皮肤成纤维细胞构建组织工程化猪角膜基质样组织 被引量：5

1

作者 张艳青 张文杰 +4 位作者 胡晓洁 周广东 崔磊 刘伟 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期156-160,共5页

目的探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞,在猪角膜微环境中构建组织工程化角膜基质组织的可行性。方法分离获取胎猪皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增。通过转染绿色荧光蛋白(GFP)基因标记细胞,示踪细胞的转归。选取第3代的细胞接种于可吸收... 目的探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞,在猪角膜微环境中构建组织工程化角膜基质组织的可行性。方法分离获取胎猪皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增。通过转染绿色荧光蛋白(GFP)基因标记细胞,示踪细胞的转归。选取第3代的细胞接种于可吸收生物材料聚羟基乙酸(PGA),形成细胞-生物材料复合物,体外培养1周后,移植于猪的角膜基质层内,于第8周取材进行大体、组织学检查及超微结构观察。以角膜基质细胞为种子细胞构建的组织工程化角膜基质组织作为对照。结果术后8周,实验组角膜逐渐恢复透明,与对照组角膜无明显差别。组织学检查显示形成新生的角膜基质样组织,呈板层状,排列较规则,与对照组角膜组织相似。超微结构观察及胶原纤维直径检测显示,实验组与对照组角膜组织差异无统计学意义。荧光显微镜观察到GFP阳性细胞存在。结论皮肤成纤维细胞可能替代角膜基质细胞,在猪角膜内构建角膜基质样组织。 展开更多

关键词 组织工程 角膜基质 皮肤成纤维细胞

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偏光显微镜在组织工程血管构建中的应用 被引量：1

2

作者 张燕忠 刘阳 +1 位作者 曹谊林 张柏根 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期189-192,共4页

目的利用偏光显微镜对组织工程构建血管壁中的胶原成分进行定性分析。方法体外培养、扩增的人脐带动脉平滑肌细胞,将其与可降解生物材料聚乙醇酸(PGA)制成的管状结构结合(实验组),体外培养1周后植入裸鼠背部皮下。于植入后2、4、5、11... 目的利用偏光显微镜对组织工程构建血管壁中的胶原成分进行定性分析。方法体外培养、扩增的人脐带动脉平滑肌细胞,将其与可降解生物材料聚乙醇酸(PGA)制成的管状结构结合(实验组),体外培养1周后植入裸鼠背部皮下。于植入后2、4、5、11周时分别取材,普通光镜(HE和Masson染色)及偏光显微镜下观察组织学形态,并比较结果。以无细胞单纯管状PGA-DMEM植入裸鼠背部皮下作为对照。结果偏光显微镜下,随着植入时间的延长,实验组的PGA-平滑肌细胞复合结构从以PGA为主向以胶原和平滑肌细胞为主要成分过渡;对照组则随着PGA的降解无胶原成分形成。偏光显微镜检测结果与光镜下的组织形态学检查结果相同。结论偏光显微镜可用于组织工程血管壁中胶原成分的检测,方法简便且结果可靠。 展开更多

关键词 组织工程 裸鼠 聚乙醇酸 偏光显微镜

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脂肪来源细胞和透明质酸钠复合物构建裸鼠皮下软组织 被引量：2

3

作者 丁小邦 高建华 +5 位作者 周广东 高振 陈付国 毕丹 刘伟 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1104-1107,共4页

目的探讨脂肪来源细胞(ADCs)作为新型真皮充填物的可能性。方法ADCs取自3例行整复手术的男性患者的残余脂肪组织,支架材料为透明质酸钠。实验分为三组,实验组:ADCs(25×106/mL)与透明质酸钠混合,每一样本0.2mL注射于雌性BLAB/c裸鼠... 目的探讨脂肪来源细胞(ADCs)作为新型真皮充填物的可能性。方法ADCs取自3例行整复手术的男性患者的残余脂肪组织,支架材料为透明质酸钠。实验分为三组,实验组:ADCs(25×106/mL)与透明质酸钠混合,每一样本0.2mL注射于雌性BLAB/c裸鼠皮下;对照组1:单纯运用透明质酸钠,每一样本0.2mL注射于裸鼠皮下;对照组2:单纯运用ADCs(25×106/mL),每一样本0.2mL注射于裸鼠皮下。8周后取材,通过大体和组织学观察,以及性染色体RT-PCR检测,对再生组织进行评价。结果实验组形成软组织呈球形,平均体积(0.0352±0.0115)mL;组织学观察显示,生物材料完全降解,组织排列紊乱,间有大量排列紊乱的胶原纤维,无脂肪组织;两对照组均无任何组织形成。结论应用组织工程技术,以人脂肪来源细胞为种子细胞,透明质酸钠为支架材料,能构建出良好的组织工程化软组织;为探索一种安全、有效的除皱方法,提供了新的研究方向。 展开更多

