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小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒载体的构建及神经干细胞转染 被引量：3
1
作者 毕永延 潘栋超 +2 位作者 冯东福 陈二涛 汪洋 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1455-1459,共5页
目的构建共表达小鼠Wnt3a(mWnt3a)与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体,感染神经干细胞(NSCs),观察mWnt3a在NSCs中的表达。方法利用同源重组技术将mWnt3a基因插入慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1,构建pLVX-Wnt3a-IRES-Zs-Green1慢病毒重组质粒... 目的构建共表达小鼠Wnt3a(mWnt3a)与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体,感染神经干细胞(NSCs),观察mWnt3a在NSCs中的表达。方法利用同源重组技术将mWnt3a基因插入慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1,构建pLVX-Wnt3a-IRES-Zs-Green1慢病毒重组质粒,通过瞬时转染法包装出病毒上清,感染NSCs,设为Wnt3a-NSCs组;同时设GFP感染NSCs组(GFP-NSCs组)和未感染NSCs组(NSCs组)作为对照。免疫荧光染色法对Wnt3a-NSCs组NSCs进行nestin鉴定;Real-Time PCR检测各组细胞mWnt3a mRNA的表达;Western blotting检测各组细胞mWnt3a、β-catenin蛋白的表达。结果经限制性内切酶检测、基因测序和绿色荧光观察证实成功构建了携带mWnt3a基因的重组慢病毒,且慢病毒滴度达3×108TU/mL。Wnt3a-NSCs组NSCs在荧光显微镜下证实有绿色荧光,且nestin表达阳性。Real-Time PCR和Western blotting结果显示感染后7 d,Wnt3a-NSCs组mWnt3a mRNA和蛋白以及β-catenin蛋白均明显高于GFP-NSCs组和NSCs组(P<0.01)。结论成功构建了表达mWnt3a基因的慢病毒载体,在体外培养条件下可以成功转染NSCs。 展开更多
关键词 神经干细胞 WNT3A 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 基因治疗
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绿色荧光蛋白转基因胚胎大鼠神经干细胞生物学特性研究 被引量：6
2
作者 刘勇 冯东福 +1 位作者 陈二涛 汪洋 《实用医学杂志》 CAS 2008年第5期709-712,共4页
目的:体外分离、培养、鉴定绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因胚胎大鼠神经干细胞,研究其体外活性与生物学性状,为在体分化示踪研究奠定基础。方法:采用机械分离,无血清传代培养法从GFP胚胎大鼠海马获得神经干细胞,免... 目的:体外分离、培养、鉴定绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因胚胎大鼠神经干细胞,研究其体外活性与生物学性状,为在体分化示踪研究奠定基础。方法:采用机械分离,无血清传代培养法从GFP胚胎大鼠海马获得神经干细胞,免疫荧光和免疫细胞化学法染色进行体外神经干细胞性质和分化活性鉴定,并利用流式细胞计数法行纯度检测。结果:成功从GFP胎鼠海马获得神经干细胞,体外生长情况与活性良好,能分化成神经元和胶质细胞;体外连续传代3次后绝大部分细胞Nestin表达阳性,且分化后细胞的GFP表达不受影响。结论:GFP胚胎大鼠来源神经干细胞具有普通胎鼠神经干细胞相同的自我更新和多向分化潜能,且能稳定表达GFP,因此它可以成为示踪神经干细胞研究的有效工具细胞。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白质类转 基因 胚胎 神经干细胞 生物学特性
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Porf-2基因过表达慢病毒载体的构建以及神经细胞的转染 被引量：2
3
作者 黄国辉 杨西涛 +4 位作者 陈奎 邢进 朱亮 李泓江 冯东福 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1809-1813,共5页
