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基于四重iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法分析雌二醇和它莫西芬对MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质含量影响的研究 被引量:5
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作者 倪国新 郭立海 +5 位作者 朱镭 郭妍 徐学敏 林标扬 刘建华 李伟 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1283-1287,共5页
应用体外iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法对雌二醇刺激、雌二醇与它莫西芬共同处理,将它莫西芬处理与正常培养的MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质表达的差异进行了比较分析。结果表明:各实验组与对照组之间存在数种上调或下调1倍以上的差异... 应用体外iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法对雌二醇刺激、雌二醇与它莫西芬共同处理,将它莫西芬处理与正常培养的MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质表达的差异进行了比较分析。结果表明:各实验组与对照组之间存在数种上调或下调1倍以上的差异表达蛋白质,雌二醇可显著改变74种蛋白质的含量,雌二醇与它莫西芬共同处理引起26种蛋白质水平的显著变化,它莫西芬引起18种蛋白质表达的明显改变。各组之间既有变化趋势相同的蛋白质,也有变化趋势相反的蛋白质。 展开更多
关键词 iTRAQ标记 LC-MALDI-TOF-TOF 雌二醇 它莫西芬
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CRISPR/Cas9技术的应用性研究 被引量:3
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作者 舒磊磊 甲芝莲 +2 位作者 吴勇浒 索伦 贾丽玲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1316-1323,共8页
旨在探索CRISPR/Cas9技术的新应用,本研究通过在小鼠遗传操作(Genetic manipulation)中使用该技术,创建了一种在活体组织内研究基因功能的方法。通过胚胎电转、免疫组化和PCR分析等手段,结果发现,针对DCX基因进行编辑,再现了DCX下调导... 旨在探索CRISPR/Cas9技术的新应用,本研究通过在小鼠遗传操作(Genetic manipulation)中使用该技术,创建了一种在活体组织内研究基因功能的方法。通过胚胎电转、免疫组化和PCR分析等手段,结果发现,针对DCX基因进行编辑,再现了DCX下调导致神经元迁移障碍的表型,说明该技术能够用于小鼠遗传操作中下调基因表达;其次,该技术还成功应用于Pcdhα基因簇的编辑并研究了基因簇恒定区的功能;最后,通过基因型鉴定发现,胚胎电转中使用CRISPR/Cas9会导致目的基因的敲除、反转和重复事件的发生。综上所述,在小鼠胚胎电转中使用CRISPR/Cas9技术,能够成功编辑目的基因,从而实现活体组织内研究基因的在体功能。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 遗传操作 基因敲除 基因反转 基因重复
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二代靶向测序在CRISPR/Cas9靶区筛选中的应用性研究 被引量:1
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作者 吴海波 边雪娇 +1 位作者 贾丽玲 索伦 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1587-1595,共9页
旨在利用二代靶向测序技术比较不同靶区对CRISPR/Cas9基因编辑结局的影响,为该技术应用过程中的靶区筛选提供技术参考。本研究进行如下试验:1)以小鼠Pyk2基因为研究对象,针对其第一外显子区设计3个靶区,通过打靶质粒构建、细胞转染及转... 旨在利用二代靶向测序技术比较不同靶区对CRISPR/Cas9基因编辑结局的影响,为该技术应用过程中的靶区筛选提供技术参考。