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荧光转基因斑马鱼品系Tg(amh:mCherry)的构建及其性腺发育的示踪分析
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作者 吴婧 徐悦 +3 位作者 凌诗颖 宋怀东 乔洁 董梅 《上海交通大学学报(医学版)》 CSCD 北大核心 2024年第12期1587-1592,共6页
目的·建立一种用于研究性腺发育及相关疾病的转基因斑马鱼品系Tg(amh:mCherry),并对斑马鱼性腺的发育过程进行示踪分析。方法·使用斑马鱼抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,amh)基因编码区的上游启动子序列和红色荧... 目的·建立一种用于研究性腺发育及相关疾病的转基因斑马鱼品系Tg(amh:mCherry),并对斑马鱼性腺的发育过程进行示踪分析。方法·使用斑马鱼抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,amh)基因编码区的上游启动子序列和红色荧光蛋白的基因编码序列构建重组转基因表达载体pTol2-amh-mCherry,并采用Sanger测序对构建的载体进行验证。将上述载体和Tol2转座酶的mRNA显微共注射入斑马鱼胚胎,使用荧光显微镜挑选带有荧光的斑马鱼,筛选出能够稳定遗传的转基因斑马鱼品系Tg(amh:mCherry),并通过原位杂交技术检测荧光信号的位置与amh内源性表达位置是否一致。采用荧光显微镜观察F3代转基因斑马鱼的红色荧光情况,并对其性腺发育过程进行追踪和分析。结果·成功构建了pTol2-amhmCherry载体,并建立了能稳定遗传的F3代转基因斑马鱼品系Tg(amh:mCherry)。原位杂交技术的结果显示,该转基因斑马鱼的红色荧光信号位置与内源性amh表达位置一致。通过对F3代转基因斑马鱼荧光的观察和分析后发现,斑马鱼性腺的发育存在5种情况。结论·Tg(amh:mCherry)转基因斑马鱼品系的成功构建有利于对斑马鱼性腺发育的示踪分析,也为性腺相关疾病的研究提供了较理想的实验模型。 展开更多
关键词 抗米勒管激素 Tol2转座酶 转基因 斑马鱼 性腺
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