应用,越来越多与胃癌相关的易感基因被发现.易感基因的多态性检测已逐步进入胃癌临床诊断和研究.然而,利用少量胃粘膜细胞开展单核苷酸多态性(SNP)分析对胃癌进行早期诊断常遇下述困难,一是少量胃癌细胞混杂在多种细胞中,异常信号常易被淹没,二是细胞量极少,因此获得的基因组DNA量微,进行多位点或全基因组分析存在困难.本文利用激光显微切割技术分选少量胃癌细胞,结合全基因组放大技术,进行胃癌相关的前列腺干细胞抗原基因(PSCA)的SNP分析.通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和克隆测序方法分析,在分选的胃癌细胞中检测到PSCA的rs2976392位点胃癌相关的"A"等位与rs2294008位点胃癌相关的"T"等位.研究结果表明,所采用的全基因组放大方法保真性高,经过分选的胃癌细胞中SNP位点的检测灵敏度和可靠性大为提高.所建立的少量细胞基因多位点检测方法将同样应用于其它肿瘤和组织的少量细胞研究中,全基因组放大产物也可进行高通量的基因芯片和第二代测序研究. 展开更多
关键词 胃癌 少量细胞 全基因组放大 单核苷酸多态性(SNP) 前列腺干细胞抗原基因(PSCA)
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PEG修饰对PLL-EGF基因载体靶向结合作用的影响
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作者 郭妍 顾健人 徐宇虹 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第5期518-524,共7页
聚阳离子基因载体系统由于安全性好和便于设计等优点,近年来在基因治疗中的应用发展迅速.在进行基因药物的体内靶向输送时,目前国际上主要通过在基因输送系统中修饰聚乙二醇(PEG)和靶向分子来提高体内输送的稳定性和靶向性.PEG的修饰可... 聚阳离子基因载体系统由于安全性好和便于设计等优点,近年来在基因治疗中的应用发展迅速.在进行基因药物的体内靶向输送时,目前国际上主要通过在基因输送系统中修饰聚乙二醇(PEG)和靶向分子来提高体内输送的稳定性和靶向性.PEG的修饰可能会遮蔽靶向分子的功能呈现,因此建立定量分析方法评价PEG修饰对靶向结合作用的影响非常重要.将连接有表皮生长因子(EGF)的聚赖氨酸(PLL)基因载体作为研究模型,建立BIAcore检测方法,比较PLL-EGF,PEG7000修饰的PLL-EGF,PEG20000修饰的PLL-EGF对表皮生长因子受体(EGFR)的结合和解离速率,评价PEG修饰对PLL-EGF靶向功能呈现的影响.结果表明,PEG7000的修饰降低了EGF和EGFR之间的结合速率,提高了解离速率,整体减弱了靶向分子的靶向结合能力.PEG20000的修饰进一步减弱靶向分子功能的呈现.因此在进行靶向型聚阳离子基因输送系统设计时,考察PEG修饰对靶向结合能力的影响程度非常重要.该研究结果也对其他基因载体系统的设计提供必要的参考. 展开更多
关键词 聚阳离子基因输送系统 聚乙二醇(PEG) 表皮生长因子(EGF) BIACORE 聚赖氨酸(PLL)
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肿瘤细胞表面柯萨奇病毒-腺病毒受体与5型腺病毒感染效率的关系 被引量:2
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作者 任鹏康 韦芳 +5 位作者 李惠明 王丰 张巨峰 陈霞芳 李宗海 黄倩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第3期209-213,共5页
