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微生物遗传多样性的挖掘和代谢工程应用 被引量:1
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作者 赵心清 陈洪奇 许建韧 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期1-5,共5页
随着近年来系统生物学研究的深入,微生物的基因组、转录组、蛋白组及代谢组等不同层次的组学信息不断增加。我国具有丰富的微生物多样性,但目前对多样性的研究大多集中在物种多样性及生态多样性方面,对微生物菌株水平遗传多样性的研究... 随着近年来系统生物学研究的深入,微生物的基因组、转录组、蛋白组及代谢组等不同层次的组学信息不断增加。我国具有丰富的微生物多样性,但目前对多样性的研究大多集中在物种多样性及生态多样性方面,对微生物菌株水平遗传多样性的研究还刚刚起步。以酿酒酵母和链霉菌为例,结合本课题组的成果,总结了近年来利用其基因组序列及转录组蛋白质等功能基因组信息,开发利用其遗传多样性的研究进展。在工业酿酒酵母中发现了多个独特的功能基因,包括絮凝基因及与环境胁迫耐性相关的调节蛋白基因,还发现了独特的启动子序列。此外,在海洋放线菌基因组中也发现了独特的调节基因。对微生物遗传多样性的挖掘利用,不仅有助于深入理解微生物不同菌株中独特的调节方式,也为微生物的代谢工程改造提供了大量新的可利用的遗传组件。 展开更多
关键词 酿酒酵母 海洋放线菌 胁迫耐受性 遗传多样性 调节蛋白
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南极纳尔逊冰川土壤中微生物的群落结构及其代谢特征研究 被引量:1
2
作者 范启连 田琛 +2 位作者 吕永新 张宇 肖湘 《应用海洋学学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期187-194,共8页
冰川土壤中的微生物是冰冻圈生态系统中的重要组成部分。南极纳尔逊冰川四周环海,临近海洋的物质输送和其他因素扰动改变了近岸土壤中部分理化因子,从而对土壤中的微生物群落产生影响。本研究采集了南极纳尔逊冰川不同近海距离处的土壤... 冰川土壤中的微生物是冰冻圈生态系统中的重要组成部分。南极纳尔逊冰川四周环海,临近海洋的物质输送和其他因素扰动改变了近岸土壤中部分理化因子,从而对土壤中的微生物群落产生影响。本研究采集了南极纳尔逊冰川不同近海距离处的土壤样品,并对其进行了细菌和古菌V4区扩增子测序以及宏基因组测序,探讨了不同近海距离的冰川土壤中的微生物群落结构和代谢潜能。物种多样性结果显示,不同位点的土壤微生物群落组成有所差异,但变形菌门、放线菌门、拟杆菌门等在冰川土壤样品中普遍存在且相对丰度较高。宏基因组分析结果显示,不同近海距离的冰川土壤微生物群落的功能基因分布不同,且能量代谢和跨膜运输等代谢途径的基因的丰度随着采样位点远离海洋而降低。冰川土壤中碳、氮、硫代谢分别以还原性柠檬酸循环、反硝化、同化硫酸盐还原途径为主,其中反硝化途径基因在所有样品中丰度较高。通过分箱组装获得了含有反硝化功能基因的基因组bin_71,并重构了其核心的代谢通路。本研究初步揭示了南极纳尔逊冰川土壤中微生物的群落结构及代谢潜能,为后续南极冰川土壤新物种的发现、功能基因的挖掘、以及探究全球气候变暖下海洋对沿海生态系统的影响提供了基础数据。 展开更多
关键词 海洋生物学 土壤微生物 群落结构 代谢潜能 宏基因组 南极冰川
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微生物药物产业现状与发展趋势 被引量:4
3
作者 于晴 黄婷婷 邓子新 《中国工程科学》 CSCD 北大核心 2021年第5期69-78,共10页
微生物来源的天然产物药物具有结构多样、活性优良等优点,临床应用潜力巨大。本研究系统分析了我国微生物药物产业发展现状,梳理了微生物种质资源利用、优良菌种筛选和发酵工艺优化、菌株工程化改造、新型微生物药物创制等技术趋势,助... 微生物来源的天然产物药物具有结构多样、活性优良等优点,临床应用潜力巨大。本研究系统分析了我国微生物药物产业发展现状,梳理了微生物种质资源利用、优良菌种筛选和发酵工艺优化、菌株工程化改造、新型微生物药物创制等技术趋势,助力我国破解产业瓶颈、加速产业升级。我国现代微生物药物产业已经具备了坚实的资源和技术基础,但与国际领先水平有一定的差距。本研究针对产业面临的机遇与挑战,从建立统筹创新的微生物医药大科学装置、加强微生物药物基础研究和技术自主研发、构建战略性人才引育系统、形成体系化产业激励政策等四个方面提出了发展建议。 展开更多