目的构建视前区调控因子2(Porf-2)与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的慢病毒载体,包装慢病毒并体外感染神经细胞。方法根据Gen Bank中基因信息,设计Porf-2的引物,采用PCR扩增Porf-2基因片段;运用基因重组技术,双酶切Porf-2,并将其克隆至p LVX-... 目的构建视前区调控因子2(Porf-2)与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的慢病毒载体,包装慢病毒并体外感染神经细胞。方法根据Gen Bank中基因信息,设计Porf-2的引物,采用PCR扩增Porf-2基因片段;运用基因重组技术,双酶切Porf-2,并将其克隆至p LVX-IRES-Zs Green1载体,经酶切、测序加以鉴定重组质粒。将成功构建的质粒与包装系统VSVG、Δ89质粒共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度。结果经酶切和测序鉴定表明成功构建了p LVX-Porf-2-IRES-Zs Green1的基因重组慢病毒载体;将成功包装的病毒感染NG108细胞、海马原代神经元以及神经干细胞后,可观察到大量绿色荧光表达;Western blotting证实Porf-2成功过表达。结论成功构建Porf-2与GFP基因共表达的慢病毒载体、包装慢病毒,并感染NG108、海马原代神经元以及神经干细胞。 展开更多
关键词 视前区调控因子2 绿色荧光蛋白 慢病毒 神经细胞
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创伤性脑疝后双侧枕叶脑梗死伴Anton综合征一例报道 被引量：8
4
作者 陈二涛 杨西涛 +1 位作者 楚胜华 冯东福 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1494-1495,共2页
文章报道1例创伤性脑疝后双侧枕叶脑梗死伴Anton综合征病例。术后早期因患者无视物障碍主诉而未予视觉功能情况检查,术后3周余查体发现眼球固定、双眼上视,颅脑CT及MRI确诊为双侧枕叶脑梗死。予脱水、营养神经及高压氧等治疗,效果欠佳... 文章报道1例创伤性脑疝后双侧枕叶脑梗死伴Anton综合征病例。术后早期因患者无视物障碍主诉而未予视觉功能情况检查,术后3周余查体发现眼球固定、双眼上视,颅脑CT及MRI确诊为双侧枕叶脑梗死。予脱水、营养神经及高压氧等治疗,效果欠佳。文章结合文献,对该病例的相关问题进行探讨。 展开更多
关键词 颅脑创伤 脑疝 双侧枕叶脑梗死 Anton综合征
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小型猪脑外伤急性颅内高压并失血性休克模型的建立 被引量：4
5
作者 罗伟 李雪元 +4 位作者 李甲 渠兴乾 陈李骏 沈伯雄 冯东福 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1106-1110,共5页
目的建立小型猪脑外伤急性颅内高压并失血性休克模型,模拟多发伤失血性休克合并脑外伤急性硬膜外血肿,分析其形态学改变。方法对16只实验用小型猪,采用简易脑皮层气击装置致伤一侧脑额叶,硬膜外球囊法致急性颅内高压,改良Wigger氏休克... 目的建立小型猪脑外伤急性颅内高压并失血性休克模型,模拟多发伤失血性休克合并脑外伤急性硬膜外血肿,分析其形态学改变。方法对16只实验用小型猪,采用简易脑皮层气击装置致伤一侧脑额叶,硬膜外球囊法致急性颅内高压,改良Wigger氏休克模型法致失血性休克。观察模型制备前(T01)及放血完成后即刻(T0)、15min(T15)、30min(T30)、60min(T60)五个时间点的平均动脉压(MAP)、颅内压(ICP)和脑灌注压(CPP);于T01和T60两个时间点测颈静脉血氧饱和度(SjvO2)。随机选取2只动物,于模型制备前和制备后6h分别行头颅冠状位CT和MRI检查。模型制备后6h,随机选取2只动物分别行脑大体病理、HE染色观察和超微结构观察。结果与T01时间点比较,T0时间点MAP和CPP明显下降,ICP明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与T0时间点比较,T15、T30和T60时间点的MAP、ICP和CCP无明显变化(P>0.05)。T60时间点SjvO2较T01时间点明显下降(P<0.05)。影像学检查发现,创伤性硬膜下出血,中线偏移,对侧脑室扩张。HE染色观察发现,创伤灶及周围脑组织水肿明显,炎症细胞浸润,毛细血管周隙出血,白质区淤点性出血以及灰质挫裂伤。超微结构观察显示,创伤灶、周围和对侧脑组织表现为严重程度递减的改变,包括神经元坏死、变性,轴索脱髓鞘,线粒体肿胀,内皮细胞水肿等形态改变。结论采用控制性脑皮层冲击、硬膜外球囊及股动脉放血方法建立的小型猪脑外伤急性颅内高压并失血性休克组合模型,可模拟临床多发伤失血性休克并脑外伤急性硬膜外血肿,并能用于CPP和脑氧供需平衡的监测。 展开更多