本研究进行如下试验:1)以小鼠Pyk2基因为研究对象,针对其第一外显子区设计3个靶区,通过打靶质粒构建、细胞转染及转染细胞DNA二代靶向测序等手段发现,不同靶区总体的基因编辑(Indels)效率相差较大(site1:32.0%;site2:7.9%;site3:69.5%),编辑修复的偏好性也存在较大区别;而对于同一靶区,总编辑效率在2组试验重复中较为稳定(site1:31.8%vs 32.3%;site2:7.4%vs 8.4%;site3:71.3%vs 67.8%),编辑的偏好性也相对一致;2)针对上述筛出的最佳靶区site1,通过sgRNA与Cas9体外转录、小鼠胚胎显微注射和移植及子代的基因型鉴定等手段,结果发现,上述靶区的基因编辑偏好性在基因编辑动物生产中也得到证实;3)利用上述得到的site1靶区插入一个碱基的突变小鼠,在原靶区位置设计与site1仅相差一个碱基的sgRNA。通过突变小鼠基因组PCR和Cas9酶体外切割试验发现,靶区切割位点单碱基的插入就对该靶区编辑的效率产生显著影响(49.2%vs 0%)。综上所述,靶区选择对CRISPR/Cas9基因编辑的结局影响显著,通过二代靶向测序可以有效筛选CRISPR-Cas9基因编辑靶区,并在模式动物生产过程中也获得较好的结果。此外,针对靶区切割位点的单个碱基插入对基因编辑效率影响显著。 展开更多
关键词 靶向测序 CRISPR/Cas9 基因编辑 PYK2
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黄单胞杆菌纤维素酶的原核表达及固定化研究
4
作者 王开胜 梁如冰 +2 位作者 刘喜朋 刘建华 邵志峰 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期290-294,共5页
从野油菜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris pv.Campestris)中PCR克隆得到删除信号肽的纤维素酶基因engXCAΔSP,并成功使用CPEC(circular polymerase extension cloning)方法构建了原核表达载体pET28a-engXCAΔSP;将该载体转入大肠杆菌... 从野油菜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris pv.Campestris)中PCR克隆得到删除信号肽的纤维素酶基因engXCAΔSP,并成功使用CPEC(circular polymerase extension cloning)方法构建了原核表达载体pET28a-engXCAΔSP;将该载体转入大肠杆菌rosetta(DE3)中,用IPTG诱导蛋白质的表达;通过Ni-NTA树脂非变性亲和纯化到了较纯的蛋白。SDS-PAGE电泳结果表明:engXCAΔSP基因编码出约50 kD的蛋白质ENGXCAΔSP。然后对该酶成功进行了固定化。该酶比活为60 U.mg-1,固定前后最适温度为53℃与62℃,最适pH为5.4与5.8,动力学常数分别为Vmax:411μmol.mL-1.h-1与383μmol.mL-1.h-1,Km:0.2500%与0.3125%。 展开更多
关键词 野油菜黄单胞杆菌 内切葡聚糖酶 原核表达系统 固定化酶
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单分子中心定位精度与信噪比关系及中心定位算法改进研究
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作者 翟人宽 李小卫 +1 位作者 孙洁林 邵志峰 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期527-532,共6页
本文从理论和实验两个角度研究单荧光分子中心定位精度与信噪比的关系,提供了一种相对简单的方法来确定基于单分子中心定位技术的超高分辨显微成像系统的分辨率。特别是,本文给出一种提高定位精度的像素重建算法,在信噪比等条件不变的... 本文从理论和实验两个角度研究单荧光分子中心定位精度与信噪比的关系,提供了一种相对简单的方法来确定基于单分子中心定位技术的超高分辨显微成像系统的分辨率。特别是,本文给出一种提高定位精度的像素重建算法,在信噪比等条件不变的情况下,该算法可有效改善单分子定位精度,从而提高超高分辨成像系统的分辨率。 展开更多
关键词 单分子成像 中心定位 超高分辨显微镜 信噪比
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我国区域性宫颈鳞癌患者中HPV感染型别和年龄分布 被引量:1
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作者 朱贤海 黄健 +7 位作者 耿建祥 丁康 兰建云 叶梅 王志蕙 韩春荣 王德望 季月霞 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第8期824-829,共6页
