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海南省类鼻疽伯克霍尔德菌临床分离株的基因岛特征和毒力因子分析
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作者 符晓莹 李欢 +5 位作者 李沙 王立程 王崇圳 黎元莉 陈海 朱雄 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期359-368,390,共11页
目的分析类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)临床分离株的基因岛(genomic island,GI)特征和毒力因子差异,为类鼻疽病的诊疗研究提供依据。方法收集B.pseudomallei临床分离株,PCR检测和测序分析毒力相关GI,在Islandviewr 4... 目的分析类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)临床分离株的基因岛(genomic island,GI)特征和毒力因子差异,为类鼻疽病的诊疗研究提供依据。方法收集B.pseudomallei临床分离株,PCR检测和测序分析毒力相关GI,在Islandviewr 4平台上提交全基因组序列注释格式文件,整合SIGI-HMM与IslandPath-DIMOB两种算法预测GI,通过序列比对分析GI独特性和毒力因子差异。结果共收集到52株B.pseudomallei临床分离株,结果显示,52个基因组按进化距离分为3个分枝,其中82.69%(43/52)菌株集中在分枝1。52个B.pseudomallei基因组共识别出828个GI,按序列相似性聚类为157个GI cluster。GI在基因组中占比达2.05%~6.38%。GI cluster1和2存在全部菌株中,但84个(53.50%)GI cluster只聚类到单个基因组。10个GI cluster很可能是特有的,其中5个来源同属细菌,2个来源其他属,3个来源不确定。25个GI cluster与毒力相关,B.pseudomallei BP76和BP169含有其中8个,是所有菌株中毒力相关GI最多的。52株B.pseudomallei的毒力基因除了fhaB1、fhaB2、BPSL1661、cheY1、wzM、tssH-5/clpV、tssA-5、boaA和boaB存在差异,其余都表现一致。与泰国和澳大利亚B.pseudomallei临床菌株比较,boaA、boaB、cheY1和chbp在两个国家的菌株中都表现出差异,同时fhaB1、fhaB3和bimA在澳大利亚菌株中表现出差异。结论海南地区B.pseudomallei GI具有保守性和独特性,通过特有GI和毒力因子研究,可以发现菌株水平基因转移(Horizontal gene transfer,HGT)的来源和分子水平的毒力差异。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 基因组 基因岛 毒力因子 水平基因转移
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结核硬脂酸棒状杆菌引起脐尿管感染1例
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作者 王崇圳 麦吉仁 +6 位作者 钟山 许丽霞 王立程 符晓莹 李欢 黎元莉 陈东科 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1588-1590,共3页
报告1例患者因脐部疼痛入院,患者脐部脓性分泌物标本革兰染色可见短小阳性球杆菌,同时对分离菌株采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术进行鉴定和16S rRNA检测,并进行体外药敏试验。革兰染色、MALDI-TOF MS鉴定和16S... 报告1例患者因脐部疼痛入院,患者脐部脓性分泌物标本革兰染色可见短小阳性球杆菌,同时对分离菌株采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术进行鉴定和16S rRNA检测,并进行体外药敏试验。革兰染色、MALDI-TOF MS鉴定和16S rRNA检测结果均为结核硬脂酸棒状杆菌。药敏结果提示该菌对青霉素、头孢曲松、头孢吡肟、美罗培南、万古霉素、达托霉素、利奈唑胺、复方磺胺甲口恶唑、氨苄西林、庆大霉素、四环素均敏感。微生物的形态学涂片有助于结核硬脂酸棒状杆菌的鉴别,MALDI-TOF MS对于快速鉴定该菌种是必要的,药敏试验也可以为临床该菌感染的经验性治疗提供一定的帮助。 展开更多
关键词 结核硬脂酸棒状杆菌 脐尿管 感染
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海南省关节炎和神经系统疾病患者莱姆病调查 被引量:6
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作者 朱雄 张琳 +5 位作者 侯学霞 耿震 陈海 陈婷 俞书义 郝琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期353-356,共4页