关键词 微生物药物 发展趋势 生物活性 微生物代谢 合成生物学
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肠道微生物与肠上皮细胞互作的免疫调节机制 被引量:4
4
作者 刘天怡 陈灿希 胡泽汗 《生理科学进展》 CAS 2022年第6期422-427,共6页
人体肠道中寄居着数量众多、种类繁异的微生物,其在机体营养吸收、物质代谢以及免疫调节等方面发挥着积极作用,但肠道微生物(gut microbiota)群落结构失调或组织易位则与多种疾病的发生发展密切相关。肠上皮细胞(intestinal epithelial ... 人体肠道中寄居着数量众多、种类繁异的微生物,其在机体营养吸收、物质代谢以及免疫调节等方面发挥着积极作用,但肠道微生物(gut microbiota)群落结构失调或组织易位则与多种疾病的发生发展密切相关。肠上皮细胞(intestinal epithelial cells)作为机体直接接触众多肠道微生物的第一道屏障,在响应肠道微生物定植、调节肠道微生物群落结构以及维持肠黏膜屏障功能等方面发挥着至关重要的作用。本文将主要从肠黏膜免疫调控的角度,介绍肠道微生物与肠上皮细胞互作分子机制的最新研究进展。 展开更多
关键词 肠道微生物 肠上皮细胞 黏膜免疫 抗菌蛋白 免疫调节
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大肠杆菌乙酰-CoA羧化酶基因异源表达对变铅青链霉菌次级代谢的影响 被引量:3
5
作者 郑华亮 白亭丽 陶美凤 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期12-18,共7页
克隆组装了大肠杆菌的乙酰-CoA羧化酶基因acc,以研究其异源表达对变铅青链霉菌中2种"沉默"抗生素放线紫红素和十一烷基灵菌红素合成的影响。大肠杆菌ACC由4个基因编码,通过PCR扩增4个基因,并通过重叠延伸PCR加上ermE启动子,... 克隆组装了大肠杆菌的乙酰-CoA羧化酶基因acc,以研究其异源表达对变铅青链霉菌中2种"沉默"抗生素放线紫红素和十一烷基灵菌红素合成的影响。大肠杆菌ACC由4个基因编码,通过PCR扩增4个基因,并通过重叠延伸PCR加上ermE启动子,构建得到4个重组基因;再将重组基因依次组装得到异源表达质粒pHLZ11,接合转移到变铅青链霉菌中进行异源表达。结果显示:含有异源表达质粒的变铅青链霉菌接合转移子能合成放线紫红素而十一烷基灵菌红素产量提高。表明大肠杆菌acc基因异源表达能够激活变铅青链霉菌沉默抗生素的合成,并提高已有抗生素产量。 展开更多
关键词 变铅青链霉菌 大肠杆菌 乙酰-CoA羧化酶 放线紫红素 十一烷基灵菌红素
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中国正常人群中先天性代谢疾病相关基因的DNA变异位点分布频率的研究
6
作者 韦雨琦 孙一丹 +7 位作者 王艳菁 刘逸晨 周伟 沈陆 周晨希 贺林 怀聪 秦胜营 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2019年第4期47-52,F0003,共7页
为从整体层面研究我国正常人群先天性代谢缺陷DNA变异位点分布及频率,在88例中国正常人基因组DNA样本中,使用Haloplex序列捕获技术结合Illumina Miseq二代测序平台对10种先天性代谢缺陷的78个候选致病基因进行统一靶向测序,利用SureCal... 为从整体层面研究我国正常人群先天性代谢缺陷DNA变异位点分布及频率,在88例中国正常人基因组DNA样本中,使用Haloplex序列捕获技术结合Illumina Miseq二代测序平台对10种先天性代谢缺陷的78个候选致病基因进行统一靶向测序,利用SureCall软件分析测序数据及质控;并用SIFT和Polyphen软件以及dbSNP数据库进行突变位点分析和功能预测;用SHEsis在线软件分析SNP/SNV的等位基因频率;此外用PyMOL对两个文献中尚未报道的位点进行蛋白结构功能分析。本实验共检出514个DNA变异位点,其中99个为错义变异。在这99个错义变异中,有2个是已报道的先天性代谢缺陷致病位点,且该位点在本研究人群中的分布频率高于亚洲数据库频率。本研究为中国人群先天性代谢缺陷的基因筛查提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 先天性代谢缺陷 捕获测序 DNA变异位点