关键词 创伤性脑损伤 颅内高压 失血性休克 颈静脉血氧饱和度 动物模型 小型猪
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弥漫性轴索损伤预后影响因素的Logistic回归分析 被引量：5
6
作者 王洪财 陈海 +4 位作者 王波定 谢光天 庄步峰 张红 马延斌 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1466-1469,共4页
目的探讨影响弥漫性轴索损伤（DAI）患者长期预后的相关因素。方法采用定群病例的前瞻性研究,记录75例DAI患者的相关指标及伤后6个月随访结果,对其临床和影像相关指标与预后进行单因素和多因素分析,多因素分析采用Logistic逐步回归分析... 目的探讨影响弥漫性轴索损伤（DAI）患者长期预后的相关因素。方法采用定群病例的前瞻性研究,记录75例DAI患者的相关指标及伤后6个月随访结果,对其临床和影像相关指标与预后进行单因素和多因素分析,多因素分析采用Logistic逐步回归分析。结果 Logistic逐步回归分析显示入院格拉斯哥昏迷评分（GCS）（OR=0.021,95%CI0.0071.557）、双侧瞳孔变化（OR=27.532,95%CI8.97557.413）、MR I弥散加权成像脑中轴部位病灶数（OR=5.753,95%CI2.1369.392）及脑中轴部位平均表观弥散系数（OR=0.353,95%CI0.1340.964）是影响DAI患者预后的相关因素;上述相关因素结合后预测DAI患者预后的准确率达92.0%。结论入院GCS、双侧瞳孔变化、MR I弥散加权成像脑中轴部位病灶数及脑中轴部位平均表观弥散系数是影响DAI患者预后的独立相关因素;临床因素与影像学指标结合则能更准确地评估DAI患者预后。 展开更多
关键词 弥漫性轴索损伤 LOGISTIC回归分析 预后
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影像学技术在创伤性脑损伤预后评估中的应用及进展 被引量：5
7
作者 王杨 温明哲 马延斌 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第17期2704-2705,共2页
创伤性脑损伤（traumaticbraininjury．TBI）是医疗卫生领域严重的世界性问题。根据流行病学调查显示，美国每年大约170万人罹惠TBI，其中约有27．5万人接受住院治疗．5-2万人死亡，12．4万人遗留长期损伤或者永久残疾。对于TBI的预后... 创伤性脑损伤（traumaticbraininjury．TBI）是医疗卫生领域严重的世界性问题。根据流行病学调查显示，美国每年大约170万人罹惠TBI，其中约有27．5万人接受住院治疗．5-2万人死亡，12．4万人遗留长期损伤或者永久残疾。对于TBI的预后评估是神经外科多年来一直探讨的热点问题。影像学在临床上对TBI预后的评估有着重要作用。本文就近年来一些较新的影像学技术在TBI预后评估中的应用进行综述如下。 展开更多
关键词 创伤性脑损伤 影像学技术 预后评估 应用 医疗卫生领域 流行病学调查 世界性问题 TBI
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肝细胞生长因子受体的shRNA抑制胶质瘤生长的体内外研究 被引量：2
8
作者 楚胜华 冯东福 马延斌 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第1期34-35,共2页
目的:探讨肝细胞生长因子受体(c-metprotooncogene,c-Met)的RNA干涉(RNAi)技术在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法:PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至U251细胞;应用MTT法、流式... 