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灵芝酸A对刀豆球蛋白A诱导的急性免疫性肝损伤小鼠模型的影响及其作用机制
1
作者 崔怡 乔凤杰 +4 位作者 邱嘉昊 刘羽飞 高竺君 尚志 高月求 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期2415-2423,共9页
目的观察灵芝酸A(GA-A)对刀豆球蛋白A(ConA)诱导的小鼠自身免疫性肝炎(AIH)模型的治疗作用。方法将35只小鼠随机分为空白组(NC组)、模型组(ConA组)和GA-A低、中、高剂量治疗组(GA-A-L组、GA-A-M组、GA-A-H组),每组各7只小鼠。通过尾静... 目的观察灵芝酸A(GA-A)对刀豆球蛋白A(ConA)诱导的小鼠自身免疫性肝炎(AIH)模型的治疗作用。方法将35只小鼠随机分为空白组(NC组)、模型组(ConA组)和GA-A低、中、高剂量治疗组(GA-A-L组、GA-A-M组、GA-A-H组),每组各7只小鼠。通过尾静脉注射ConA建立经典AIH小鼠模型,1 h后通过腹腔注射不同剂量GA-A治疗。应用蛋白质组学技术探究GA-A对肝细胞的保护机制,另外在体外用全反式维甲酸(ATRA)将HL-60细胞分化为dHL-60中性粒细胞来验证GA-A的作用机制。检测炎症(血清ALT和AST活性、HE染色及炎症相关基因)、凋亡(TUNEL染色)、中性粒细胞和中性粒细胞胞外陷阱(NET)标志物[髓过氧化物酶(MPO)、瓜氨酸化组蛋白3(CitH3)、Ly6G、游离双链DNA(dsDNA)]及p38磷酸化指标。计量资料两组间比较采用成组t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与NC组相比,ConA组小鼠血清ALT和AST水平显著增加(P值均<0.001)。与ConA组相比,GA-A治疗显著降低ALT和AST水平(P值均<0.01)。HE染色结果表明,ConA组小鼠肝脏发生明显坏死。GA-A治疗后显著减少肝坏死面积和TUNEL阳性肝细胞的数量(P值均<0.05)。另外,与ConA组相比,GA-A治疗后血清和肝组织中炎症因子IL-6、TNF-α和IFN-γ表达水平显著降低(P值均<0.05)。蛋白质组学分析提示,GA-A通过抑制NET的释放和p38 MAPK通路来减轻ConA诱导的急性免疫性肝损伤。小鼠肝组织免疫荧光染色结果显示,与ConA组相比,GA-A治疗组MPO阳性中性粒细胞的数量及Ly6G和CitH3阳性细胞的数量显著降低(P值均<0.01)。Western Blot及dsDNA结果显示,GA-A显著抑制小鼠肝组织及dHL-60细胞中的NET标志物dsDNA、CitH3以及p38磷酸化水平(P值均<0.05)。结论GA-A抑制p38 MAPK通路和NET释放减轻肝脏炎症反应和肝细胞死亡,从而减轻ConA诱导的急性免疫性肝损伤。本研究为GA-A通过调节嗜中性粒细胞功能治疗免疫性肝损伤提供了理论依据。 展开更多
关键词 灵芝酸A 伴刀豆球蛋白A 肝炎 自身免疫性 胞外诱捕网 蛋白质组学 小鼠 近交C57BL
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巴芪柔肝方基准样品HPLC特征图谱建立及其量值传递规律研究 被引量：4
2
作者 耿赛龙 周琴 +4 位作者 孙水根 李曼 赵立杰 张继全 冯怡 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期370-378,共9页
目的建立巴芪柔肝方基准样品HPLC特征图谱,并考察其量值传递规律。方法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、迷迭香酸、莪术烯醇、耐斯糖含量,计算饮片-水煎液-基准样品转移率,记录出膏率、pH值。结果15批基准样品HPLC特征图谱中有16个特征... 目的建立巴芪柔肝方基准样品HPLC特征图谱,并考察其量值传递规律。方法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、迷迭香酸、莪术烯醇、耐斯糖含量,计算饮片-水煎液-基准样品转移率,记录出膏率、pH值。结果15批基准样品HPLC特征图谱中有16个特征峰,相似度均大于0.90,鉴定出9个。饮片-基准样品中耐斯糖、毛蕊异黄酮葡萄糖苷平均转移率分别为(83.14±6.25)%、(77.81±8.31)%,水煎液-基准样品中迷迭香酸、莪术烯醇平均转移率分别为(81.71±6.27)%、(72.16±5.91)%,平均出膏率为(38.91±1.46)%,pH值为5.13±0.08。结论该方法稳定可行,可为巴芪柔肝方制剂工艺选择、关键化学属性评价提供参考。 展开更多