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拟无枝酸菌宿主构建及次级代谢基因簇异源表达
7
作者 胡欣瑞 贺卫军 +2 位作者 吕金 王业民 陶美凤 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期164-172,共9页
为将生长快、发酵时间短、遗传操作便捷的稀有放线菌拟无枝酸菌TNS106开发成异源表达宿主,通过同源重组将内源的瑞斯托霉素生物合成关键基因rpsA替换为ΦC31和ΦBT1噬菌体细菌附着位点attB,清除代谢背景并引入整合位点,得到菌株HXR1;将... 为将生长快、发酵时间短、遗传操作便捷的稀有放线菌拟无枝酸菌TNS106开发成异源表达宿主,通过同源重组将内源的瑞斯托霉素生物合成关键基因rpsA替换为ΦC31和ΦBT1噬菌体细菌附着位点attB,清除代谢背景并引入整合位点,得到菌株HXR1;将含有来自天蓝色链霉菌的放线紫红素基因簇或来自刺糖多孢菌的多杀菌素基因簇的质粒转到HXR1进行异源表达,检测发酵产物。结果显示,HXR1成功表达放线紫红素和多杀菌素;与红色糖多孢菌宿主LJ161相比,放线紫红素的产生提前1 d,产量提高1.3倍。拟无枝酸菌异源表达宿主HXR1可为从链霉菌和稀有放线菌中发现新的次级代谢产物提供有用的平台。 展开更多
关键词 药物研发 稀有放线菌 拟无枝酸菌 异源表达 放线紫红素 多杀菌素 抗生素 次级代谢产物
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乳酸菌葡聚糖蔗糖酶的研究进展 被引量:2
8
作者 石贺 于连升 +3 位作者 齐心彤 钱志刚 阚连宝 杜仁鹏 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第4期354-361,共8页
葡聚糖蔗糖酶(Glucansucrase)(EC.2.4.5.1)是一类α-转糖苷酶(Glucosyltransferase),主要由明串珠菌属(Leuconostoc)、链球菌属(Streptococcus)及乳杆菌属(Lactobacillus)等乳酸菌产生。葡聚糖蔗糖酶的结构和催化机制具有多样性,是生物... 葡聚糖蔗糖酶(Glucansucrase)(EC.2.4.5.1)是一类α-转糖苷酶(Glucosyltransferase),主要由明串珠菌属(Leuconostoc)、链球菌属(Streptococcus)及乳杆菌属(Lactobacillus)等乳酸菌产生。葡聚糖蔗糖酶的结构和催化机制具有多样性,是生物合成胞外多糖的一种重要工具酶。本文主要综述了乳酸菌葡聚糖蔗糖酶的来源、分类、结构、反应机制,以及介绍培养基组成、培养条件对酶产量的影响,重点阐述葡聚糖蔗糖酶的优化方法、分离纯化过程及酶学性质,并对其发展趋势进行展望,以期为葡聚糖蔗糖酶在相关领域开展研究提供参考。 展开更多
关键词 葡聚糖蔗糖酶 结构 催化机理 优化 分离纯化 应用
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变铅青链霉菌高效异源表达宿主SBT5的构建 被引量:5
9
作者 白亭丽 俞燕飞 +1 位作者 徐钟 陶美凤 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-6,共6页
以变铅青链霉菌TK24为出发菌株,依次敲除钙依赖抗生素(CDA)、放线紫红素(ACT)和十一烷基灵菌红素(RED)这3个内源抗生素的生物合成基因簇,同时在钙依赖抗生素基因簇原位整合了来自棒状链霉菌的全局性调控基因afsRScla,构建得到变铅青链... 以变铅青链霉菌TK24为出发菌株,依次敲除钙依赖抗生素(CDA)、放线紫红素(ACT)和十一烷基灵菌红素(RED)这3个内源抗生素的生物合成基因簇,同时在钙依赖抗生素基因簇原位整合了来自棒状链霉菌的全局性调控基因afsRScla,构建得到变铅青链霉菌菌株SBT5。将来自天蓝色链霉菌的放线紫红素生物合成基因簇导入SBT5中,接合子产生大量蓝色的放线紫红素,而出发菌株TK24只产微量蓝色抗生素;SBT5接合子的ACT产量也显著高于导入了额外act基因簇拷贝的出发菌株接合子。SBT5菌株次级代谢背景清晰,不产色素类抗生素和抗细菌抗生素,可作为高效宿主用于次级代谢产物基因簇的异源表达和筛选。 展开更多