关键词 脂肪来源细胞 透明质酸钠 真皮充填物 组织工程

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关节软骨生化结构及其与力学性能关系研究进展 被引量：15

4

作者 晏丹 周广东 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期341-345,共5页

关节软骨缺损在临床很常见。由于血液供应差及应答创伤反应的未分化细胞群相对缺乏,软骨缺损很难自行修复。组织工程技术可将具有软骨形成潜能的细胞接种到生物可降解材料上形成细胞-支架三维复合物,该复合物在体外或体内可形成组织工... 关节软骨缺损在临床很常见。由于血液供应差及应答创伤反应的未分化细胞群相对缺乏,软骨缺损很难自行修复。组织工程技术可将具有软骨形成潜能的细胞接种到生物可降解材料上形成细胞-支架三维复合物,该复合物在体外或体内可形成组织工程化软骨,有望解决软骨缺损修复这一临床难题。要构建具有完整结构和稳定功能的组织工程化软骨,必须深入了解软骨的形态结构、功能及其关系。文章就正常及组织工程化关节软骨的生化结构及其与生物力学性能的关系进行综述。 展开更多

关键词 关节软骨 生物力学 生化结构 组织工程

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携带人TGF-β_1腺病毒载体的构建及鉴定 被引量：5

5

作者 夏万尧 刘伟 +6 位作者 王丹茹 丁文龙 钟梅芳 刘德莉 周广东 崔磊 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1134-1137,共4页

目的构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础。方法应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,... 目的构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础。方法应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,并通过脂质体Fugene 6介导腺病毒DNA转染293细胞。结果重组hTGF-β1腺病毒DNA经限制性内切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段。与空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置换成4.2 kb和4.0 kb片段;经PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb含目的基因片段,片段大小无误,表明重组Adeno-hTGF-β1腺病毒表达系统构建成功。以重组Adeno-hTGF-β1DNA为模板的PCR产物中出现1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功连接至adeno-X腺病毒表达载体中。重组hTGF-β1腺病毒表达载体通过Fugene 6介导转染293包装细胞出现细胞病变效应(CPE)。采用PCR反应鉴定293细胞包装的腺病毒,证实扩增出247 bp的hTGF-β1目的基因片断和312 bp的腺病毒骨架基因片断。结论携带人hTGF-β1的腺病毒载体的构建成功,并能在293细胞包装,为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 基因重组 腺病毒 转化生长因子Β1

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骨髓基质干细胞体外软骨定向诱导方法的研究进展 被引量：2

6

作者 刘霞 周广东 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期234-237,共4页

种子细胞来源一直是限制软骨组织工程发展的瓶颈,骨髓基质干细胞(BMSCs)具有取材创伤小、增殖能力强及具多向分化潜能等优点,已逐渐成为软骨构建种子细胞的研究热点。其关键问题是如何获得大量纯化的BMSCs并在体外定向诱导为软骨表型的... 种子细胞来源一直是限制软骨组织工程发展的瓶颈,骨髓基质干细胞(BMSCs)具有取材创伤小、增殖能力强及具多向分化潜能等优点,已逐渐成为软骨构建种子细胞的研究热点。其关键问题是如何获得大量纯化的BMSCs并在体外定向诱导为软骨表型的细胞。该文就BMSCs体外软骨定向诱导方法的研究进展进行综述,以期为应用BMSCs构建软骨组织提供参考。 展开更多