关键词 巴芪柔肝方 基准样品 HPLC特征图谱 量值传递规律
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芪术方对高脂高果糖高胆固醇诱导的非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的影响及其机制
3
作者 陈佳豪 周振华 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期2205-2212,共8页
目的探讨芪术方对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠模型的疗效及作用机制。方法60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组,模型组,芪术方低(4.75 g/kg)、中(9.50 g/kg)、高剂量组(19.00 g/kg),多唏磷脂酰胆碱组(磷脂组)(228 mg/kg),每组10只。... 目的探讨芪术方对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠模型的疗效及作用机制。方法60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组,模型组,芪术方低(4.75 g/kg)、中(9.50 g/kg)、高剂量组(19.00 g/kg),多唏磷脂酰胆碱组(磷脂组)(228 mg/kg),每组10只。高脂高胆固醇饲料和20%果糖水造模16周后,各组给予相应药物干预,每天给药1次,连续8周。检测血清ALT、AST、TC、TG、LDL;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察肝组织病理变化;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测微管相关蛋白轻链3B(LC3BⅡ/Ⅰ)、螯合体(p62/SQSTM1)、Beclin-1、动力相关蛋白1(Drp1)表达。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Drp1、Beclin-1、p62/SQSTM1 mRNA表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与正常组比较,模型组血清TG、TC、ALT、AST、LDL、FFA、TNF-α、IL-1β、MDA水平均升高,SOD水平降低(P值均<0.05)。HE染色结果显示,模型组小鼠肝组织可见肝细胞脂肪变及大量脂肪空泡;油红O染色结果显示,模型组小鼠肝细胞内有大量大小不一红色脂滴沉积,油红O染色面积百分比较正常组升高(P<0.05)。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组肝组织中Drp1、Beclin-1 mRNA升高,p62/SQSTM1 mRNA降低(P值均<0.05)。Western Blot结果显示,与正常组比较,模型组肝组织中Drp1、Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达水平升高,p62/SQSTM1蛋白表达水平降低(P值均<0.05)。与模型组比较,部分剂量芪术方组和磷脂组血清TG、TC、ALT、AST、LDL、FFA、TNF-α、IL-1β、MDA水平均降低,SOD水平升高(P值均<0.05)。与模型组比较,各用药组肝组织脂肪变改善明显,且油红O染色面积百分比降低(P值均<0.05);Drp1、Beclin-1 mRNA降低,p62/SQSTM1 mRNA升高(P值均<0.05);Drp1、Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达水平降低,部分用药组p62/SQSTM1蛋白表达水平升高(P值均<0.05),且芪术方中、高剂量效果更明显(P值均<0.01)。结论芪术方改善NAFLD小鼠肝脂质代谢及炎症水平可能与调控肝细胞线粒体自噬有关。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪性肝病 芪术方 线粒体自噬 脂质代谢 炎症
