hVEGF基因工程生物膜对全层皮肤缺损创面愈合的影响 被引量：6

1

作者 赵雷 王莉 +4 位作者 姜叙诚 郑林 张帆 赵涵芳 许伟榕 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1015-1018,共4页

目的探讨含人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用。方法在SD大鼠背部皮肤制作深达皮肤全层的正方形创面,实验组大鼠创面上覆含hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基... 目的探讨含人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用。方法在SD大鼠背部皮肤制作深达皮肤全层的正方形创面,实验组大鼠创面上覆含hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜;对照组分别在大鼠创面上覆整合空质粒的成纤维细胞的生物膜、空白生物膜和仅覆切口膜。采用形态学和免疫组化方法,观察术后3、7、14、29 d实验组和对照组大鼠创面肉芽组织生长及创面愈合情况。结果在各时相实验组中新生的毛细血管数以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达均显著高于对照组(P<0.01),且VEGF表达与新生毛细血管数正相关。结论将含hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,能使创面成纤维细胞持续、有效地表达VEGF,强有力地促进肉芽组织增生,有利于创面愈合。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子 基因工程生物膜 肉芽组织 创伤愈合

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hVEGF基因工程生物膜对全层皮肤缺损创面中flt-1和TSP-1表达的影响

2

作者 赵雷 王莉 +4 位作者 姜叙诚 郑林 张帆 赵涵芳 许伟榕 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期47-50,共4页

目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每... 目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每组20只,所有动物于背部制备皮肤全层缺损创面。A组:创面覆盖hVEGF基因工程生物膜和Tegaderm切口膜;B组:创面覆盖空白生物膜和Tegaderm切口膜,C组:创面覆盖含空质粒的成纤维细胞种植的生物膜和Tegaderm切口膜;D组:创面覆盖Tegaderm切口膜。采用免疫组化和图像分析的方法,观察各组在术后3、7、14、29d时创面中flt-1和TSP-1表达的情况。结果术后3、7、14d时,A组flt-1阳性细胞数显著高于B、C、D组(P<0.05或P<0.01);术后7、14、29d时A组创面中TSP-1表达显著低于B、C、D组(P<0.01)。结论将hVEGF基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,能使创面持续表达flt-1并抑制TSP-1表达,从而促进新生血管形成,有利于创面愈合。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子 FLT-1 血小板反应蛋白 创面愈合

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不同刺激物对过敏性哮喘产妇脐血中嗜碱性粒细胞分泌IL-4的影响 被引量：2

3

作者 杨玲 许以平 +3 位作者 姚苏杭 熊瑛 祝捷 王克敏 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期962-966,共5页

目的研究不同刺激物干预对过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞分泌白介素4(IL-4)的影响。方法将源自过敏性哮喘产妇和健康产妇的新生儿脐血分为哮喘组(n=12)和正常对照组(n=16),采用流式细胞术分选提纯嗜碱性粒细胞,锥虫蓝染色鉴... 目的研究不同刺激物干预对过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞分泌白介素4(IL-4)的影响。方法将源自过敏性哮喘产妇和健康产妇的新生儿脐血分为哮喘组(n=12)和正常对照组(n=16),采用流式细胞术分选提纯嗜碱性粒细胞,锥虫蓝染色鉴定细胞活性。在两组提纯后的嗜碱性粒细胞中分别加入ACM缓冲液(阴性对照)、肽聚糖(PGN)、粉尘螨浸液及甘露醇,采用ELISA法测定细胞培养上清液中IL-4的质量浓度。结果细胞分选结果显示:嗜碱性粒细胞纯度为(95.64±3.15)%,回收率为(60.22±7.18)%;锥虫蓝染色显示细胞活性为(99.4±0.89)%。与阴性对照比较,经PGN、粉尘螨浸液和甘露醇刺激后的哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著升高(P<0.05或P<0.01);经PGN和甘露醇刺激后,哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著高于正常对照组(P<0.05和P<0.01)。结论 PGN、粉尘螨及甘露醇可刺激过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞IL-4的分泌增加,通过诱导辅助性T淋巴细胞亚群Th2细胞的分化,参与哮喘的发生和发展。 展开更多

关键词 过敏性哮喘 嗜碱性粒细胞 脐血 白介素4

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噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库 被引量：2

4

作者 柴蔚然 杨涛 +1 位作者 胡晓年 牛勃 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期155-158,共4页

目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L in... 目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L inker-prim erm ix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体。再用RS prim erm ix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因。以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库。结果成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库。经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011pfu。结论rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子-Α 单链抗体 噬菌体展示技术 重组人TNF-α单链抗体库

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核基质结合区修饰的附着体载体介导的EGFP基因体外表达 被引量：1

5

作者 梅文瀚 吴兆平 +2 位作者 徐荣婷 钱关祥 卢健 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1233-1238,共6页

目的建立一个非病毒介导外源基因高效转移和稳定表达体系。方法采用EB病毒(EBV)来源的附着体质粒载体,并结合顺式作用元件IFN-MAR构建重组质粒pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR。采用荧光显微镜观察并摄片,FACS及逆转录-聚合酶... 目的建立一个非病毒介导外源基因高效转移和稳定表达体系。方法采用EB病毒(EBV)来源的附着体质粒载体,并结合顺式作用元件IFN-MAR构建重组质粒pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR。采用荧光显微镜观察并摄片,FACS及逆转录-聚合酶链反应检测EGFP表达阳性的COS-7细胞比例、荧光表达强度及EGFP基因的转录。通过Southern印迹和质粒还原实验分析质粒DNA在细胞中存在的形式。结果本实验构建的重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR在转染进入COS-7细胞后以染色体外附着体的形式存在。由于EBVR的存在,可以在体外获得EGFP较长时间的稳定表达。IFN-MAR替代O riP后,仍可在体外获得EGFP的稳定表达。结论MAR修饰的EBV附着体载体可以在体外获得外源基因高效稳定的表达。 展开更多

