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流式分选仪FACSAriaⅡ分选GFP阳性乳腺癌MCF-7细胞株的条件优化研究 被引量：12
1
作者 郭陈智 史桂英 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期127-130,共4页
目的研究流式分选仪FACSAriaⅡ分选绿色荧光蛋白(GFP)阳性乳腺癌MCF-7细胞株时不同条件选择对分选后细胞的纯度、得率和活性的影响。方法流式分选仪FACSAriaⅡ分别选择70、85和100μm三种喷嘴以及4-way purity、purity、yield三种分选... 目的研究流式分选仪FACSAriaⅡ分选绿色荧光蛋白(GFP)阳性乳腺癌MCF-7细胞株时不同条件选择对分选后细胞的纯度、得率和活性的影响。方法流式分选仪FACSAriaⅡ分别选择70、85和100μm三种喷嘴以及4-way purity、purity、yield三种分选模式分选MCF-7细胞的GFP阳性稳转株,计数分选后的细胞并计算分选得率,流式细胞术检测分选细胞的纯度,锥虫蓝染色法检测分选细胞的活性。结果 70、85和100μm三种喷嘴分选GFP阳性细胞纯度均达99%以上,分选得率分别为(37.67±2.05)%、(56.33±2.62)%和(43.33±0.47)%,活细胞比例分别为(88.23±0.97)%、(91.87±1.05)%和(95.33±0.90)%;选择85μm喷嘴,4-way purity、purity和yield三种分选模式分选细胞的得率分别为(51.00±2.45)%、(67.33±2.05)%和(74.00±0.82)%,纯度分别为99.6%、99.3%和96.2%。结论流式分选仪FACSAriaⅡ分选乳腺癌MCF-7细胞GFP阳性稳转株,选择85μm喷嘴以及purity分选模式较合适。 展开更多
关键词 流式分选 喷嘴 分选模式 纯度 得率
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采用EDTA-胰酶处理难消化细胞株在凋亡检测分析中的可行性 被引量：4
2
作者 符蓉 赵犇鹏 +1 位作者 杨洁 田烨 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1422-1425,共4页
目的研究细胞胰酶消化液中有无EDTA对流式细胞术检测细胞凋亡率的影响。方法以7种难消化细胞株作为实验对象,分为对照组和H2O2组(加H2O2促凋亡)。采用不同方法(不含EDTA的0.25%胰酶、含EDTA的0.25%胰酶、含EDTA的0.25%胰酶消化离心弃上... 目的研究细胞胰酶消化液中有无EDTA对流式细胞术检测细胞凋亡率的影响。方法以7种难消化细胞株作为实验对象,分为对照组和H2O2组(加H2O2促凋亡)。采用不同方法(不含EDTA的0.25%胰酶、含EDTA的0.25%胰酶、含EDTA的0.25%胰酶消化离心弃上清之后用1×PBS洗1次)对细胞进行消化处理,利用Annexin V-FITC荧光抗体标记细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率。计算相同消化细胞条件下两组细胞的凋亡率差值。结果统计学分析结果显示:7种细胞株在3种消化细胞条件下的细胞凋亡率差值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论胰酶中含EDTA对流式细胞术检测细胞凋亡无显著影响;因此可以利用EDTA抗凝集这一特性,将其加入胰酶消化液中,用于某些难消化细胞株凋亡样品的制备。 展开更多
关键词 流式细胞术 EDTA 凋亡 ANNEXIN V 胰酶
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FACSAria Ⅱ分选人肺腺癌A549细胞SP亚群的方法优化 被引量：3
3
作者 田烨 赵犇鹏 +2 位作者 符蓉 杨洁 尹荟菁 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1594-1598,共5页
目的·通过优化流式分选人肺癌A549细胞SP亚群方法,提高SP亚群分选纯度并缩短分选时间,以提高分选活率。方法·制备单细胞悬液,不同终浓度维拉帕米孵育及Hoechst33342标记染色,经PI标记检测SP细胞比例。选择最佳染色浓度,100μ... 目的·通过优化流式分选人肺癌A549细胞SP亚群方法,提高SP亚群分选纯度并缩短分选时间,以提高分选活率。方法·制备单细胞悬液,不同终浓度维拉帕米孵育及Hoechst33342标记染色,经PI标记检测SP细胞比例。选择最佳染色浓度,100μm喷嘴,分选速度10μL/min,用一次分选法（纯度模式）和二次分选法（富集＋纯度模式）分选SP细胞和MP细胞,比较分选后纯度和分选用时。通过二次分选法获得SP细胞和MP细胞,分别行Lyso-Tracker Red/Hoechst 33342染色共聚焦观察和成瘤实验。结果·经二次分选法,SP细胞纯度达到99%以上,1×10～8个细胞分选时间〈5.2 h。共聚焦镜下观察到SP细胞大小与MP细胞无明显差异,MP细胞的溶酶体数量较SP细胞显著增多。Hoechst 33342均能染色,细胞活率不受影响。在小鼠成瘤实验中,SP细胞成瘤体积较MP细胞显著增大。结论·A549肺癌细胞Hoechst33342染色终质量浓度宜用6μg/mL;采用FACSAriaⅡ对其SP细胞进行二次分选,不仅显著提高SP细胞分选纯度,还大大缩短分选时间,细胞活率不受影响。 展开更多
关键词 侧群细胞 细胞分选 肿瘤干细胞 分选纯度 分选活率
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