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补肾健脾利湿法治疗慢性乙型肝炎临床效果及相关机制研究 被引量：7
4
作者 朱晓骏 张景豪 +2 位作者 孙学华 张鑫 高月求 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期1274-1279,共6页
慢性乙型肝炎是世界范围内的公共健康问题,核苷酸类似物和干扰素治疗可以有效抑制HBV复制,但存在无法实现对HBV cccDN进行彻底清除、HBsAg阴转率低等不足。“补肾法治疗慢性乙型肝炎”的学术观点的提出为乙型肝炎的治疗提供了新的思路... 慢性乙型肝炎是世界范围内的公共健康问题,核苷酸类似物和干扰素治疗可以有效抑制HBV复制,但存在无法实现对HBV cccDN进行彻底清除、HBsAg阴转率低等不足。“补肾法治疗慢性乙型肝炎”的学术观点的提出为乙型肝炎的治疗提供了新的思路和方法;曙光医院肝病科在长期的临床实践中明确“脾肾亏虚、兼湿热未尽”是慢性乙型肝炎持续进展的关键病机,并确立了补肾健脾利湿为基本治法的慢性乙型肝炎论治方案,历经“十一五”至“十三五”的国家科技重大专项的临床研究验证了该方案确切的临床疗效,明确了补肾健脾利湿法治疗慢性乙型肝炎的主要作用机制在于调节机体免疫功能。 展开更多
关键词 乙型肝炎 慢性 补肾 健脾 清化湿浊
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病毒学应答状态对代偿期乙型肝炎肝硬化患者疾病进展的影响 被引量：7
5
作者 陈博武 朱晓骏 +3 位作者 张鑫 孙学华 李曼 高月求 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期1811-1816,共6页
目的研究是否获得持续性病毒学应答对接受核苷(酸)类似物(NAs)抗病毒治疗的代偿期乙型肝炎肝硬化患者疾病进展、肝癌发生的影响。方法纳入2013年1月1日—12月31日就诊于上海中医药大学附属曙光医院,随访5年以上、接受抗病毒治疗的代偿... 目的研究是否获得持续性病毒学应答对接受核苷(酸)类似物(NAs)抗病毒治疗的代偿期乙型肝炎肝硬化患者疾病进展、肝癌发生的影响。方法纳入2013年1月1日—12月31日就诊于上海中医药大学附属曙光医院,随访5年以上、接受抗病毒治疗的代偿期乙型肝炎肝硬化患者542例,依据随访期间病毒学应答状态分为持续病毒学应答队列(n=496)和非持续病毒学应答队列(n=46),以患者疾病进展为终点事件,收集、整理患者5年随访期间一般资料及检验检查资料。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验;不服从正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验。多元分析采用logistic回归分析。用危险度测量因素与肝硬化疾病进展的相关程度,用风险比(HR)及95%CI表示。应用寿命表法计算患者1、3、5年疾病无进展生存率,Kaplan-Meier法绘制生存曲线;采用log-rank检验进行单因素分析,Cox模型进行多因素回归分析。结果542例患者的平均疾病无进展生存时间为62.50(95%CI:61.01~63.92)个月,1、3、5年疾病无进展生存率分别为94%、82%、71%。持续病毒学应答队列患者平均疾病无进展生存时间为63.10(95%CI:61.65~64.55)个月,较非持续病毒学应答队列[55.95(95%CI:50.19~61.71)个月]延长,两组5年疾病无进展生存率差异有统计学意义(χ^(2)=12.058,P=0.001)。持续病毒学应答队列患者5年累积肝癌发生率低,两组差异有统计学意义(20.6%vs 34.8%,χ^(2)=5.759,P=0.016);持续病毒学应答队列患者5年累积肝硬化失代偿发生率低,两组差异有统计学意义(5.0%vs 15.2%,χ^(2)=8.239,P=0.004)。病毒学应答是影响疾病进展的独立危险因素[HR(95%CI)=2.32(1.45~3.72)]。结论持续病毒学应答可降低代偿期乙型肝炎肝硬化患者并发症及肝癌发生率,改善长期预后、延长生存时间。 展开更多
