目的研究膀胱癌组织及人膀胱癌细胞株T24中组蛋白去甲基化酶JARID1B的表达。构建JARID1B慢病毒表达载体并进行相关鉴定;观察经包装后慢病毒感染的T24中JARID1B表达情况。方法 Western blotting检测T24和6例膀胱癌及其癌旁组织JARID1B蛋...目的研究膀胱癌组织及人膀胱癌细胞株T24中组蛋白去甲基化酶JARID1B的表达。构建JARID1B慢病毒表达载体并进行相关鉴定;观察经包装后慢病毒感染的T24中JARID1B表达情况。方法 Western blotting检测T24和6例膀胱癌及其癌旁组织JARID1B蛋白表达。利用真核表达质粒pcDNA3.1(-)-JARID1B,将JARID1B基因连接入含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的慢病毒表达载体pLv-EGFP中,构建重组慢病毒表达载体pLv-EGFP-JARID1B,将经酶切和DNA测序鉴定的重组质粒通过脂质体转染至T24,荧光显微镜观察GFP表达,RT-PCT检测JARID1B mRNA表达。包装慢病毒并感染T24,Western blotting检测目的蛋白JARID1B表达。结果膀胱癌及其癌旁组织JARID1B蛋白表达阳性率分别为16.7%和66.7%,且前者表达强度较弱;T24 JARID1B蛋白表达阴性。重组质粒经酶切和DNA测序证实目的基因插入正确;pLv-EGFP-JARID1B转染T24,荧光显微镜观察发现细胞表达GFP,RT-PCR显示T24表达JARID1B mRNA。包装慢病毒再感染T24后Western blotting分析显示,细胞表达目的蛋白JARID1B。结论膀胱癌组织JARID1B表达下调。成功构建JARID1B慢病毒表达载体,包装慢病毒感染T24后细胞过表达JARID1B。展开更多