目的回顾性探讨我国区域性宫颈鳞癌患者中人乳头瘤病毒(HPV)感染型别排序、年龄段分布、老年女性HPV感染特点及临床意义。方法收集1978年11月至2024年1月河南省信阳市商城县人民医院、南京中医药大学附属南京中医院、江苏省南京明基医... 目的回顾性探讨我国区域性宫颈鳞癌患者中人乳头瘤病毒(HPV)感染型别排序、年龄段分布、老年女性HPV感染特点及临床意义。方法收集1978年11月至2024年1月河南省信阳市商城县人民医院、南京中医药大学附属南京中医院、江苏省南京明基医院、南京同仁医院、南京市妇幼保健院等53家医院病理科的3101例病理组织学诊断为宫颈鳞癌的患者。从宫颈鳞癌石蜡组织中提取HPVDNA,采用聚合酶链式反应结合基因芯片法对3101例患者宫颈鳞癌组织进行23种HPV分型检测,并对HPV致癌风险型别的排序、≥60岁的老年女性和不同年龄段患者HPV型别分布情况进行分析。结果3101例宫颈鳞癌患者中检测出HPV感染者2879例(92.84%),其中单一型别的HPV感染者2460例(79.33%)。排名前8位单一型别高危HPV型别依次是16型、18型、58型、31型、33型、52型、59型、45型。其中16型感染人数比18型高(P<0.05),58型感染人数比31型明显增高(P<0.05),52型感染人数比59型明显增高(P<0.05)。40~49岁和50~59岁患者中患病人数、HPV感染人数、单一型别16型及18型感染人数均排名前两位。≥60岁的老年女性占宫颈鳞癌患者的30.44%。结论将HPV16、18、58型和HPV31、33、52、59型及其他HPV型别分别列为高风险、中风险和低风险致癌组,便于宫颈病变的分层管理。要重视对40~59岁年龄段女性的筛查工作,加强≥60岁老年女性宫颈鳞癌的筛查力度。 展开更多
关键词 宫颈 鳞状细胞癌 人乳头瘤病毒 型别 年龄 排序
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基于illumina测序技术的IGROV-1/CP细胞中miRNA种类鉴定及相对丰度分析
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作者 张政希 莫凡 +3 位作者 郭妍 徐学敏 林标扬 李伟 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期129-134,共6页
从正常培养的IGROV-1/CP细胞中提取小RNA,构建小RNA的cDNA文库,然后用illum ina通用测序平台对上述cDNA文库进行测序。从测序获得的序列数据中去除冗余数据后,与已知人类m iRNA序列数据库进行比对,获得IGROV-1/CP细胞m iRNA表达谱。以... 从正常培养的IGROV-1/CP细胞中提取小RNA,构建小RNA的cDNA文库,然后用illum ina通用测序平台对上述cDNA文库进行测序。从测序获得的序列数据中去除冗余数据后,与已知人类m iRNA序列数据库进行比对,获得IGROV-1/CP细胞m iRNA表达谱。以所获的序列长度与已知人类m iRNA数据库中序列长度差异不大于2和无碱基错配为限制条件,共找到53种已知m iRNA。按在cDNA文库测序中的出现频率计算,出现频率不大于10的低拷贝m iRNA最多,占检测到所有m iRNA种类的56.6%。说明illum ina通用测序技术能够在检测细胞内的各种小RNA序列的同时反应相对丰度信息,该研究利用上述新技术获得了顺铂耐药性IGROV-1/CP细胞系m iRNA表达种类和相对丰度的实验数据。 展开更多
关键词 卵巢癌 顺铂耐药性 IGROV-1/CP细胞系 MIRNA illumina测序技术
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对领导如何进诤言
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作者 乔娜 任龙 《领导科学》 北大核心 2014年第16期37-38,共2页
一般来讲,领导干部的政策理论水平较高,经验丰富,工作能力较强。但领导干部不是圣人,在工作中也免不了会出现这样或那样的错误。实际工作中,领导干部常常爱对下级说:“你们有什么意见。尽管说出来。”但是部属都清楚,并非什么都... 一般来讲,领导干部的政策理论水平较高,经验丰富,工作能力较强。但领导干部不是圣人,在工作中也免不了会出现这样或那样的错误。实际工作中,领导干部常常爱对下级说:“你们有什么意见。尽管说出来。”但是部属都清楚,并非什么都能“尽管说出来”。人的天性都不愿听到批评,尤其是领导干部,他们经常受到奉承和赞誉的包围。然而,真正想干一番事业的领导干部都愿意耳边有一点不同的声音,因为这有助于领导干部的事业健康发展。因此,批评领导要想达到较好的效果,就必须把握以下五条原则。 展开更多
关键词 领导干部 政策理论水平 工作能力 批评 事业 部属 天性
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用于相对和绝对定量的等量异位标签-二维液相色谱-串联质谱法分析雌二醇和血清剥夺对乳腺癌细胞内蛋白质含量的影响 被引量:6
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作者 朱镭 倪国新 +3 位作者 张政希 徐学敏 胡晓芳 李伟 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期270-278,共9页
