以文心兰Oncidium flexuosum无菌苗叶片为外植体,1/2MS(Murashige and Skoog)为基本培养基,对不同叶位、叶片大小(叶龄)、不同植物生长调节物质处理诱导体胚的效果进行了研究。结果表明:①幼苗的叶尖、叶基部切口、叶面切口、叶面和叶...以文心兰Oncidium flexuosum无菌苗叶片为外植体,1/2MS(Murashige and Skoog)为基本培养基,对不同叶位、叶片大小(叶龄)、不同植物生长调节物质处理诱导体胚的效果进行了研究。结果表明:①幼苗的叶尖、叶基部切口、叶面切口、叶面和叶缘均能诱导出体胚,绝大部分体胚能形成二次体胚并能分化成多个类原球茎(PLBs)。②诱导体胚的最佳外植体材料是取自带根幼苗15mm长叶片。③诱导体胚的适宜培养基组成如下:1/2MS培养基(其中微量元素和有机添加物为全量,铁盐减半),磷酸二氢钠170.00mg·L-1,谷胺酰胺1000.00mg·L-1,蛋白胨1000.00mg·L-1,噻苯隆(TDZ)0.50mg·L-1,聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)250.00mg·L-1,蔗糖20000.00mg·L-1,固化剂(gelrite)2800.00mg·L-1,pH5.2。叶片体胚诱导率为90.00%以上,叶片基部切口和中切口体胚诱导率分别达74.56%和66.91%。展开更多
为了研究旱柳Salix matsudana高耐盐无性系I-32的耐盐机制,分离其耐盐相关基因,实验以筛选出的高耐盐旱柳无性系I-32为材料,盐胁迫后提取总核糖核酸(RNA),纯化mRNA,利用改良SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技...为了研究旱柳Salix matsudana高耐盐无性系I-32的耐盐机制,分离其耐盐相关基因,实验以筛选出的高耐盐旱柳无性系I-32为材料,盐胁迫后提取总核糖核酸(RNA),纯化mRNA,利用改良SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技术合成了全长cDNA,回收500bp以上cDNA大片段克隆到大肠杆菌Escherichia coli和酵母穿梭载体pYES2.1中,建成旱柳全长cDNA文库,对随机挑取的阳性克隆进行聚合酶链式反应(PCR)鉴定,插入片断平均值为1000bp左右,说明所构建的文库达到了用于目的基因分离筛选和表达的建库要求。通过尿嘧啶缺陷型培养基添加80～130g·L-1氯化钠筛选文库,与野生型酵母菌株相比,转化子的耐盐能力提高。研究结果为克隆与旱柳抗旱相关基因奠定了基础。展开更多
文摘以文心兰Oncidium flexuosum无菌苗叶片为外植体,1/2MS(Murashige and Skoog)为基本培养基,对不同叶位、叶片大小(叶龄)、不同植物生长调节物质处理诱导体胚的效果进行了研究。结果表明:①幼苗的叶尖、叶基部切口、叶面切口、叶面和叶缘均能诱导出体胚,绝大部分体胚能形成二次体胚并能分化成多个类原球茎(PLBs)。②诱导体胚的最佳外植体材料是取自带根幼苗15mm长叶片。③诱导体胚的适宜培养基组成如下:1/2MS培养基(其中微量元素和有机添加物为全量,铁盐减半),磷酸二氢钠170.00mg·L-1,谷胺酰胺1000.00mg·L-1,蛋白胨1000.00mg·L-1,噻苯隆(TDZ)0.50mg·L-1,聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)250.00mg·L-1,蔗糖20000.00mg·L-1,固化剂(gelrite)2800.00mg·L-1,pH5.2。叶片体胚诱导率为90.00%以上,叶片基部切口和中切口体胚诱导率分别达74.56%和66.91%。
文摘为了研究旱柳Salix matsudana高耐盐无性系I-32的耐盐机制,分离其耐盐相关基因,实验以筛选出的高耐盐旱柳无性系I-32为材料,盐胁迫后提取总核糖核酸(RNA),纯化mRNA,利用改良SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技术合成了全长cDNA,回收500bp以上cDNA大片段克隆到大肠杆菌Escherichia coli和酵母穿梭载体pYES2.1中,建成旱柳全长cDNA文库,对随机挑取的阳性克隆进行聚合酶链式反应(PCR)鉴定,插入片断平均值为1000bp左右,说明所构建的文库达到了用于目的基因分离筛选和表达的建库要求。通过尿嘧啶缺陷型培养基添加80～130g·L-1氯化钠筛选文库,与野生型酵母菌株相比,转化子的耐盐能力提高。研究结果为克隆与旱柳抗旱相关基因奠定了基础。