关键词 变铅青链霉菌 异源表达宿主 次级代谢产物 抗生素生物合成基因簇 基因敲除 “砖RSm
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实践乃育人之本 被引量:11
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作者 邓子新 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2012年第5期1-4,共4页
文章结合作者经历,阐述了生活、学习、工作中勇于实践,勤奋执着对育人的作用,提出在科学研究的实践过程中应注意的问题。尤其强调了生活实践中意志磨练,不畏挫折,科学实验中执着和毅力的重要性,提出要营造有利于创新和育人的实验室文化... 文章结合作者经历,阐述了生活、学习、工作中勇于实践,勤奋执着对育人的作用,提出在科学研究的实践过程中应注意的问题。尤其强调了生活实践中意志磨练,不畏挫折,科学实验中执着和毅力的重要性,提出要营造有利于创新和育人的实验室文化环境等。 展开更多
关键词 实验室 实践育人 科学研究 实验室文化
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漆酶与酚类模式底物的结合及反应活性的理论研究 被引量:7
11
作者 齐艳兵 朱吉人 +5 位作者 孙尧金 杜芸 褚建君 石婷 赵一雷 王晓雷 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第4期776-783,共8页
通过生物信息学分析、分子动力学模拟及量子化学计算,对21种邻对位取代酚类模式底物与漆酶的结合能力以及反应活性进行了探讨.生物信息学结构比对分析发现漆酶的活性口袋含有Asp/Glu206,Asn/His208,Asn264,Gly392和His458等保守的氨基... 通过生物信息学分析、分子动力学模拟及量子化学计算,对21种邻对位取代酚类模式底物与漆酶的结合能力以及反应活性进行了探讨.生物信息学结构比对分析发现漆酶的活性口袋含有Asp/Glu206,Asn/His208,Asn264,Gly392和His458等保守的氨基酸残基(氨基酸残基编号以Trametes versicolor漆酶为例,PDB:1KYA);采用MM-GBSA方法计算了21种酚类模式底物与T.versicolor漆酶的结合自由能.分子力学计算结果表明,漆酶与底物的结合力主要来自Asp206和Asn264等残基与底物分子形成的分子间氢键,并且Phe265残基和酚类底物的芳香环形成π-π相互作用.量子化学计算表明,芳环上取代基的推拉电子效应显著影响协同电子转移的底物去质子化过程,其中推电子能力较强的—NH2,—OH,—OCH3和—CH CHCH3等基团能够明显增强酚羟基反应活性,而吸电子的—CONH2和—Cl则具有相反的效应. 展开更多
关键词 漆酶 结合力 反应活性 分子力学 量子化学 酚类底物
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凡隆气单胞菌(Aeromonas veronii)拮抗菌4-1-3的筛选鉴定及其活性物质初探 被引量:7
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作者 凡飞 张生武 +3 位作者 李联泰 李燕 苏晓烽 安贤惠 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2015年第2期146-152,共7页