目的了解我国海南省关节炎或神经性疾病患者的莱姆病感染状况,并确认海南省是否存在莱姆病人。方法海南省三亚市人民医院提供血清542份,均为关节炎或神经性疾病患者。采用间接免疫荧光法(Indirect Fluorescent-Antibody Test,IFA)和免... 目的了解我国海南省关节炎或神经性疾病患者的莱姆病感染状况,并确认海南省是否存在莱姆病人。方法海南省三亚市人民医院提供血清542份,均为关节炎或神经性疾病患者。采用间接免疫荧光法(Indirect Fluorescent-Antibody Test,IFA)和免疫印迹法(Western Blot,WB)对血清标本进行莱姆病抗体检测;并采用巢式PCR法对WB抗体阳性的血清标本进行病原学检测。结果 IFA方法检测血清样本542份,54份阳性,阳性率为9.96%。应用WB法对上述54份IFA阳性血清样本进行检测,12份阳性。采用巢式PCR方法检测12份WB阳性样本,2份阳性,测序结果表明两份均为B.garinii基因型。结论本研究证实了海南省人群中存在莱姆病。建议当地医生在诊治关节炎和神经性疾病患者时,可以考虑其是否罹患莱姆病。 展开更多
关键词 莱姆病 血清标本 抗体检测 病原学检测
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特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立和优化 被引量:9
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作者 杨小敏 方瑶 +3 位作者 顾江 陈海 王海光 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期1427-1431,共5页
目的以16S rRNA编码序列为靶基因,建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法并优化。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16S rRNA编码序列为靶序列,通过Primer Premier 5软件搜索特异的引物,以该菌为模板,优化特异引物PCR的退... 目的以16S rRNA编码序列为靶基因,建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法并优化。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16S rRNA编码序列为靶序列,通过Primer Premier 5软件搜索特异的引物,以该菌为模板,优化特异引物PCR的退火温度、退火时间和反应循环数等条件。得到最优PCR反应条件后,将该方法用于检测临床分离的类鼻疽伯克霍尔德菌菌株和常见细菌感染病原体(大肠杆菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌、甲型链球菌和乙型链球菌),评价该方法的有效性和特异性。结果共设计3对引物,分别扩增16S rRNA编码序列283~672、760~1 061、771~1 193片段,优化后PCR反应条件为:94℃预变性4 min,94℃变性40 s,54.5℃退火20 s,72℃延伸40 s,24个循环,最后延伸1 min;特异性分析发现此方法能将类鼻疽伯克霍尔德菌与其他常见感染病原菌进行有效地鉴别诊断。结论成功建立并优化一种快速鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,通过此方法能有效的从单个菌落中和基因组水平鉴定临床分离的8株类鼻疽伯克霍尔德菌。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 16SRRNA基因 特异引物PCR
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海南1例感染类鼻疽伯克霍尔德菌的溯源调查 被引量:4
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作者 李沙 陈海 +5 位作者 李欢 李伟 夏连续 黎礼达 郑霄 朱雄 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期673-676,共4页
目的对海南1例类鼻疽患者进行感染溯源调查,为类鼻疽防控提供科学依据。方法采集患者住所周边环境中的泥土、水等样品并进行类鼻疽病原菌分离。通过细菌学试验、16SrDNA测序、特异诊断PCR等方法对疑似菌株进一步鉴定。通过脉冲场凝胶电... 目的对海南1例类鼻疽患者进行感染溯源调查,为类鼻疽防控提供科学依据。方法采集患者住所周边环境中的泥土、水等样品并进行类鼻疽病原菌分离。通过细菌学试验、16SrDNA测序、特异诊断PCR等方法对疑似菌株进一步鉴定。通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)、多位点可变数串联重复序列分析(MLVA_4)等技术比较并确定环境分离菌株与临床菌株的同源性。结果采集的58份环境样品中,自患者及邻居家水井水中共分离出3株类鼻疽伯克霍尔德菌(简称类鼻疽伯克菌)。PFGE、MLST、MLVA等分子分型结果证实,1株自患者家井水中分离的类鼻疽伯克菌与患者临床分离株同源。结论患者及其邻居家水井均被类鼻疽伯克菌污染,水井水很可能是该患者感染类鼻疽病的感染源。 展开更多
关键词 类鼻疽病 类鼻疽伯克霍尔德菌 分子溯源