关键词 骨髓基质干细胞 软骨分化 组织工程

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SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞 被引量：1

7

作者 谢峰 张文杰 +3 位作者 王鸿 陆峻泓 丛笑倩 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期802-804,828,共4页

目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶... 目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能。结果hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长。经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织。结论SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能。 展开更多

关键词 人胚胎干细胞 饲养层细胞 SNL细胞

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VSV-G蛋白修饰的GFP逆转录病毒的构建及表达

8

作者 陈瑾君 刘伟 +3 位作者 刘德莉 陆峻泓 崔磊 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期798-801,共4页

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)共转染,使含绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒经超速离心得以浓缩,进一步提高GFP逆转录病毒的细胞感染效率。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞,并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的... 目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)共转染,使含绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒经超速离心得以浓缩,进一步提高GFP逆转录病毒的细胞感染效率。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞,并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组假病毒液,并通过低温超速离心制备含GFP基因假病毒的浓缩液,测定浓缩前后含GFP基因假病毒液滴度,并分别感染NIH 3T3细胞、软骨细胞、成纤维细胞、骨髓基质干细胞等,荧光显微镜下观察GFP在上述细胞内的表达情况,流式细胞仪检测GFP基因的转染阳性表达率。结果GFP-GP2-293细胞转染VSV-G基因后产生的重组假病毒液滴度为7.36×104CFU/mL,浓缩40倍后其滴度可提高至1.82×106CFU/mL。用浓缩前后含GFP基因假病毒液分别转染NIH 3T3细胞,GFP阳性表达率可由44.21%升高至79.80%;转染兔软骨细胞和成纤维细胞、猪骨髓基质干细胞和脂肪干细胞后,均可见GFP阳性表达明显增强。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以制备出高滴度的假病毒液。浓缩病毒液的高转染率为其在组织工程种子细胞标记方面的广泛应用奠定了基础。 展开更多

关键词 疱疹性口腔炎病毒糖蛋白 绿色荧光蛋白 转染 假病毒 种子细胞

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重组hTGF-β_1基因转染骨髓间充质干细胞及其表达

9

作者 夏万尧 丁文龙 +5 位作者 刘伟 钟梅芳 王丹茹 周广东 崔磊 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1185-1188,1222,共5页

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染猪BMSCs。转染后72 h,RT-PCR检测BMSCs的hTGF-β1mRNA表达;免... 目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染猪BMSCs。转染后72 h,RT-PCR检测BMSCs的hTGF-β1mRNA表达;免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附定量测定(ELISA法)hTGF-β1蛋白表达;MTT法测定水貂肺上皮细胞(MV-1-Lu)的生长抑制率,以验证转染后所表达的hTGF-β1蛋白的生物学活性。结果转染后72 h,BMSCs能有效表达hTGF-β1mRNA,胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,其蛋白表达量是转染adeno-lacZ的2.65倍(P<0.05);MTT法检测结果显示,转染adeno-hTGF-β1的BMSCs所分泌的hTGF-β1蛋白对MV-1-Lu细胞的生长有显著抑制作用。结论重组adeno-hTGF-β1能够被导入BMSCs,并表达有生物学活性的hTGF-β1蛋白。为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 基因转染 腺病毒 人转化生长因子β1

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化学剂法对兔卵母细胞孤雌激活的效果

10

作者 唐郑雅 匡延平 +2 位作者 陆峻泓 曹谊林 张文杰 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期666-669,共4页

目的研究钙离子载体A23187和6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）及3种酶对兔卵母细胞的激活率,并观察其体外发育情况。方法兔超排后获得卵母细胞,经脱颗粒处理后用A23187和6-DMAP处理不同时间,体外培养5-7d,观察细胞发育与囊胚形成情况。结果... 目的研究钙离子载体A23187和6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）及3种酶对兔卵母细胞的激活率,并观察其体外发育情况。方法兔超排后获得卵母细胞,经脱颗粒处理后用A23187和6-DMAP处理不同时间,体外培养5-7d,观察细胞发育与囊胚形成情况。结果钙离子载体A23187激活处理5min后,继续在2.0mmol/L6-DMAP中分别处理3.5、4.0、4.5、5.0h,均能激活兔卵母细胞;以处理4.0h的卵裂率最高（58.82%,20/34）,并有15%（3/20）的囊胚发育率。透明质酸酶、胶原酶和胰酶处理20min后,均能激活兔卵母细胞,其中透明质酸酶处理20min的激活率和卵裂率最高,分别为58.33%（28/48）和63.64%（28/44）。结论兔卵母细胞孤雌激活率与激活方法密切相关。化学激活剂的处理时间及消化酶的不同均对兔卵母细胞的激活产生显著影响。 展开更多