雌激素和血清中的激素及各种生长因子在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。研究雌激素和血清对乳腺癌细胞中蛋白质组成和含量的影响对于阐明雌激素和血清对乳腺癌细胞影响的分子机理具有重要的意义。利用四重用于相对和绝对定... 雌激素和血清中的激素及各种生长因子在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。研究雌激素和血清对乳腺癌细胞中蛋白质组成和含量的影响对于阐明雌激素和血清对乳腺癌细胞影响的分子机理具有重要的意义。利用四重用于相对和绝对定量的等量异位标签(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)标记结合二维液相色谱-串联质谱(two-dimensional liquid chrom atography-tandem mass spectrometry,2D-LC-MS/MS)对雌二醇(17β-oestradiol,E2)和血清各自以及共同作用对MCF7乳腺癌细胞内蛋白质表达的影响进行了比较,共鉴定到置信度在95%以上的蛋白质576种,其中各组相对于正常培养组的细胞共找到26种差异在1倍以上的蛋白质,其中10种上调,16种下调。研究发现E2和血清可显著影响细胞内与蛋白质合成相关的蛋白质的水平。实验结果表明:iTRAQ-LC-MS/MS是进行多个样品差异蛋白组比较的一种有效方法。 展开更多
关键词 用于相对和绝对定量的等量异位标签(iTRAQ) 二维液相色谱-串联质谱 雌激素 血清剥夺 乳腺癌细胞
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社区宫颈癌筛查整合方案及异常人群管理的思路探索 被引量:10
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作者 黄健 耿建祥 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第3期230-233,共4页
宫颈癌是一种严重危害女性健康的恶性肿瘤。其病因明确,取样容易,可通过早期筛查发现癌前病变,进而干预阻断其发展。我国现行的宫颈癌筛查方案普遍存在取样不精准、过程无管理、技术未整合等缺陷,从而影响了筛查工作的发展与防治体系长... 宫颈癌是一种严重危害女性健康的恶性肿瘤。其病因明确,取样容易,可通过早期筛查发现癌前病变,进而干预阻断其发展。我国现行的宫颈癌筛查方案普遍存在取样不精准、过程无管理、技术未整合等缺陷,从而影响了筛查工作的发展与防治体系长效机制的完善。文章结合自主知识产权技术,提出将阴道镜的观察功能用于宫颈癌筛查,整合分子检测和细胞形态分析等技术,在提高取样精准的同时实现即筛即诊,从而提高宫颈癌高危人群检出率,推进智慧医疗健康管理平台的建设。 展开更多
关键词 宫颈癌 人乳头瘤病毒 阴道镜 筛查
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二硫键连接聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物的新型合成方法 被引量:1
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作者 胡蔚 谭连江 沈玉梅 《化学世界》 CAS CSCD 2016年第7期408-414,共7页
在已有的合成二硫键连接的聚乳酸-聚乙二醇(PLA-PEG)两嵌段共聚物的合成方法基础上,设计研发了一种以二重氢键为引导,二硫键连接形成PLA-PEG两嵌段共聚物的合成方法。该方法是一种新的用于合成PLA-PEG两嵌段共聚物的合成方法,其步骤更... 在已有的合成二硫键连接的聚乳酸-聚乙二醇(PLA-PEG)两嵌段共聚物的合成方法基础上,设计研发了一种以二重氢键为引导,二硫键连接形成PLA-PEG两嵌段共聚物的合成方法。该方法是一种新的用于合成PLA-PEG两嵌段共聚物的合成方法,其步骤更为简单,原料价格更为便宜,反应条件更为温和,更易操作,适宜较大规模生产。而通过控制反应物的投料量和投料比,还可以得到PLA-PLA、PEG-PEG的自身偶联聚合物。使用1 H NMR和凝胶渗透色谱(GPC)对该方法合成的PLA-PEG两嵌段共聚物以及PLA-PLA、PEG-PEG的自身偶联聚合物进行表征,实验证明使用该合成方法能够成功合成PLA-PEG两嵌段共聚物和自身偶联聚合物。 展开更多
关键词 二硫键 两嵌段共聚物 聚乳酸 聚乙二醇
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NKX3.1基因沉默对LNCaP细胞基因表达谱的影响
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作者 朱镭 倪国新 +4 位作者 张政希 程培 徐学敏 林标扬 李伟 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第1期29-32,共4页