关键词 乙型肝炎 肝硬化 持续病毒学应答
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栀子大黄汤在酒精性肝病小鼠模型中的保护作用 被引量：3
6
作者 侯逸文 张荣杰 +3 位作者 纪龙珊 李茜 高月求 李曼 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2023年第12期2873-2884,共12页
目的 阐明栀子大黄汤(ZZDHT)通过改善肝脏中性粒细胞的氧化应激治疗酒精性肝病(ALD)的作用。方法 (1)运用网络药理学方法筛选ZZDHT的化学成分及其对应的作用靶点,分析其治疗ALD的潜在靶点和相关功能通路。(2)使用非靶代谢组学技术检测ZZ... 目的 阐明栀子大黄汤(ZZDHT)通过改善肝脏中性粒细胞的氧化应激治疗酒精性肝病(ALD)的作用。方法 (1)运用网络药理学方法筛选ZZDHT的化学成分及其对应的作用靶点,分析其治疗ALD的潜在靶点和相关功能通路。(2)使用非靶代谢组学技术检测ZZDHT在小鼠血清和肝脏中代谢物变化情况,配制两倍中剂量浓度的ZZDHT予以灌胃,分别于灌胃后6个时间点(10 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h)取小鼠血清和肝组织,混合进行后续质谱分析(用药组,18只)。对照组(18只)予以等量生理盐水灌胃。使用超高液相色谱技术,快速分离和鉴定ZZDHT在血清和肝组织中的代谢物,对ZZDHT有效成分进行验证。(3)8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机均分为对照组、模型组、ZZDHT低剂量[ZZDHT(L)]组、ZZDHT中剂量[ZZDHT(M)]组、ZZDHT高剂量[ZZDHT(H)]组(每组10只),除对照组外,其余各组建立ALD小鼠模型(NIAAA模型小鼠),用药组在造模的同时分别进行ZZDHT低、中、高剂量的灌胃,对照组和模型组使用等量生理盐水灌胃。检测血清ALT、AST和TG的表达水平;PCR测得肝脏相关炎性、氧化应激和中性粒细胞指标基因表达水平;ELISA法测定血清中炎症和氧化应激相关指标;SOD、GSH-Px、MDA检测肝脏氧化应激水平;通过HE染色、MPO染色以及油红染色观察小鼠肝组织损伤、中性粒细胞浸润及脂质沉积情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 (1)通过筛选共得到ZZDHT的53个有效活性成分,227个靶点基因,ALD的靶点基因共8 685个,两者共同的靶点基因222个。核心通路包括interleukin-6 signaling、TNF signaling pathway等。(2)非靶代谢分析得出ZZDHT在小鼠肝脏中代谢物有225个,在血清中代谢物有227个,共同代谢物有126个。分析得到肝脏代谢物核心通路有glycerolipid metabolism、inflammatory mediator regulation of TRP channels等,血清代谢物核心通路有AMPK signaling pathway、Oxidative phosphorylation等,均与氧化应激和炎症相关通路有关。(3)与模型组相比,ZZDHT(L)、ZZDHT(M)、ZZDHT(H)组小鼠血清ALT、AST和TG水平均明显降低(P值均<0.05),ZZDHT(M)组小鼠肝组织Ly6g、Ncf1、Ncf2、IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA、4-HNE、Gp91、P22水平均明显降低(P值均<0.05),SOD水平明显升高(P<0.05),ZZDHT(M)组小鼠血清4-HNE水平明显降低、GSH-Px水平明显升高(P值均<0.05)。ZZDHT(M)组小鼠肝脏中脂肪沉积和中性粒细胞浸润均明显改善(P值均<0.05)。结论 ZZDHT可显著改善NIAAA模型小鼠的氧化应激和炎症反应。 展开更多
关键词 肝疾病 酒精性 栀子大黄汤 氧化性应激 模型 动物
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