目的:探讨肝细胞生长因子受体(c-metprotooncogene,c-Met)的RNA干涉(RNAi)技术在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法:PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至U251细胞;应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转导前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察腺病毒载体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长的抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组化的方法进行c-Met和增殖细胞核抗原(PCNA)表达比较。结果:MTT法分析显示rAdUshmet2转导组细胞生长抑制率为70%;与对照组和rAdUsicon转导组比较,细胞周期分析结果表明rAdUshmet2转导组G0～G1期细胞数没有明显变化,进入S期的细胞数较对照组减少了12.6%～12.9%,而进入G2期细胞则增加了10.6%～l1.8%。Matrigel基质生长实验显示对照组和rAdUsicon转导组细胞呈正常形态贴壁生长,而rAdUshmet2转导组细胞不能贴壁生长,呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示rAdUshmet2显著抑制皮下肿瘤生长,组织病理学分析显示治疗组c-Met表达下降、PCNA标记指数降低。结论:靶向c-Met的RNAi技术在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。因此,shRNA表达腺病毒载体介导的基因治疗可以成为胶质瘤靶向性c-Met治疗的新策略。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 肝细胞生长因子受体 腺病毒 RNA干扰 增殖
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以蛛网膜下腔出血为首发症状的颅内动脉瘤合并垂体瘤1例报告 被引量：1
9
作者 陈奎 姜秀峰 +1 位作者 杨西涛 冯东福 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1770-1772,共3页
目的探讨以蛛网膜下腔出血为首发症状的颅内动脉瘤合并垂体瘤的诊断及治疗。方法分析1例颅内动脉瘤合并垂体瘤患者的临床表现及体格检查和辅助检查结果,并复习相关文献。结果患者,男性,53岁,因突发头痛伴颈部僵硬4 h就诊。查体:血压203/... 目的探讨以蛛网膜下腔出血为首发症状的颅内动脉瘤合并垂体瘤的诊断及治疗。方法分析1例颅内动脉瘤合并垂体瘤患者的临床表现及体格检查和辅助检查结果,并复习相关文献。结果患者,男性,53岁,因突发头痛伴颈部僵硬4 h就诊。查体:血压203/123 mm Hg,神志清楚,急性面容,视力及视野粗测未见异常,Kerning征(+)。术前CT平扫示蛛网膜下腔出血,鞍上池高密度影;颅脑CTA示前交通动脉处瘤样突起;入院当日行全脑数字减影血管造影检查示前交通动脉处瘤样突起。发病24 h后行前交通动脉瘤夹闭术,术中发现视交叉前池一类圆形肿物,有包膜,质地较韧,色泽灰红,直径约3 cm。结合术前影像考虑为垂体瘤,行次全切除后沿左侧颈内动脉向远侧探查,可见一前交通动脉瘤,瘤体直径约3 mm,使用Yasargil动脉瘤夹1枚夹闭瘤颈。术后1周复查颅脑CTA示前交通动脉处瘤样突起消失。结论对于以蛛网膜下腔出血合并鞍上池高密度影的患者,除了警惕为颅内动脉瘤破裂之外,还应考虑颅内动脉瘤合并垂体瘤的可能。 展开更多
关键词 蛛网膜下腔出血 颅内动脉瘤 垂体瘤
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视前区调控因子-2的研究进展 被引量：1
10
作者 黄国辉 黄朝帅 冯东福 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第17期2913-2915,共3页
视前区调控因子-2（preopticregulatoryfactor-2。porf-2）是首先在中枢神经系统中发现的生长调控因子，最初在去势的雄性大鼠下丘脑视前区被发现,其mRNA的表达水平和年龄、性别以及激素水平有关，并具有区域特殊性。随后porf-2在人体... 视前区调控因子-2（preopticregulatoryfactor-2。porf-2）是首先在中枢神经系统中发现的生长调控因子，最初在去势的雄性大鼠下丘脑视前区被发现,其mRNA的表达水平和年龄、性别以及激素水平有关，并具有区域特殊性。随后porf-2在人体的各个组织器官如：下丘脑、睾丸、肾上腺、胎盘和前列腺等不断被发现。 展开更多
关键词 下丘脑视前区 生长调控因子 中枢神经系统 激素水平 雄性大鼠 mRNA 组织器官 肾上腺
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