关键词 基因治疗 EB病毒 复制子 附着体质粒载体 核基质结合区

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Survivin基因启动子在肿瘤细胞株中的活性 被引量：1

6

作者 徐让 葛盛芳 +1 位作者 卢健 钱关祥 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期949-951,共3页

目的研究survivin基因启动子在多种肿瘤细胞株中的活性,为该启动子在肿瘤靶向性基因治疗中的应用提供依据。方法①用RT-PCR和Western blotting法检测survivin基因在多种肿瘤细胞株A549、MDA-MB231和HepG2中的表达;②利用脂质体将不同长... 目的研究survivin基因启动子在多种肿瘤细胞株中的活性,为该启动子在肿瘤靶向性基因治疗中的应用提供依据。方法①用RT-PCR和Western blotting法检测survivin基因在多种肿瘤细胞株A549、MDA-MB231和HepG2中的表达;②利用脂质体将不同长度的survivin基因启动子调控荧光素酶的报告基因载体瞬时转染A549、MDA-MB231和HepG2细胞,48 h后经荧光素酶检测,比较不同长度survivin基因启动子的活性。结果survivin基因在多种肿瘤细胞株中表达;987 bp、596 bp、269 bp和158 bp的survivin基因近端启动子在多种细胞株中均显示出较高的活性,其中翻译起始位点上游269 bp的启动子活性最高。结论survivin启动子在转录水平上可以驱动报告基因在多种肿瘤细胞中表达,是一个在肿瘤基因治疗中有潜力的启动子。 展开更多

关键词 SURVIVIN基因 启动子 肿瘤 基因治疗

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抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定 被引量：1

7

作者 杨涛 柴蔚然 +3 位作者 杨利军 程牛亮 解军 牛勃 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期930-936,共7页

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL... 应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化E.coli TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化E.coliHB2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础. 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 肿瘤坏死因子-Α 单链抗体

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CArG调控元件辐射诱导活性的研究

8

作者 徐让 卢健 钱关祥 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期385-388,共4页

目的构建含有人工合成CArG调控元件的荧光素酶报告基因重组质粒,研究该元件在多种肿瘤细胞中不同剂量放射线照射下的放射诱导活性。方法将含有9个串联的CCATATAAGG结构的CArG增强子与CMVIEbasalgenepromoter构成的嵌合调控元件插入到pGL... 目的构建含有人工合成CArG调控元件的荧光素酶报告基因重组质粒,研究该元件在多种肿瘤细胞中不同剂量放射线照射下的放射诱导活性。方法将含有9个串联的CCATATAAGG结构的CArG增强子与CMVIEbasalgenepromoter构成的嵌合调控元件插入到pGL3Basic质粒,构建荧光素酶报告质粒。利用脂质体将该报告质粒瞬时转染肿瘤细胞株HeLa、A549、HepG2,给予不同剂量137Csγ射线照射,36h后检测荧光素酶活性,观察该调控序列的放射诱导活性。结果该CArG调控元件在低剂量放射线的诱导下能明显增强下游基因的表达,在3Gy的γ射线照射下诱导活性最强。结论人工合成的CArG调控元件在低剂量的放射线作用下能有效诱导下游基因的表达,在肿瘤的放射-基因治疗中具有较强的应用潜力。 展开更多

关键词 CArG元件 放射 基因治疗 辐射诱导活性 肿瘤细胞

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过表达Notch1对肿瘤细胞增殖的影响 被引量：3

9

作者 俞海 葛盛芳 +1 位作者 卢健 钱关祥 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期289-292,共4页

目的通过在肿瘤细胞内过表达Notch1胞内段活性部分,模拟细胞Notch途径的上调,检测细胞增殖状态的变化。方法利用包含Notch1胞内段的逆转录病毒感染实验细胞。通过CBF-1报告载体检测细胞内Notch信号的激活程度,MTS法检测细胞增殖情况,并... 目的通过在肿瘤细胞内过表达Notch1胞内段活性部分,模拟细胞Notch途径的上调,检测细胞增殖状态的变化。方法利用包含Notch1胞内段的逆转录病毒感染实验细胞。通过CBF-1报告载体检测细胞内Notch信号的激活程度,MTS法检测细胞增殖情况,并对细胞的周期分布进行检测。结果Notch1胞内段的表达引起Notch信号在不同细胞中的上调,并引起Hela和HepG2细胞的增殖抑制和BGC-823细胞的增殖加速,而对Chang细胞的增殖没有明显影响。结论Notch信号的上调能引起不同肿瘤细胞增殖状态的变化,对Notch在肿瘤基因治疗中的应用具有重要意义。 展开更多

关键词 NOTCH 肿瘤 基因治疗

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基于互补决定区移植的单抗人源化进展 被引量：1

10

作者 朱啸林 程枫 钱关祥 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1382-1384,共3页

人源化单克隆抗体被日益广泛地应用于癌症等重大疾病的靶向治疗。互补决定区(CDR)移植使人源化单抗的大规模制备得以实现。文章就CDR移植的策略和进展进行综述。

关键词 互补决定区 移植 人源化 抗体 免疫原性

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溶瘤病毒的研究进展

11

作者 沈晓娣 钱关祥 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期544-547,共4页

近年来,溶瘤病毒用于肿瘤治疗的研究发展非常迅速,有些溶瘤病毒已进入临床试验阶段,并取得了一些令人鼓舞的成果。文章简要综述了溶瘤病毒肿瘤治疗的靶向性、杀伤性、安全性和疗效监测。

关键词 溶瘤病毒 肿瘤治疗 靶向性 杀伤性

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