目的:探讨不同肿瘤细胞系柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和整合素的表达水平与5型腺病毒感染效率的关系,为腺病毒基因治疗研究奠定基础。方法:利用瞬时转染CAR的真核表达质粒提高肿瘤细胞表面CAR的表达,应用抗体封闭细胞表面的CAR和整合素... 目的:探讨不同肿瘤细胞系柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和整合素的表达水平与5型腺病毒感染效率的关系,为腺病毒基因治疗研究奠定基础。方法:利用瞬时转染CAR的真核表达质粒提高肿瘤细胞表面CAR的表达,应用抗体封闭细胞表面的CAR和整合素后,通过流式细胞仪和荧光素酶分析法测定腺病毒Ad5-CMV-EGFP和Ad5-CMV-Luc对肿瘤细胞的感染效率和基因表达水平的变化。结果:不同肿瘤细胞表面CAR和整合素的表达水平是不同的,其中SMMC-7721和A549细胞CAR的表达量最高,而K562细胞CAR的表达水平最低;荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5-CMV-EGFP对肿瘤细胞的感染效率,结果显示5型腺病毒对于SMMC-7721和A549细胞的感染效率最高,而对于K562细胞则很低;瞬时转染表达CAR的真核质粒可提高多种肿瘤细胞表面CAR的表达,较大幅度提高了5型腺病毒的感染效率。而抗体封闭肿瘤细胞表面的CAR或整合素后,腺病毒感染效率显著下降。结论:肿瘤细胞表面CAR和整合素的表达水平决定了腺病毒对肿瘤细胞的感染效率。 展开更多
关键词 腺病毒 柯萨奇病毒-腺病毒受体 整合素 感染 基因治疗
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新多肽配体GE11与表皮生长因子受体的结合能力分析 被引量:3
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作者 郭妍 李宗海 +1 位作者 顾健人 徐宇虹 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1318-1321,共4页
应用亲和毛细管电泳(ACE)分析方法,对表皮生长因子受体(EGFR)和新多肽配体GE11之间的结合能力进行分析。结果表明,EGFR与多肽配体GE11之间存在特异性相互作用,考察EGFR在不同浓度GE11溶液中的迁移情况,采用非线性、双倒数、Y-倒数和X-倒... 应用亲和毛细管电泳(ACE)分析方法,对表皮生长因子受体(EGFR)和新多肽配体GE11之间的结合能力进行分析。结果表明,EGFR与多肽配体GE11之间存在特异性相互作用,考察EGFR在不同浓度GE11溶液中的迁移情况,采用非线性、双倒数、Y-倒数和X-倒数4个数据处理方法得到较好的数据拟合,并测得结合常数。该文为筛选多肽配体以及测定受体与多肽配体之间的结合常数提供了简便的方法,将有力推动肿瘤靶向药物输送的研究。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 多肽配体 亲和毛细管电泳 结合常数
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建立基于超薄切片的高分辨成像技术解析组织的精细空间结构 被引量:3
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作者 吕春梅 孟军 +2 位作者 李晓林 李小卫 郭妍 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期121-126,共6页
目的建立基于超薄切片方法的高分辨三维成像技术,提高Z轴分辨率,并用于组织的精细结构研究。方法组织样品用LRWhite树脂渗透聚合后,用钻石刀将组织切片切成50~1 000 nm的连续半薄或超薄切片,具体切片的厚度即Z轴的分辨率。切片经甲基蓝... 目的建立基于超薄切片方法的高分辨三维成像技术,提高Z轴分辨率,并用于组织的精细结构研究。方法组织样品用LRWhite树脂渗透聚合后,用钻石刀将组织切片切成50~1 000 nm的连续半薄或超薄切片,具体切片的厚度即Z轴的分辨率。切片经甲基蓝-洋红染色或多重抗体标记后,利用全自动显微镜对连续切片进行成像,通过二维拼接和三维重构获得组织高分辨的三维空间信息。结果对人正常结肠组织和小鼠肝脏进行高分辨成像分析,获得比传统显微镜更高的分辨效果和更丰富的结构细节。结合多重抗体染色方法,对小鼠脑组织微管蛋白的分布进行了高分辨三维成像。结论所建立的高分辨三维成像技术适用于各种组织的空间精细结构研究,超薄切片方法同时为超高分辨显微成像提供Z轴的解决方案。 展开更多
关键词 超薄切片 组织 高分辨 显微镜 抗体标记
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