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类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1617蛋白的重组表达及其抗体制备
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作者 吴利 黎礼达 +10 位作者 胡艺 黎元莉 陈海 朱雄 胡治强 马腾飞 韩丹 李倩 曹刘素 尹小毛 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第18期1663-1667,共5页
目的构建重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1617,并制备其抗体。方法采用PCR扩增BPSS1617全长序列,克隆至原核表达载体p ET-22b,将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体,并通过Weste... 目的构建重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1617,并制备其抗体。方法采用PCR扩增BPSS1617全长序列,克隆至原核表达载体p ET-22b,将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体,并通过Western blot、免疫荧光和ELISA检测抗体的特异性,并分析该蛋白在类鼻疽杆菌中的亚细胞定位。结果成功扩增类鼻疽杆菌BPC006株基因组中的BPSS1617基因;酶切和测序验证重组表达质粒p ET-22b-BPSS1617构建成功;经IPTG诱导表达、包涵体洗涤、纯化以及变性复性,成功获得纯度>95%,分子量为25×103的目的蛋白;将纯化的BPSS1617重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗BPSS1617蛋白多克隆抗体,经实验验证其特异性良好;同时BPSS1617蛋白主要定位于类鼻疽杆菌的细胞质中。结论成功构建、表达、纯化获得BPSS1617蛋白,并成功制备了其特异性多克隆抗体,并且该蛋白定位于类鼻疽杆菌的细胞质中。 展开更多
关键词 类鼻疽杆菌 蛋白表达 抗体制备与鉴定
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中国海南黎族9个STR基因座的多态性调查 被引量:5
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作者 唐勇 赵英 +1 位作者 钟路 符生苗 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1223-1225,共3页
目的获得D18S1364、D12S391、D13S325、D6S1043、D2S1772、D11S2368、D22-GATA198B05、D8S1132、D7S30489个STR基因座在中国海南黎族和汉族群体中的基因型及等位基因频率数据,初步探讨其在遗传学研究及法医学中的应用价值和意义。方法... 目的获得D18S1364、D12S391、D13S325、D6S1043、D2S1772、D11S2368、D22-GATA198B05、D8S1132、D7S30489个STR基因座在中国海南黎族和汉族群体中的基因型及等位基因频率数据,初步探讨其在遗传学研究及法医学中的应用价值和意义。方法随机抽取154例海南地区黎族无关个体,112例海南本地汉族无关个体,125例近期移民海南的汉族无关个体的静脉血,应用五色荧光标记引物复合扩增技术,计算中国海南黎族和海南汉族9个STR基因座的基因频率,统计分析各基因座的杂合度(Hobs)、多态信息总量(PIC)、个体识别机率(Dp)及累积个体识别率、累积非父排除率。分析上述9个STR基因座的遗传多态性,获得9个基因座的群体遗传学数据。结果9个基因座在该群体的基因型频率分布,均符合Hardy-Weinberg平衡定律。各基因座的期望杂合度(Hobs),多态信息总量(PIC)、个体识别机率(Dp)及累积个体识别率(CDP)、累积非父排除率(CCE),均无显著差异。结论D18S1364、D12S391、D13S325、D6S1043、D2S1772、D11S2368、D22-GATA198B05、D8S1132、D7S3048基因座在中国海南黎族,汉族群体中具有较高的个人识别机率,但无人群之间的差异,在法医学应用和群体遗传学研究中有较高的价值。 展开更多
关键词 短串联重复序列 聚合酶链反应 遗传多态性 中国海南黎族 中国海南
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类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染THP-1细胞模型的评价及其感染机制的初步探讨 被引量:1
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作者 黎元莉 方瑶 +1 位作者 陈海 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期2348-2352,共5页