凡隆气单胞菌是泥鳅养殖中容易发生而且致死率较高的病原菌之一。为筛选凡隆气单胞菌拮抗菌、研发防治此病害的生物制剂,采集泥鳅养殖池底泥样品,通过滤纸抑菌圈法筛选凡隆气单胞菌拮抗细菌,结合形态观察、生理生化实验和16S r RNA基因... 凡隆气单胞菌是泥鳅养殖中容易发生而且致死率较高的病原菌之一。为筛选凡隆气单胞菌拮抗菌、研发防治此病害的生物制剂,采集泥鳅养殖池底泥样品,通过滤纸抑菌圈法筛选凡隆气单胞菌拮抗细菌,结合形态观察、生理生化实验和16S r RNA基因序列分析进行菌株鉴定。采用硫酸铵沉淀和离子交换层析方法分离纯化抑菌物质,电泳检测其分子量。结果显示,从样品中分离到17株细菌,其中筛选出的拮抗菌4-1-3,能够高效抑制凡隆气单胞菌,抑菌圈直径达到15.2 mm。经菌株鉴定后命名为Pseudomonas fluorescens 4-1-3。该菌产生的抑菌物质为胞外蛋白,分子量约为100 k Da,推测该物质是荧光假单胞菌产生拮抗物质的一种新类型,有望进一步研制成防治水产病害的生物制剂。 展开更多
关键词 凡隆气单胞菌 拮抗菌 荧光假单胞菌 活性物质 胞外蛋白
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ARTP技术选育吩嗪-1-甲酰胺高产菌株及发酵优化 被引量:6
13
作者 谭剑 熊欣 +2 位作者 梁万利 彭华松 张雪洪 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期174-179,共6页
从一株高产吩嗪-1-甲酰胺(PCN)的绿针假单胞菌P3株出发,利用常压室温等离子体诱变技术进行诱变育种,从初筛的20株突变株中获得了一株PCN产量达到2 093 mg/L的突变株P3-9,为出发菌株的125%。随后通过单因素实验考察了各种营养因子对该高... 从一株高产吩嗪-1-甲酰胺(PCN)的绿针假单胞菌P3株出发,利用常压室温等离子体诱变技术进行诱变育种,从初筛的20株突变株中获得了一株PCN产量达到2 093 mg/L的突变株P3-9,为出发菌株的125%。随后通过单因素实验考察了各种营养因子对该高产菌株合成PCN的影响,结果表明发酵培养基的最佳碳源、氮源分别为甘油和蛋白胨,外源添加Fe3+或Fe2+对于积累PCN有显著促进作用,而添加苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸对PCN产量无明显影响。优化后,该突变株的PCN产量高达2 810 mg/L,是目前国际上通过诱变育种获得的较高PCN产量。 展开更多
关键词 吩嗪-1-甲酰胺 常压室温等离子体 培养基优化
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环己胺降解菌的筛选及其生理生化特性研究 被引量:5
14
作者 李存治 毛灵琪 +2 位作者 晏婷 周宁一 闫达中 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1-5,50,共6页
从南京某甜蜜素生产企业的污泥中通过驯化、筛选分离到一株能够以环己胺为唯一碳氮源生长的细菌,命名为YT-01。通过革兰氏染色和16S r RNA基因序列同源性分析比对鉴定菌属,根据底物生长实验、分光光度法和气相色谱方法检测底物降解及产... 从南京某甜蜜素生产企业的污泥中通过驯化、筛选分离到一株能够以环己胺为唯一碳氮源生长的细菌,命名为YT-01。通过革兰氏染色和16S r RNA基因序列同源性分析比对鉴定菌属,根据底物生长实验、分光光度法和气相色谱方法检测底物降解及产物生成情况。实验证明该菌为革兰氏阳性菌,其16S r RNA序列与墨西哥假黄单胞菌(Pseudoxanthomonas mexicana)的一致性高达99%,初步断定该菌为假黄单胞菌属。该环己胺降解菌在20 h内可以降解10 mmol/L的环己胺,且检测到中间产物环己酮。该环己胺降解菌具有运用到环境中治理环己胺污染的潜力,为以后进一步研究环己胺降解机理提供了研究的材料。 展开更多
关键词 环己胺 气相色谱 生物降解 代谢途径 16SrRNA 环己酮
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林可霉素转运蛋白基因lmrC的功能分析 被引量:3
15
作者 徐晶晶 吴杭 +4 位作者 孟思童 刘瑞华 黄训端 张部昌 白林泉 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第2期159-163,共5页
