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果糖通过尿酸和活性氧簇诱导人肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达 被引量:1
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作者 王巧玲 陈晓欢 +3 位作者 倪兆慧 顾乐怡 徐辰祺 戴慧莉 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期386-393,共8页
目的·探讨果糖诱导肾小管上皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattratant protein-1,MCP-1)的机制。方法·将HK-2细胞分为对照组,果糖孵育(1、5和10 mmol/L)组,果糖、己酮糖激酶抑制剂(KHK-IN)共孵育(果糖5 mmol/L,K... 目的·探讨果糖诱导肾小管上皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattratant protein-1,MCP-1)的机制。方法·将HK-2细胞分为对照组,果糖孵育(1、5和10 mmol/L)组,果糖、己酮糖激酶抑制剂(KHK-IN)共孵育(果糖5 mmol/L,KHKIN分别为12、100和1 000 nmol/L)组,尿酸孵育(5、15和50 mg/d L)组,果糖、别嘌醇共孵育(果糖5 mmol/L,别嘌醇分别为0.01、0.1和0.5 mmol/L)组,尿酸、别嘌醇共孵育(尿酸50 mg/d L,别嘌醇分别为0.01、0.1和0.5 mmol/L)组,H2O2孵育(0.1和0.3 mmol/L)组,果糖、N-乙酰半胱氨酸(NAC)共孵育(果糖5 mmol/L,NAC分别为5、10和50 mmol/L)组,尿酸、NAC共孵育(尿酸50 mg/d L,NAC分别为5、10和50 mmol/L)组。采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测MCP-1 m RNA和蛋白的表达;利用活性氧(ROS)荧光探针观察果糖和尿酸对HK-2细胞ROS产生的影响。结果·果糖剂量及时间依赖性诱导HK-2细胞MCP-1 m RNA转录和蛋白表达,此过程可被KHK-IN阻断。外源性尿酸诱导HK-2细胞产生MCP-1,别嘌醇抑制果糖引起的MCP-1表达,但不能阻断外源性尿酸的作用。果糖和尿酸均诱导HK-2细胞产生ROS,别嘌醇抑制了果糖而非外源性尿酸诱导的ROS产生。H2O2诱导HK-2细胞生成MCP-1,NAC则抑制这种作用。结论·果糖在己酮糖激酶催化下,通过引起细胞内尿酸升高和产生ROS,导致人肾小管上皮细胞产生MCP-1。 展开更多
关键词 果糖 尿酸 活性氧簇 HK-2细胞
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终末期肾病患者骨骼肌中丙酮酸脱氢酶活性与丙酮酸脱氢酶激酶4的表达 被引量:2
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作者 徐辰祺 闵璐琳 +8 位作者 陈晓欢 陆任华 朱铭力 谢可炜 钱盈盈 郭相江 倪兆慧 阿依加肯·卡司木马力 顾乐怡 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期305-309,共5页
目的·探讨终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)患者骨骼肌丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase,PDH)活性及丙酮酸脱氢酶激酶4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)在骨骼肌中表达水平的变化。方法·收取ESRD患者和... 目的·探讨终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)患者骨骼肌丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase,PDH)活性及丙酮酸脱氢酶激酶4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)在骨骼肌中表达水平的变化。方法·收取ESRD患者和非慢性肾脏病(non-chronic kidney diseases,non-CKD)患者骨骼肌样本,比较2组患者的临床特征,ELISA法检测PDH活性,实时荧光定量PCR法检测PDK1~PDK4型同工酶、PDH各亚基的基因转录水平,Western blotting检测PDK1和PDK4蛋白表达水平。结果·non-CKD组和ESRD组患者在一般人口学资料上无明显差异,ESRD组血浆肌酐、尿素氮显著升高(均P<0.05),估算的肾小球滤过率、血红蛋白、白蛋白则显著降低(均P<0.05)。ESRD组骨骼肌PDH活性显著低于non-CKD组(P=0.014),2组患者骨骼肌PDK1~PDK4及PDH各亚基mRNA转录水平无明显差异,ESRD组PDK4蛋白表达量显著高于non-CKD对照组(P=0.000)。结论·ESRD患者骨骼肌中PDH活性下降,可能与PDK4表达上调有关。 展开更多
关键词 终末期肾病 骨骼肌 丙酮酸脱氢酶 丙酮酸脱氢酶激酶4 线粒体
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激活足细胞环腺苷酸信号调节细胞磷酸化ERM和CLIC5的表达 被引量:2
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作者 陈晓欢 阿依加肯·卡司木马力 +3 位作者 陶花 李肖瑛 魏凯 顾乐怡 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1574-1580,1594,共8页