目的建立类鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallei,BP for short)感染人急性单核白血病细胞THP-1的细胞模型,探讨聚乙二醇3350(PEG 3350)对细菌侵入细胞及胞内生存的影响,对比类鼻疽伯克霍尔德氏菌与其减毒株(... 目的建立类鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallei,BP for short)感染人急性单核白血病细胞THP-1的细胞模型,探讨聚乙二醇3350(PEG 3350)对细菌侵入细胞及胞内生存的影响,对比类鼻疽伯克霍尔德氏菌与其减毒株(也称为泰国株,即Burkholderia thailandensis,B.thailandensis,BT for short)的感染特性。方法通过绘制细菌生长曲线,探讨类鼻疽伯克霍尔德氏菌及其减毒株的增殖规律;通过透射电镜观察细菌胞内感染状态和宿主细胞的超微病理变化;分析不同时相的细菌入胞率和胞内生存状态,探讨细菌与宿主细胞的相互作用;通过检测受感染细胞培养液的上清和患者血清中的细胞因子,评价宿主细胞的反应性和PEG对于细菌侵入细胞及胞内生存的影响,以及对比细胞受类鼻疽伯克霍尔德氏菌及其减毒株感染后的炎症反应性,从而评价该模型的稳定性。结果确定了B.pseudomallei和B.thailandensis的生长规律和感染时相特征及超微病理损伤特点。炎症因子测定中,两种细菌感染细胞后分泌的TNF-α出现感染中期的高峰,受BP感染的细胞的IL-6分泌则呈双峰改变,受BT感染的细胞IL-6的分泌和PEG对细胞分泌炎症因子的影响更为复杂。同时,患者血清中细胞因子的检测则没有显示出一定的规律,与其临床转归关系也不明确。结论成功构建类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染THP-1细胞的模型,初步探讨了类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染宿主细胞的机制。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德氏菌 类鼻疽伯克霍尔德氏菌减毒株 人急性单核白血病细胞 聚乙二醇
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1例复发类鼻疽的病原学鉴定及生物学特性研究 被引量:1
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作者 杨文波 张纳安 +7 位作者 饶承龙 夏瑀培 章美娟 李骁 闫晶敏 陈海 李倩 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第22期2441-2448,共8页
目的通过对1例复发类鼻疽进行系统病原学鉴定及生物学特性研究,分析和探讨类鼻疽菌长期滞留机体可能的适应宿主机制。方法对临床收集的来源于同一个患者时隔5年分离到的两株类鼻疽菌,进行微生物学鉴定、全基因组测序,并使用相关软件对... 目的通过对1例复发类鼻疽进行系统病原学鉴定及生物学特性研究,分析和探讨类鼻疽菌长期滞留机体可能的适应宿主机制。方法对临床收集的来源于同一个患者时隔5年分离到的两株类鼻疽菌,进行微生物学鉴定、全基因组测序,并使用相关软件对测序数据进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、同源比对进化树、单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)以及插入缺失(insertion-deletion,Indel)分析;进一步在感染肺上皮A549细胞模型中比较感染不同时间细胞内细菌载量变化;双向电泳-质谱技术分析两株细菌在蛋白水平的表达变化。结果分离到的两株类鼻疽菌,全基因组均约7.12 Mb,COG功能注释编码蛋白大致约5 000个;MLST分型均为ST58型;同源比对进化树分析显示它们位于同一分支且与其他分离自中国的类鼻疽菌亲缘关系较近;SNP/Indel分析显示复发株有114个SNP位点、55个Indel位点;与原发株相比,双向电泳-质谱结果表明复发株共有68个蛋白的表达水平发生了显著的变化;同时复发株感染A549后细胞内细菌载量明显增加(P<0.05)。结论以上复发菌株的基因组学、蛋白组学以及胞内感染增殖能力的系统研究提示类鼻疽菌可能在机体长期的选择压力下微进化,通过对细菌基因转录表达、分泌系统、耐药以及能量代谢等方面的调控更加适应其在宿主体内的生存而实现长期滞留。 展开更多
关键词 类鼻疽菌 复发 全基因组 差异蛋白
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类鼻疽肺炎的临床特征与CT影像学表现 被引量:3
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作者 麦盛始 朱洪章 +2 位作者 赵光强 陈海 张猛 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1038-1045,共8页
