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BLyS改组噬菌体文库的构建及初步筛选
1
作者
沈琼
宋聿文
+3 位作者
韩威
丁艳丽
龚毅
袁勤生
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2006年第5期49-52,共4页
从质粒pT7474-BLyS及人胎脑cDNA文库中分别扩增出BLyS和APRIL基因,用DNase I消化后,回收小于50 bp的片断,用于DNA改组。PCR产物与噬菌体载体pfUSE5连接后,电转E.coliER2738获得改组文库。构建的改组文库库容量为8.9×105。对文库进...
从质粒pT7474-BLyS及人胎脑cDNA文库中分别扩增出BLyS和APRIL基因,用DNase I消化后,回收小于50 bp的片断,用于DNA改组。PCR产物与噬菌体载体pfUSE5连接后,电转E.coliER2738获得改组文库。构建的改组文库库容量为8.9×105。对文库进行初步的筛选,获得了一个受体结合活性降低的突变克隆。成功构建了BLyS改组噬菌体文库,为蛋白结构与功能之间关系的深入研究打下了基础。
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关键词
B细胞刺激引子
DNA改组
噬菌体展示
文库
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职称材料
融合干扰素-BLA(IFN-BLA)的构建、表达、纯化及抗病毒活性测定(英文)
2
作者
马文哲
沈琼
+3 位作者
韩威
陆晨轶
杨胜利
龚毅
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期451-456,共6页
干扰素BLA(IFN BLA)由干扰素beta1b(IFN beta1b)和干扰素alpha2b(IFN alpha2b)通过连接肽GGGS融合而成。优化了其在大肠杆菌BL21CodonPlus(DE3)RIL中的实验室表达条件,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的35%以上并且主要以包涵体的形式存在...
干扰素BLA(IFN BLA)由干扰素beta1b(IFN beta1b)和干扰素alpha2b(IFN alpha2b)通过连接肽GGGS融合而成。优化了其在大肠杆菌BL21CodonPlus(DE3)RIL中的实验室表达条件,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的35%以上并且主要以包涵体的形式存在。对包涵体的复性条件进行了摸索,建立了IFN BLA的复性及纯化方法,纯化后的蛋白产量约为45mg/L,纯度在90%以上。抗病毒活性分析表明这一新的融合蛋白可能具有协同或加成活性。
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关键词
IFN-BLA
基因表达
纯化
抗病毒活性
融合干扰素-BLA
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职称材料
高活性的人白细胞介素-3突变体的构建与表达
3
作者
邹晓燕
杨胜利
龚毅
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期258-260,共3页
目的:在大肠杆菌中构建表达高活性的人白细胞介素-3(hIL-3)突变体。方法:通过定点突变的方法构建hIL-3突变体K116V和K116W的表达载体,并实现hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达。对所得包涵体蛋白依次溶解、纯化、透析复性。用Westernblot检...
目的:在大肠杆菌中构建表达高活性的人白细胞介素-3(hIL-3)突变体。方法:通过定点突变的方法构建hIL-3突变体K116V和K116W的表达载体,并实现hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达。对所得包涵体蛋白依次溶解、纯化、透析复性。用Westernblot检测hIL-3突变体的特异性。单溶液细胞增殖(MTS)测定hIL-3突变体的生物学活性。结果:hIL-3在大肠杆菌中高效表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上,主要以包涵体的形式存在。将包涵体溶解在8mol/L脲中,经Ni-NTA-Sepharose柱纯化后纯度达90%以上。MTS法测定hIL-3突变体K116V的活性为野生型的5倍,K116W的生物学活性也有所增加。结论:获得了高活性的hIL-3突变体K116V,有望成为hIL-3的替代品,也证明了hIL-3第116位的赖氨酸残基对于hIL-3的生物学活性很重要。
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关键词
人白细胞介素-3
K116V
K116W
定点突变
单溶液细胞增殖
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职称材料
题名
BLyS改组噬菌体文库的构建及初步筛选
1
作者
沈琼
宋聿文
韩威
丁艳丽
龚毅
袁勤生
机构
华东理工大学
生物
反应器
工程
国家重点实验室
中国科学院
上海中科伍佰豪生物工程有限公司
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2006年第5期49-52,共4页
文摘
从质粒pT7474-BLyS及人胎脑cDNA文库中分别扩增出BLyS和APRIL基因,用DNase I消化后,回收小于50 bp的片断,用于DNA改组。PCR产物与噬菌体载体pfUSE5连接后,电转E.coliER2738获得改组文库。构建的改组文库库容量为8.9×105。对文库进行初步的筛选,获得了一个受体结合活性降低的突变克隆。成功构建了BLyS改组噬菌体文库,为蛋白结构与功能之间关系的深入研究打下了基础。
关键词
B细胞刺激引子
DNA改组
噬菌体展示
文库
Keywords
BLyS
DNA shuffling
phage display
library
分类号
R322.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
融合干扰素-BLA(IFN-BLA)的构建、表达、纯化及抗病毒活性测定(英文)
2
作者
马文哲
沈琼
韩威
陆晨轶
杨胜利
龚毅
机构
中国科学院
上海中科伍佰豪生物工程有限公司
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期451-456,共6页
文摘
干扰素BLA(IFN BLA)由干扰素beta1b(IFN beta1b)和干扰素alpha2b(IFN alpha2b)通过连接肽GGGS融合而成。优化了其在大肠杆菌BL21CodonPlus(DE3)RIL中的实验室表达条件,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的35%以上并且主要以包涵体的形式存在。对包涵体的复性条件进行了摸索,建立了IFN BLA的复性及纯化方法,纯化后的蛋白产量约为45mg/L,纯度在90%以上。抗病毒活性分析表明这一新的融合蛋白可能具有协同或加成活性。
关键词
IFN-BLA
基因表达
纯化
抗病毒活性
融合干扰素-BLA
Keywords
IFN-BLA
expression
purification
antiviral activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
高活性的人白细胞介素-3突变体的构建与表达
3
作者
邹晓燕
杨胜利
龚毅
机构
上海中科伍佰豪生物工程有限公司
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期258-260,共3页
文摘
目的:在大肠杆菌中构建表达高活性的人白细胞介素-3(hIL-3)突变体。方法:通过定点突变的方法构建hIL-3突变体K116V和K116W的表达载体,并实现hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达。对所得包涵体蛋白依次溶解、纯化、透析复性。用Westernblot检测hIL-3突变体的特异性。单溶液细胞增殖(MTS)测定hIL-3突变体的生物学活性。结果:hIL-3在大肠杆菌中高效表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上,主要以包涵体的形式存在。将包涵体溶解在8mol/L脲中,经Ni-NTA-Sepharose柱纯化后纯度达90%以上。MTS法测定hIL-3突变体K116V的活性为野生型的5倍,K116W的生物学活性也有所增加。结论:获得了高活性的hIL-3突变体K116V,有望成为hIL-3的替代品,也证明了hIL-3第116位的赖氨酸残基对于hIL-3的生物学活性很重要。
关键词
人白细胞介素-3
K116V
K116W
定点突变
单溶液细胞增殖
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
BLyS改组噬菌体文库的构建及初步筛选
沈琼
宋聿文
韩威
丁艳丽
龚毅
袁勤生
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2006
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
融合干扰素-BLA(IFN-BLA)的构建、表达、纯化及抗病毒活性测定(英文)
马文哲
沈琼
韩威
陆晨轶
杨胜利
龚毅
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
高活性的人白细胞介素-3突变体的构建与表达
邹晓燕
杨胜利
龚毅
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
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