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人胚胎干细胞向类间充质干细胞的诱导分化及鉴定
被引量：
4
1
作者
石伦刚
唐郑雅
+2 位作者
陆峻泓
曹谊林
张文杰
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期307-311,共5页
目的建立诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化的方法,并鉴定细胞的生物学特性。方法人胚胎干细胞在无血清条件下悬浮培养形成类胚体,10d后在含血清条件下使类胚体贴壁生长,5～6d后机械法剔除类胚体中心区高密度重叠细胞,保留周边铺展...
目的建立诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化的方法,并鉴定细胞的生物学特性。方法人胚胎干细胞在无血清条件下悬浮培养形成类胚体,10d后在含血清条件下使类胚体贴壁生长,5～6d后机械法剔除类胚体中心区高密度重叠细胞,保留周边铺展细胞并传代扩增。观察诱导分化与传代扩增后细胞的形态学变化;免疫荧光染色和流式细胞术进行细胞表型分析。取第5代细胞进行成脂、成骨和成软骨诱导,3～4周后运用特殊染色及RT-PCT技术检测细胞成脂、成骨及成软骨分化能力。结果诱导分化后细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的形态,扩增能力较强,多次扩增传代后细胞形态和增殖能力无明显改变。免疫荧光染色发现细胞表达中胚层标志波型蛋白(vimentin)。流式细胞术分析显示,细胞表达CD29、CD105、CD166等间充质干细胞表面标志。特殊染色及RT-PCT检测结果显示,成脂诱导后多数细胞油红染色阳性,脂蛋白酶和leptin表达增加;成骨诱导后细胞茜素红染色阳性,碱性磷酸酶和Cbfa-1表达增加;成软骨诱导后细胞Ⅱ型胶原染色阳性,Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达增强。结论成功诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化。分化获得的细胞增殖能力强,表达间充质干细胞的特异性标志,并具有多向分化潜能。
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关键词
人胚胎干细胞
间充质干细胞
诱导
分化
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职称材料
诱导小鼠胚胎干细胞分化获取血管平滑肌和内皮细胞
被引量：
1
2
作者
皮庆猛
岳伟
+3 位作者
付炜
石伦刚
曹谊林
张文杰
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第1期1-4,共4页
目的探讨从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取体外构建组织工程化血管种子细胞的可行性。方法利用Flk-1作为小鼠胚胎干细胞分化来源的血管前体细胞标志,流式细胞仪分选分化的类胚体中Flk-1阳性细胞,分别添加血小板源生长因子(PDGF)、血管...
目的探讨从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取体外构建组织工程化血管种子细胞的可行性。方法利用Flk-1作为小鼠胚胎干细胞分化来源的血管前体细胞标志,流式细胞仪分选分化的类胚体中Flk-1阳性细胞,分别添加血小板源生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF),诱导血管前体细胞向血管平滑肌细胞和血管内皮细胞分化。免疫荧光染色鉴定诱导分化后细胞的相关标志表达;流式细胞仪分析诱导分化后细胞的分化效率和纯度。结果流式细胞仪分析显示,在分化第4天类胚体中有50%左右的细胞表达Flk-1,经分选的Flk-1阳性细胞通过进一步诱导,可以得到(95.9±3.5)%α-SMA阳性的血管平滑肌细胞和(59.1±4.8)%CD31阳性的血管内皮细胞。结论成功应用流式细胞分选法从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取血管平滑肌细胞和血管内皮细胞,实验为组织工程化血管构建中种子细胞来源提供了新途径。
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关键词
胚胎干细胞
FLK-1
平滑肌细胞
血管内皮细胞
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职称材料
题名
人胚胎干细胞向类间充质干细胞的诱导分化及鉴定
被引量：
4
1
作者
石伦刚
唐郑雅
陆峻泓
曹谊林
张文杰
机构
上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海组织工程国家工程研究中心
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期307-311,共5页
基金
国家重点基础研究发展计划("973"计划) (2005CB522705)
国家自然科学基金(30571925
30671051)~~
文摘
目的建立诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化的方法,并鉴定细胞的生物学特性。方法人胚胎干细胞在无血清条件下悬浮培养形成类胚体,10d后在含血清条件下使类胚体贴壁生长,5～6d后机械法剔除类胚体中心区高密度重叠细胞,保留周边铺展细胞并传代扩增。观察诱导分化与传代扩增后细胞的形态学变化;免疫荧光染色和流式细胞术进行细胞表型分析。取第5代细胞进行成脂、成骨和成软骨诱导,3～4周后运用特殊染色及RT-PCT技术检测细胞成脂、成骨及成软骨分化能力。结果诱导分化后细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的形态,扩增能力较强,多次扩增传代后细胞形态和增殖能力无明显改变。免疫荧光染色发现细胞表达中胚层标志波型蛋白(vimentin)。流式细胞术分析显示,细胞表达CD29、CD105、CD166等间充质干细胞表面标志。特殊染色及RT-PCT检测结果显示,成脂诱导后多数细胞油红染色阳性,脂蛋白酶和leptin表达增加;成骨诱导后细胞茜素红染色阳性,碱性磷酸酶和Cbfa-1表达增加;成软骨诱导后细胞Ⅱ型胶原染色阳性,Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达增强。结论成功诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化。分化获得的细胞增殖能力强,表达间充质干细胞的特异性标志,并具有多向分化潜能。
关键词
人胚胎干细胞
间充质干细胞
诱导
分化
Keywords
human embryonic stem cells
mesenchymal stem cells
induction
differentiation
分类号
R329 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
诱导小鼠胚胎干细胞分化获取血管平滑肌和内皮细胞
被引量：
1
2
作者
皮庆猛
岳伟
付炜
石伦刚
曹谊林
张文杰
机构
上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海组织工程国家工程研究中心
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第1期1-4,共4页
基金
国家重点基础研究发展计划("973"计划)(2005CB522705)
国家自然科学基金(30571925)
上海市曙光计划(06SG22)~~
文摘
目的探讨从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取体外构建组织工程化血管种子细胞的可行性。方法利用Flk-1作为小鼠胚胎干细胞分化来源的血管前体细胞标志,流式细胞仪分选分化的类胚体中Flk-1阳性细胞,分别添加血小板源生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF),诱导血管前体细胞向血管平滑肌细胞和血管内皮细胞分化。免疫荧光染色鉴定诱导分化后细胞的相关标志表达;流式细胞仪分析诱导分化后细胞的分化效率和纯度。结果流式细胞仪分析显示,在分化第4天类胚体中有50%左右的细胞表达Flk-1,经分选的Flk-1阳性细胞通过进一步诱导,可以得到(95.9±3.5)%α-SMA阳性的血管平滑肌细胞和(59.1±4.8)%CD31阳性的血管内皮细胞。结论成功应用流式细胞分选法从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取血管平滑肌细胞和血管内皮细胞,实验为组织工程化血管构建中种子细胞来源提供了新途径。
关键词
胚胎干细胞
FLK-1
平滑肌细胞
血管内皮细胞
Keywords
embryonic stem cell
Flk-1
smooth muscle cell
endothelial cell
分类号
R329.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人胚胎干细胞向类间充质干细胞的诱导分化及鉴定
石伦刚
唐郑雅
陆峻泓
曹谊林
张文杰
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009
4
在线阅读
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职称材料
2
诱导小鼠胚胎干细胞分化获取血管平滑肌和内皮细胞
皮庆猛
岳伟
付炜
石伦刚
曹谊林
张文杰
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
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