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人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)在大肠杆菌中高效表达
被引量：
1
1
作者
周晴
张惟杰
+2 位作者
马志章
应红宇
丁仁瑞
《浙江大学学报（自然科学版）》
CSCD
1999年第3期271-276,共6页
利用体外重组技术，将人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３－ｈＴＮＦβ１４８，ｈγＴＮＦβ）的基因５′端ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３编码序列取出，添上终止密码子，克隆到ｐＢＶ２２０表达载体ＰＲＰＬ串...
利用体外重组技术，将人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３－ｈＴＮＦβ１４８，ｈγＴＮＦβ）的基因５′端ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３编码序列取出，添上终止密码子，克隆到ｐＢＶ２２０表达载体ＰＲＰＬ串联起动子的下游，构建成人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１４）表达质粒．在质粒构建过程中，原载体上紧接ＳＤ序列后的ＥｃｏＲ１位点被新引入的Ｘｂａ１位点所取代，重组后的质粒，ＳＤ序列与ＡＴＧ起始密码子之间的核苷酸数达到１０个．经转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，温敏诱导表达，细菌稳定高效地表达了人γ干扰素突变体（１８ｋＤ），表达量约占菌体总蛋白的４２％，表达产物主要以包涵体形式存在．经初步纯化复性后，表达产物的干扰素（ＩＦＮ）抗病毒比活性达到１．１８×１０６Ｕ／ｍｇ蛋白．
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关键词
融合蛋白
γ干扰素突变体
β肿瘤坏死因子
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题名
人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)在大肠杆菌中高效表达
被引量：
1
1
作者
周晴
张惟杰
马志章
应红宇
丁仁瑞
机构
浙江
大学
生命科学学院免疫
工程
实验室
上海交通大学生物医学工程学系
出处
《浙江大学学报（自然科学版）》
CSCD
1999年第3期271-276,共6页
基金
国家自然科学基金
文摘
利用体外重组技术，将人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３－ｈＴＮＦβ１４８，ｈγＴＮＦβ）的基因５′端ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３编码序列取出，添上终止密码子，克隆到ｐＢＶ２２０表达载体ＰＲＰＬ串联起动子的下游，构建成人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１４）表达质粒．在质粒构建过程中，原载体上紧接ＳＤ序列后的ＥｃｏＲ１位点被新引入的Ｘｂａ１位点所取代，重组后的质粒，ＳＤ序列与ＡＴＧ起始密码子之间的核苷酸数达到１０个．经转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，温敏诱导表达，细菌稳定高效地表达了人γ干扰素突变体（１８ｋＤ），表达量约占菌体总蛋白的４２％，表达产物主要以包涵体形式存在．经初步纯化复性后，表达产物的干扰素（ＩＦＮ）抗病毒比活性达到１．１８×１０６Ｕ／ｍｇ蛋白．
关键词
融合蛋白
γ干扰素突变体
β肿瘤坏死因子
Keywords
fusion protein
human γ interferon mutant
high expression
分类号
R979.1 [医药卫生—药品]
R730.5 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)在大肠杆菌中高效表达
周晴
张惟杰
马志章
应红宇
丁仁瑞
《浙江大学学报（自然科学版）》
CSCD
1999
1
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