为了研究腺苷三磷酸结合盒转运蛋白LmrC是否参与林可霉素的生物合成,通过同源重组在林可霉素高产菌株LC-G中构建了lmrC的缺失突变株XJJ7.高效液相色谱(HPLC)分析和抗性检测显示,相比出发菌株LC-G,XJJ7的林可霉素产量下降了55%,而且耐受... 为了研究腺苷三磷酸结合盒转运蛋白LmrC是否参与林可霉素的生物合成,通过同源重组在林可霉素高产菌株LC-G中构建了lmrC的缺失突变株XJJ7.高效液相色谱(HPLC)分析和抗性检测显示,相比出发菌株LC-G,XJJ7的林可霉素产量下降了55%,而且耐受林可霉素的最高质量浓度降低了50%.进一步实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析发现,突变株XJJ7中林可霉素生物合成基因lmbA和lmbR的转录明显低于LC-G,但调控基因lmbU的转录不变.在LC-G中lmrC的过表达不能进一步提高产量,也不影响lmbA、lmbR和lmbU基因的转录,但过表达菌株对林可霉素的抗性显著增强.结果表明,lmrC可以通过影响生物合成基因的转录来调节林可霉素的产生,并赋予产生菌一定的抗性. 展开更多
关键词 林可链霉菌 林可霉素 腺苷三磷酸结合盒转运蛋白 抗性
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海水虾蟹混养池中氨氮降解菌的分离筛选与鉴定 被引量:8
16
作者 刁文文 安贤惠 +1 位作者 王存稳 李联泰 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期83-88,共6页
采集海水虾蟹养殖池底泥,在以(NH4)2SO4为唯一氮源的选择性培养基上分离得到17株细菌,利用纳氏试剂分光光度法测定其氨氮降解能力,筛选出降解率较高的菌株X14-1-1。该菌株在氨氮质量浓度50mg/L时,72h内使氨氮质量浓度降至1.65mg/L,降... 采集海水虾蟹养殖池底泥,在以(NH4)2SO4为唯一氮源的选择性培养基上分离得到17株细菌,利用纳氏试剂分光光度法测定其氨氮降解能力,筛选出降解率较高的菌株X14-1-1。该菌株在氨氮质量浓度50mg/L时,72h内使氨氮质量浓度降至1.65mg/L,降解率可达96.7%;在氨氮质量浓度5mg/L时,72h内降解率可达74.01%。采用盐酸萘乙二胺分光光度法测定其降解亚硝酸盐的能力,结果显示,菌株X14-1-1在72h对亚硝酸盐的降解率达到67.2%。该菌株为革兰氏阴性短杆菌,大小为1.47-2.54μm×0.37-0.53μm,平板菌落呈乳白色,圆形。通过形态观察、生理生化试验及16SrDNA鉴定,初步确定X14-1-1属食油假单胞菌,命名为Pseudomonas oleovorans X14-1-1。该菌株在海水养殖环境水质调节及养殖废水处理方面具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 氨氮 亚硝酸盐 降解 食油假单胞菌
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糖多孢菌属菌株的体内转座诱变系统 被引量:1
17
作者 白露露 贺卫军 +3 位作者 龙青山 王业民 邓子新 陶美凤 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期85-91,共7页
为实现糖多孢菌的体内转座诱变,采用刺糖多孢菌的强启动子促进Tn5转座酶基因tnp(5)的表达,优化链霉菌高效转座质粒pHL734,构建了转座质粒pJTn1、pJTn2、pJTn3、pJTn4、pJTn5、pJTn6。结果显示:pJTn1~pJTn6系列转座质粒均可在红色糖多孢... 为实现糖多孢菌的体内转座诱变,采用刺糖多孢菌的强启动子促进Tn5转座酶基因tnp(5)的表达,优化链霉菌高效转座质粒pHL734,构建了转座质粒pJTn1、pJTn2、pJTn3、pJTn4、pJTn5、pJTn6。结果显示:pJTn1~pJTn6系列转座质粒均可在红色糖多孢菌中高效转座;pJTn1和pJTn5可在刺糖多孢菌中进行转座,获得31个刺糖多孢菌转座突变株;其中30个菌株的基因组中检测到标准的Tn5转座,8个突变株的多杀菌素产量显著降低。表明pJTn系列转座质粒可作为糖多孢菌的体内转座诱变工具,为抗生素的产量调控研究和高产育种靶标基因筛选提供理论依据。 展开更多
关键词 链霉菌 高产菌种 刺糖多孢菌 多杀菌素 红色糖多孢菌 Tn5转座质粒 体内转座
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芳香族氨基酸添加提高井冈霉素产量的研究 被引量:2
18
