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毛头鬼伞子实体含氮化合物的分离纯化及结构鉴定
被引量：
2
1
作者
冯娜
张劲松
+3 位作者
唐庆九
杨焱
贾薇
钟建江
《食用菌学报》
北大核心
2010年第2期85-88,共4页
采用色谱柱层析法,首次从毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体的醇提物中分离得到8个含氮化合物,通过波谱分析,分别鉴定为尿嘧啶(uracil)、黄嘌呤(xanthine)、光色素(lumichrome)、烟酰胺(nicotinamide)、甲酰肼(formylhydrazine)、烟酸(n...
采用色谱柱层析法,首次从毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体的醇提物中分离得到8个含氮化合物,通过波谱分析,分别鉴定为尿嘧啶(uracil)、黄嘌呤(xanthine)、光色素(lumichrome)、烟酰胺(nicotinamide)、甲酰肼(formylhydrazine)、烟酸(nicotinic acid)、腺苷(adenosine)、尿苷(uridine)。
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关键词
毛头鬼伞
子实体
含氮化合物
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职称材料
ΦC31位点特异性整合酶DNA结合功能域的鉴定
2
作者
辛清婷
马金芳
+3 位作者
王玮
刘绍辉
李荣秀
朱焕章
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期622-629,共8页
DNA结合功能域的确定是阐明位点特异性重组酶整合机制的关键,而对酶DNA结合功能域进行突变研究是提高酶整合效率和整合特异性的重要方法.为了鉴定ΦC31位点特异性整合酶的DNA结合功能域,依据对ΦC31整合酶序列的生物信息学分析结果,利用...
DNA结合功能域的确定是阐明位点特异性重组酶整合机制的关键,而对酶DNA结合功能域进行突变研究是提高酶整合效率和整合特异性的重要方法.为了鉴定ΦC31位点特异性整合酶的DNA结合功能域,依据对ΦC31整合酶序列的生物信息学分析结果,利用PCR和克隆技术在pET22b原核表达载体上构建ΦC31整合酶重组截短突变体表达质粒,将获得的表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株扩大培养并用IPTG诱导融合蛋白的表达,经镍柱纯化获得了纯度达90%以上的重组蛋白,分子量也与预期大小一致,Western印迹确定了重组蛋白的特异性.凝胶迁移滞后实验显示野生型以及截短突变体蛋白ΦC311-528、ΦC311-472、ΦC311-413能与细菌附着位点DNAattB和噬菌体附着位点DNAattP结合的条带,而截短突变体ΦC311-353、ΦC311-279、ΦC311-120观察不到相应的结合条带.6个截短突变体质粒在体内重组活性蓝白斑实验中均表现为蓝斑,显示出皆丧失体内重组活性.研究证实,ΦC31整合酶半胱氨酸富集域(第353～413位氨基酸)具有DNA结合的功能,而C末端缬氨酸富集区(第528～613位氨基酸)也与其重组活性相关.这为进一步了解ΦC31整合酶的结构与功能,最终引导其结构进化,提高其特异性和整合效率奠定了基础.
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关键词
ΦC31整合酶
截短型突变体
原核表达和纯化
DNA结合能力
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职称材料
题名
毛头鬼伞子实体含氮化合物的分离纯化及结构鉴定
被引量：
2
1
作者
冯娜
张劲松
唐庆九
杨焱
贾薇
钟建江
机构
国家食用菌工程
技术
研究中心农业部应用真菌资源与利用
重点
开放
实验室
上海
市农业遗传育种
重点
开放
实验室
上海
市农业
科学
院天然药用资源研究与开发中心
上海
市农业
科学
院食用菌研究所
上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢教育部重点实验室
出处
《食用菌学报》
北大核心
2010年第2期85-88,共4页
基金
上海市农委重点攻关项目(编号:农科攻字2003-3)的部分研究内容
文摘
采用色谱柱层析法,首次从毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体的醇提物中分离得到8个含氮化合物,通过波谱分析,分别鉴定为尿嘧啶(uracil)、黄嘌呤(xanthine)、光色素(lumichrome)、烟酰胺(nicotinamide)、甲酰肼(formylhydrazine)、烟酸(nicotinic acid)、腺苷(adenosine)、尿苷(uridine)。
关键词
毛头鬼伞
子实体
含氮化合物
Keywords
Coprinus comatus
fruiting bodies
nitrogen-containing compounds
分类号
S567.39 [农业科学—中草药栽培]
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职称材料
题名
ΦC31位点特异性整合酶DNA结合功能域的鉴定
2
作者
辛清婷
马金芳
王玮
刘绍辉
李荣秀
朱焕章
机构
复旦
大学
生命科学
学院
遗传学研究所遗传工程国家
重点
实验室
上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢教育部重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期622-629,共8页
基金
国家自然科学基金(No30671190
No3071120569)
国家科技重大专项项目(No2008ZX10001006)~~
文摘
DNA结合功能域的确定是阐明位点特异性重组酶整合机制的关键,而对酶DNA结合功能域进行突变研究是提高酶整合效率和整合特异性的重要方法.为了鉴定ΦC31位点特异性整合酶的DNA结合功能域,依据对ΦC31整合酶序列的生物信息学分析结果,利用PCR和克隆技术在pET22b原核表达载体上构建ΦC31整合酶重组截短突变体表达质粒,将获得的表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株扩大培养并用IPTG诱导融合蛋白的表达,经镍柱纯化获得了纯度达90%以上的重组蛋白,分子量也与预期大小一致,Western印迹确定了重组蛋白的特异性.凝胶迁移滞后实验显示野生型以及截短突变体蛋白ΦC311-528、ΦC311-472、ΦC311-413能与细菌附着位点DNAattB和噬菌体附着位点DNAattP结合的条带,而截短突变体ΦC311-353、ΦC311-279、ΦC311-120观察不到相应的结合条带.6个截短突变体质粒在体内重组活性蓝白斑实验中均表现为蓝斑,显示出皆丧失体内重组活性.研究证实,ΦC31整合酶半胱氨酸富集域(第353～413位氨基酸)具有DNA结合的功能,而C末端缬氨酸富集区(第528～613位氨基酸)也与其重组活性相关.这为进一步了解ΦC31整合酶的结构与功能,最终引导其结构进化,提高其特异性和整合效率奠定了基础.
关键词
ΦC31整合酶
截短型突变体
原核表达和纯化
DNA结合能力
Keywords
ΦC31 integrase
truncated mutant
prokaryotic expression and purification
DNA binding activity
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
毛头鬼伞子实体含氮化合物的分离纯化及结构鉴定
冯娜
张劲松
唐庆九
杨焱
贾薇
钟建江
《食用菌学报》
北大核心
2010
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
ΦC31位点特异性整合酶DNA结合功能域的鉴定
辛清婷
马金芳
王玮
刘绍辉
李荣秀
朱焕章
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
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职称材料
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