目的·挖掘F-box蛋白22(F-box only protein 22,FBXO22)的底物并明确其作用机制,进一步探讨FBXO22在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法·利用免疫沉淀联合质谱分析寻找并验证FBXO22的相互作用蛋白凋亡诱导因子(apoptosis-inducing fac...目的·挖掘F-box蛋白22(F-box only protein 22,FBXO22)的底物并明确其作用机制,进一步探讨FBXO22在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法·利用免疫沉淀联合质谱分析寻找并验证FBXO22的相互作用蛋白凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)。采用变性条件下泛素化修饰实验检测FBXO22对AIF泛素化修饰的影响。通过短发夹RNA敲低FBXO22、过表达FBXO22检测AIF的表达水平。利用流式细胞仪检测FBXO22敲低或过表达对结肠癌细胞凋亡的影响。结果·免疫沉淀联合质谱分析显示FBXO22可与AIF结合,变性条件下泛素化修饰实验显示FBXO22可介导AIF的泛素化修饰。敲低FBXO22可上调AIF水平,过表达FBXO22可下调AIF水平。流式细胞术结果显示,敲低FBXO22可促进由甲基硝基亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)等诱导的结肠癌细胞凋亡,过表达FBXO22则可抑制MNNG等诱导的结肠癌细胞凋亡。结论·FBXO22通过泛素化修饰降解AIF进而调控由AIF介导的结肠癌细胞凋亡。展开更多
目的·分析Fbxo22基因敲除小鼠的表型,为探索FBXO22的生物学功能提供理论依据。方法·利用CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR associated protein 9)技术成功构建Fbxo22全身敲除小...目的·分析Fbxo22基因敲除小鼠的表型,为探索FBXO22的生物学功能提供理论依据。方法·利用CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR associated protein 9)技术成功构建Fbxo22全身敲除小鼠,观察胚胎和小鼠的外观,测定其数量和质量,并分析小鼠的进食量和存活时间。结果·Fbxo22敲除小鼠胚胎期17.5/18.5 d的胚胎数量符合孟德尔遗传定律,外观未见异常,但是多数Fbxo22敲除小鼠在出生后48 h内死亡。少数存活小鼠体型偏小,进食减少,存活时间缩短。结论·FBXO22对于小鼠出生后早期存活和正常发育有重要作用。展开更多
文摘目的·挖掘F-box蛋白22(F-box only protein 22,FBXO22)的底物并明确其作用机制,进一步探讨FBXO22在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法·利用免疫沉淀联合质谱分析寻找并验证FBXO22的相互作用蛋白凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)。采用变性条件下泛素化修饰实验检测FBXO22对AIF泛素化修饰的影响。通过短发夹RNA敲低FBXO22、过表达FBXO22检测AIF的表达水平。利用流式细胞仪检测FBXO22敲低或过表达对结肠癌细胞凋亡的影响。结果·免疫沉淀联合质谱分析显示FBXO22可与AIF结合,变性条件下泛素化修饰实验显示FBXO22可介导AIF的泛素化修饰。敲低FBXO22可上调AIF水平,过表达FBXO22可下调AIF水平。流式细胞术结果显示,敲低FBXO22可促进由甲基硝基亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)等诱导的结肠癌细胞凋亡,过表达FBXO22则可抑制MNNG等诱导的结肠癌细胞凋亡。结论·FBXO22通过泛素化修饰降解AIF进而调控由AIF介导的结肠癌细胞凋亡。