目的探讨降低NKX3.1表达对雄激素依赖性前列腺癌细胞系(LNCaP)基因表达谱的影响。方法用表达NKX3.1 shRNA的质粒转染LNCaP细胞,经Northern blot和Western blot检测其干扰NKX3.1 mRNA和蛋白表达的效果,基因表达芯片法比较转染shRNA的细... 目的探讨降低NKX3.1表达对雄激素依赖性前列腺癌细胞系(LNCaP)基因表达谱的影响。方法用表达NKX3.1 shRNA的质粒转染LNCaP细胞,经Northern blot和Western blot检测其干扰NKX3.1 mRNA和蛋白表达的效果,基因表达芯片法比较转染shRNA的细胞与转染空载体的对照细胞之间mRNA表达的差异。结果shRNA干扰可降低LNCaP细胞内NKX3.1蛋白的水平,可引起115种基因表达下调,114种基因表达上调;在严谨条件下进行功能聚类可得到与细胞凋亡相关、与糖代谢相关和与氨基酸代谢相关等共7个基因功能富集组。结论NKX3.1蛋白水平下调可引起LNCaP细胞基因表达谱的显著改变,其中一些基因表达的改变可能与NKX3.1的肿瘤调节活性密切相关。 展开更多
关键词 NKX3.1 SHRNA 前列腺肿瘤 基因表达谱
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四色荧光标记二硫键可逆终端的合成及在DNA合成测序中的应用
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作者 汤道年 江敏 +6 位作者 李小卫 康亚妮 伍新燕 龚兵 邵志峰 赵小东 沈玉梅 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2346-2352,共7页
分别以5-碘-2'-脱氧尿苷、5-碘-2'-脱氧胞苷、7-去氮-7-碘-2'-脱氧腺苷及7-去氮-7-碘-2'-脱氧鸟苷为原料,以二硫键为可裂解连接单元,通过多步反应合成了四色荧光标记不同碱基的脱氧核糖核苷酸;研究了该类荧光标记核苷... 分别以5-碘-2'-脱氧尿苷、5-碘-2'-脱氧胞苷、7-去氮-7-碘-2'-脱氧腺苷及7-去氮-7-碘-2'-脱氧鸟苷为原料,以二硫键为可裂解连接单元,通过多步反应合成了四色荧光标记不同碱基的脱氧核糖核苷酸;研究了该类荧光标记核苷酸作为可逆终端在DNA合成测序中的应用.所得产物结构经1H NMR,31P NMR及HRMS表征,并对其进行了DNA高通量测序的测试.结果表明,该类荧光标记核苷酸作为DNA合成测序的可逆终端能够满足高通量测序的生化反应要求,具有较好的应用前景. 展开更多
关键词 DNA合成测序 可逆终端 可裂解连接单元 四色荧光标记
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基于末端糖链的疾病诊疗新技术
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作者 邓陶 刘倩楠 +1 位作者 邹霞 张延 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期44-45,共2页
开展个性化精准医疗的核心在于对复杂生物样本进行个性化表征.糖链大量存在于人体组织、细胞和各类体液蛋白表面,发挥重要生物功能.糖链异质化含有重要疾病表征信息,为疾病早期诊断和治疗提供靶点.本文介绍基于末端糖链的疾病诊疗新技术... 开展个性化精准医疗的核心在于对复杂生物样本进行个性化表征.糖链大量存在于人体组织、细胞和各类体液蛋白表面,发挥重要生物功能.糖链异质化含有重要疾病表征信息,为疾病早期诊断和治疗提供靶点.本文介绍基于末端糖链的疾病诊疗新技术,提出异质化糖链作为疾病诊断指标和治疗靶标的开发潜力,为实现临床个体化医疗提供参考. 展开更多
关键词 糖链 糖蛋白 糖链异质体 疾病诊疗
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糖蛋白药物的生产与糖链改造
15
作者 张涵 张延 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期41-43,共3页
糖蛋白药物在多种疾病中显示出靶点特异、疗效突出和安全性好等优点,其糖基化是影响药物半衰期、免疫原性和药代动力学等的重要因素.糖工程促进糖蛋白药物上糖链的改造和优化研究逐渐深入.本文简述重组糖蛋白药物在细胞内或体外的合成... 糖蛋白药物在多种疾病中显示出靶点特异、疗效突出和安全性好等优点,其糖基化是影响药物半衰期、免疫原性和药代动力学等的重要因素.糖工程促进糖蛋白药物上糖链的改造和优化研究逐渐深入.本文简述重组糖蛋白药物在细胞内或体外的合成和糖链改造,并指出生产均一化糖蛋白是研究糖链对药物性质影响的前提和基础. 展开更多
关键词 糖蛋白药物 糖链均一性
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