【目的】归纳与分析类鼻疽肺炎的临床特征与CT影像学表现,以提高对其的认识。【方法】回顾性分析2012年1月1日至2023年4月1日间68例类鼻疽肺炎的临床与CT影像资料。【结果】在68例确诊患者中,62例患者为急性感染,6例患者为慢性感染。88... 【目的】归纳与分析类鼻疽肺炎的临床特征与CT影像学表现,以提高对其的认识。【方法】回顾性分析2012年1月1日至2023年4月1日间68例类鼻疽肺炎的临床与CT影像资料。【结果】在68例确诊患者中,62例患者为急性感染,6例患者为慢性感染。88.2%患者为男性,85.3%患者是海南原籍居民,85.3%患者职业为农民,77.9%患者发病于夏、秋两季,66.2%患者有糖尿病,100%患者的首发临床症状为发热。88.2%患者经血液培养试验阳性确诊。多数患者的白细胞计数、中性粒细胞比例、C-反应蛋白以及降钙素水平升高,而淋巴细胞比率则普遍下降,但是在急性感染和慢性感染组间的差异无统计学意义(P>0.05)。36.8%患者治愈,42.6%患者较治疗前好转,11.8%患者迁延不愈,8.8%患者死亡。肺内病变在CT图像上的形态主要表现为结节或肿块、斑片状磨玻璃影和大片状实变影,三种形态可同时并存。急性感染和慢性感染组的影像学表现差异在于主要的病变形态(P=0.01),其余的影像征象的差异并无统计学意义。此外,36.8%患者出现肺外感染,其中8.8%患者为多部位脓肿形成。【结论】对于有疫区旅居史、糖尿病、高热、病情进展迅速的患者,并且CT提示肺内存在多发炎症性病灶,医务人员应提高对此病的警惕。 展开更多
关键词 类鼻疽 肺炎 伯霍尔德杆菌 发热 体层摄影术 X线计算机
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1例类鼻疽伯克霍尔德菌感染复发睾丸脓肿的临床分析 被引量:8
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作者 麦文慧 朱雄 +4 位作者 陈海 韩朝辉 吴清艳 王日 陈柳红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1226-1228,共3页
类鼻疽是由类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,BP)所致的人兽共患传染病,流行于热带和亚热带地区。该病临床表现多样,常出现肺部感染、急性败血症和脏器脓肿等临床损害,病情进展急进,预后迁延,死亡率和复发率极高。
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 睾丸脓肿 类鼻疽复发
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输血前4项中梅毒螺旋体-酶联免疫吸附试验检测的临床意义 被引量:5
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作者 王凤莲 蔡庆果 +1 位作者 陈积健 姚亮 《海南医学院学报》 CAS 2012年第2期251-252,255,共3页
目的:探讨输血前4项中梅毒螺旋体-酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)的特点和临床意义。方法:收集我院2011年4~9月住院患者输血前4项检测中TP-ELISA阳性(包含弱阳性)的血清标本105例,分别用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体血凝试... 目的:探讨输血前4项中梅毒螺旋体-酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)的特点和临床意义。方法:收集我院2011年4~9月住院患者输血前4项检测中TP-ELISA阳性(包含弱阳性)的血清标本105例,分别用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、TP-ELISA(不同厂家试剂)进行平行检测。结果:105例TP-ELISA阳性患者中,TRUST阳性54例,TPHA阳性97例,TP-ELISA(不同厂家试剂)阳性103例。结论:TP-ELISA适用于梅毒流行病学调查或术前、产前、输血前等大量标本的梅毒筛查检测。输血前4项中TP-ELISA阳性的血清标本要同时行TRUST和TPHA检测,并结合临床症状以排除假阳性和假阴性。 展开更多
关键词 输血前4项 梅毒螺旋体-酶联免疫吸附试验(TP-ELISA) 梅毒螺旋体血凝试验(TPHA) 甲苯胺红不加热血清试验(TRUST) 假阳性
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DNA聚合酶δ与肿瘤的关系 被引量:2
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作者 阮细玲 吴琼 +2 位作者 黄怡 李永继 徐恒 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1375-1377,共3页
DNA聚合酶δ是参与真核生物DNA合成、损伤与修复、细胞周期调控等过程的重要聚合酶之一。近期有研究发现原发性肝癌组织中DNA聚合酶δ催化亚基p125表达水平较癌旁组织高,也有研究发现肺癌组织中DNA聚合酶δ第4个亚基p12低表达,且在结肠... DNA聚合酶δ是参与真核生物DNA合成、损伤与修复、细胞周期调控等过程的重要聚合酶之一。近期有研究发现原发性肝癌组织中DNA聚合酶δ催化亚基p125表达水平较癌旁组织高,也有研究发现肺癌组织中DNA聚合酶δ第4个亚基p12低表达,且在结肠癌组织及细胞系中发现DNA聚合酶δ催化亚基p125的编码基因POLD1发生突变。这些均说明DNA聚合酶δ的异常与肿瘤的发生、发展有着非常重要的关系。 展开更多
关键词 肿瘤 DNA聚合酶Δ 突变 表达调控
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