关键词 孤雌激活 A23187 6-二甲基氨基嘌呤 透明质酸酶

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快速获得和纯化骨髓基质干细胞的方法

11

作者 周佳 沈尊理 +2 位作者 金羽青 刘伟 沈华 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期228-231,共4页

目的研究在体外快速获得骨髓基质干细胞及纯化的方法。方法采用流式细胞仪筛选法获得CD45-、CD90+原代细胞,复合胶原酶差速消化逐级传代、纯化;对第3代(P3代)细胞进行脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞三向诱导;2～4周后,分别行oilred’O、Saf... 目的研究在体外快速获得骨髓基质干细胞及纯化的方法。方法采用流式细胞仪筛选法获得CD45-、CD90+原代细胞,复合胶原酶差速消化逐级传代、纯化;对第3代(P3代)细胞进行脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞三向诱导;2～4周后,分别行oilred’O、Safranin’O和茜素红染色,倒置显微镜下观察诱导结果。结果经流式细胞仪初筛和复合胶原酶差速消化,传代至P3代,细胞形态已呈现均一性。向脂肪细胞诱导后第4周,oilred’O染色见细胞内大量红染的脂滴;向软骨细胞诱导后第4周,Safranin’O染色见多数切片呈阳性,细胞团块中存在大量软骨特异性的陷窝样结构;向骨细胞诱导后第4周,茜素红染色发现肉眼可见广泛散在的红色阳性钙结节。结论本研究所采用的流式细胞仪初筛和复合胶原酶差速消化法,可快速获得高纯度的骨髓基质干细胞。 展开更多

关键词 骨髓基质干细胞 纯化 流式筛选 复合胶原酶

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PGA支架上人与猪皮肤成纤维细胞增殖和基质分泌的比较 被引量：1

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作者 徐福 李鹏程 +5 位作者 刘伟 王玉明 魏娴 周广东 崔磊 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1138-1142,共5页

目的对人与猪皮肤成纤维细胞作为肌腱组织工程种子细胞,进行可行性比较。方法酶消化法获取人与猪皮肤成纤维细胞,培养扩增,取第2代细胞,以1×106/mL的细胞密度接种至聚羟基乙酸(PGA)圆柱形支架上体外培养。通过大体、组织学及增殖... 目的对人与猪皮肤成纤维细胞作为肌腱组织工程种子细胞,进行可行性比较。方法酶消化法获取人与猪皮肤成纤维细胞,培养扩增,取第2代细胞,以1×106/mL的细胞密度接种至聚羟基乙酸(PGA)圆柱形支架上体外培养。通过大体、组织学及增殖曲线观察,羟脯氨酸定量测定以及免疫组化检测,比较两种细胞在PGA支架的黏附、增殖及基质分泌能力。结果组织学及三维增殖曲线观察结果显示,与猪皮肤成纤维细胞比较,人皮肤成纤维细胞与支架的黏附能力及细胞增殖能力良好;接种后第6天和第12天,HE染色可见人皮肤成纤维细胞-PGA复合物有连续的基质形成,两者羟脯氨酸含量分别为(2.23±0.25)μg/mgprotvs(1.07±0.18)μg/mgprot和(3.72±0.39)μg/mgprotvs(0.27±0.04)μg/mgprot,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,接种后第12天,两种复合物的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均呈阳性。结论与猪皮肤成纤维细胞相比,人皮肤成纤维细胞更有希望作为肌腱组织工程的种子细胞。 展开更多

关键词 组织工程 肌腱 皮肤成纤维细胞 聚羟基乙酸

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