作者 魏振华 钟建江 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期200-203,共4页
目的通过添加芳香族氨基酸促进井冈霉素生物合成起始单位的供应,提高其发酵产量。方法优化苯丙氨酸添加时间和浓度确定最优添加条件,分析前体代谢相关的酶活考察其影响机制。结果确定苯丙氨酸最佳添加条件为在发酵第24h添加0.1g/L。发... 目的通过添加芳香族氨基酸促进井冈霉素生物合成起始单位的供应,提高其发酵产量。方法优化苯丙氨酸添加时间和浓度确定最优添加条件,分析前体代谢相关的酶活考察其影响机制。结果确定苯丙氨酸最佳添加条件为在发酵第24h添加0.1g/L。发现37℃时苯丙氨酸的添加提高了井冈霉素A产量,但在42℃条件下提高幅度大大降低。通过分析6-磷酸葡萄糖脱氢酶酶活,发现芳香族氨基酸添加并未影响其酶活。结论苯丙氨酸的添加能有效提高井冈霉素发酵产量近60%。苯丙氨酸的添加可能通过反馈抑制降低了戊糖磷酸途径中中间体的消耗,从而为井冈霉素合成提供了更加充足的7-磷酸景天庚酮糖。 展开更多
关键词 井冈霉素 吸水链霉菌 芳香族氨基酸 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 戊糖磷酸途径
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胰岛素活性结构在水合离子液体中的稳定性 被引量:1
19
作者 潘晓莉 李代禧 魏冬青 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第5期2035-2041,共7页
离子液体以其独特的、可修饰的分子结构以及优良的物理化学性质被应用于蛋白质的稳定性研究。采用分子动力学模拟方法及微量热法,研究热敏性蛋白药物胰岛素在不同水质量分数下水合离子液体中活性结构的稳定性,并深入分析离子液体与胰岛... 离子液体以其独特的、可修饰的分子结构以及优良的物理化学性质被应用于蛋白质的稳定性研究。采用分子动力学模拟方法及微量热法,研究热敏性蛋白药物胰岛素在不同水质量分数下水合离子液体中活性结构的稳定性,并深入分析离子液体与胰岛素之间的相互作用及水分子与蛋白质稳定性之间的关系。研究结果表明,当水质量分数低于25.00%时,胰岛蛋白的热变性温度能保持在68℃以上。且通过模拟分析得出,含水量25.00%的水合离子液体体系中,大量阴、阳离子在胰岛蛋白表面聚集,并通过较强的静电相互作用吸附在其表面,从而对蛋白质的活性结构展现出良好的稳定效果。结合宏观实验研究及微观动力学计算阐释了不同水含量的离子液体稳定蛋白质的作用机理,并为离子液体对蛋白质的稳定作用研究提供了一种新的分析方法。 展开更多
关键词 离子液体 胰岛素 水质量分数 蛋白质稳定性 分子模拟 微量热法
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离子液体中胰岛素结构稳定性的分子动力学模拟 被引量:1
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作者 潘晓莉 李代禧 魏冬青 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第12期5215-5221,共7页
离子液体作为一种新型绿色溶剂,由于其独特的物理化学性质,被广泛应用于蛋白质的稳定性研究。选用热敏性蛋白药物胰岛素作为研究对象,采用分子动力学模拟方法,从分子层面上研究不同种类的离子液体对胰岛素结构的稳定效果。结果表明,与... 离子液体作为一种新型绿色溶剂,由于其独特的物理化学性质,被广泛应用于蛋白质的稳定性研究。选用热敏性蛋白药物胰岛素作为研究对象,采用分子动力学模拟方法,从分子层面上研究不同种类的离子液体对胰岛素结构的稳定效果。结果表明,与纯水体系相比,在常温下离子液体能够有效地稳定胰岛素的分子结构,且体系中阴离子的氢键碱性越弱,阳离子的烷基链越短,对胰岛素分子结构的稳定作用越强。并深入分析不同烷基链长度的二氰胺类离子液体与胰岛素之间的相互作用,发现相较于长烷基链离子液体,短烷基链离子液体与胰岛素之间的相互作用更强,揭示了后者能更好地维持和稳定胰岛蛋白的分子结构。 展开更多
关键词 离子液体 胰岛素 蛋白质稳定性 相互作用能 分子模拟
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