目的研究足细胞内环腺苷酸(c AMP)信号对足细胞标志蛋白Podocalyxin、细胞内氯离子通道蛋白5(CLIC5)及相关的埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白(ERM)表达的影响。方法构建阿霉素(ADR)肾病小鼠模型,部分小鼠使用腺苷酸环化酶激活剂Forskolin治疗(... 目的研究足细胞内环腺苷酸(c AMP)信号对足细胞标志蛋白Podocalyxin、细胞内氯离子通道蛋白5(CLIC5)及相关的埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白(ERM)表达的影响。方法构建阿霉素(ADR)肾病小鼠模型,部分小鼠使用腺苷酸环化酶激活剂Forskolin治疗(ADR组和ADR+Forskolin组)。考马斯亮蓝染色法测定尿液中蛋白质含量;电子显微镜观察足突宽度;免疫荧光染色和Western blotting检测足细胞中磷酸化ERM(P-ERM)、CLIC5和Podocalyxin的表达。结果与ADR组比较,ADR+Forskolin组小鼠尿白蛋白含量明显减少,足突增宽显著改善(P<0.05)。Western blotting和免疫荧光染色结果显示:与ADR组比较,ADR+Forskolin组小鼠足细胞内P-ERM、Podocalyxin和CLIC5蛋白表达及共定位均显著增加。Western blotting检测结果显示:体外以嘌呤霉素氨基核苷(PAN)孵育足细胞72 h,可使P-ERM和CLIC5的表达显著减少(P<0.01);Epac信号激动剂2Me-c AMP预处理可防止PAN诱导的足细胞P-ERM低表达,而PKA信号激动剂p CPT-c AMP预处理可防止PAN诱导的CLIC5表达减少。结论 Forskolin可减轻ADR肾炎小鼠的白蛋白尿,改善足突融合,缓解Podocalyxin/CLIC5/ERM蛋白复合体低表达。c AMP分别通过PKA和Epac信号通路防止PAN诱导的CLIC5和P-ERM表达降低。 展开更多
关键词 蛋白尿 足细胞 环腺苷酸 细胞骨架
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不同培养基对血液透析用水细菌菌落检测比较 被引量:6
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作者 蔡宏 张伟明 +7 位作者 杨海慧 王咏梅 张斌 蒋蓉 应春妹 严玉澄 倪兆慧 钱家麒 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期56-59,87,共5页
目的比较各种培养基在不同培养温度和时间条件下对血液透析用水的细菌检出率,探索临床上合适的透析用水细菌菌落检测方法。方法2012年1—12月随机采集上海交通大学医学院附属仁济医院血液净化中心透析用水样本共152份。分别接种在血培... 目的比较各种培养基在不同培养温度和时间条件下对血液透析用水的细菌检出率,探索临床上合适的透析用水细菌菌落检测方法。方法2012年1—12月随机采集上海交通大学医学院附属仁济医院血液净化中心透析用水样本共152份。分别接种在血培养基、胰蛋白酶大豆琼脂(TSA)、Reasoner’2A琼脂(R2A)和胰蛋白胨葡萄糖浸膏琼脂(TGEA)的4种培养基,分别在20℃、30℃和35℃培养48~168h。培养结束时对每个培养皿进行细菌菌落计数。结果血培养基组透析用水细菌菌落计数和细菌检出率最低,与TGEA和R2A相比差异具有统计学意义(P〈0.05和P〈0.01)。R2A在20℃环境下培养168h,细菌检出率较血培养35℃培养48h显著增加(67.1%vs43.4%,P〈0.01)。Bland.Ahman分析显示,R2A培养基20℃培养168h与TGEA培养基30℃培养120h两组细菌检出率具有较好的一致性。结论使用R2A或TGEA培养基较血培养基显著提高透析用水细菌菌落计数和细菌检出率。临床上适合选用R2A培养基20℃、168h或TGEA培养基30℃、120h方法对血液透析用水进行细菌菌落检测。 展开更多
关键词 细菌培养 血液透析 培养基 透析用水
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急性肾损伤小鼠肺组织损伤特点及水孔蛋白表达研究 被引量:4
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作者 王丽锋 朱铭力 +5 位作者 吴蓓 顾乐怡 倪兆慧 钱家麒 戴慧莉 严玉澄 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期411-416,共6页
目的研究急性肾损伤小鼠肺组织损伤特点及水孔蛋白(AQP)表达变化。方法 75只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(n=25)和急性肾损伤组(n=50),后者分别经缺血再灌注(I/R组,n=25)和双侧肾切除(BNx组,n=25)建立急性肾损伤模型。于造模后即刻(... 目的研究急性肾损伤小鼠肺组织损伤特点及水孔蛋白(AQP)表达变化。方法 75只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(n=25)和急性肾损伤组(n=50),后者分别经缺血再灌注(I/R组,n=25)和双侧肾切除(BNx组,n=25)建立急性肾损伤模型。于造模后即刻(0 h)和2、4、6、24 h时点,分批处死动物留取肺脏组织。HE染色光学显微镜观察肺组织病理学改变,进行中性粒细胞浸润计数;计算肺湿质量与干质量比值(W/D);采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)技术和免疫组织化学方法检测肺组织AQP-1、AQP-5 mRNA和蛋白表达。结果 I/R组和BNx组小鼠分别从造模后2 h和4 h出现肺组织炎症细胞浸润、肺泡内出血和肺间质水肿;BNx组造模后4、6、24 h时点和I/R组造模后2、4、6、24 h时点小鼠肺脏组织中性粒细胞浸润计数均显著高于假手术组(P<0.05)。BNx组和I/R组小鼠造模后4、6、24 h时点的W/D均显著高于假手术组(P<0.05)。BNx组和I/R组小鼠造模后各时点肺组织AQP-1 mRNA和蛋白表达与假手术组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。BNx组小鼠造模后2、4、6、24 h时点肺组织AQP-5 mRNA和蛋白表达均显著低于假手术组(P<0.05);I/R组小鼠造模后6 h和24 h时点肺组织AQP-5 mRNA和蛋白表达均显著低于假手术组(P<0.05)。结论肺水肿是急性肾损伤后急性肺损伤的典型表现,其发生可能与炎症反应和AQP-5表达的改变有关。 展开更多
关键词 急性肾损伤 急性肺损伤 水孔蛋白 炎症
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