【目的】目前国内外西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)的核酸检测中缺乏安全、稳定的RNA标准参考样品,对检测结果的精确度和可信度造成一定的影响。本研究旨在研制一种安全稳定的WNV核酸检测质控品,为西尼罗热监测提供技术支持。【方法】...【目的】目前国内外西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)的核酸检测中缺乏安全、稳定的RNA标准参考样品,对检测结果的精确度和可信度造成一定的影响。本研究旨在研制一种安全稳定的WNV核酸检测质控品,为西尼罗热监测提供技术支持。【方法】将WNV核酸检测靶基因、MS2噬菌体外壳蛋白CP及成熟酶蛋白A基因序列插入到表达载体得到重组质粒pET-CPA-WN,经转化、表达、纯化后,制备WNV装甲RNA质控品,并对其进行实时荧光定量PCR和数字PCR定量、均匀性及稳定性分析,评估其作为标准物质的可能性。【结果】PCR检测、双酶切和基因测序结果均显示已成功构建重组质粒pET-CPA-WN,表达纯化后得到了大小均一、直径为23~28 nm的病毒样颗粒。核酸酶消化后实时荧光定量PCR检测结果显示,颗粒溶液中几乎无核酸残余且形成了包封靶基因的装甲RNA;其定植结果为8.80×10~9拷贝/mL。稳定性试验结果表明,该装甲RNA可在37℃稳定保持20 d,随机抽取10个样本进行均匀性检验证明其均匀性良好。【结论】本研究基于MS2噬菌体制备的装甲RNA拷贝数高,均匀性和稳定性良好,可为WNV分子检测提供安全、稳定的参考样品。展开更多
为筛选适宜日光温室东西垄向宜机化栽培的小型西瓜品种,选择了16个西瓜品种作为供试材料,对西瓜植株形态指标、果实综合品质指标进行调查分析,采用相关分析、层次分析(analytic hierarchy process,AHP)和动态时序逼近理想解排序法(dynam...为筛选适宜日光温室东西垄向宜机化栽培的小型西瓜品种,选择了16个西瓜品种作为供试材料,对西瓜植株形态指标、果实综合品质指标进行调查分析,采用相关分析、层次分析(analytic hierarchy process,AHP)和动态时序逼近理想解排序法(dynamic technique for order preference by similarity to ideal solution,DTOPSIS)对西瓜品种进行综合评价。结果表明:植株茎粗、叶片宽、叶长宽比、叶周长、总节位数5个形态指标与产量和品质显著相关;综合考虑形态指标、风味品质和经济品质指标,采用层次分析确定评价指标最终权重排名前5的是产量、单果变异系数、单果质量、可溶性固形物含量和可溶性糖含量。基于DTOPSIS分析法得出综合排序前3的品种分别是宝冠、洪新和京阑,推荐作为日光温室东西垄向宜机化栽培西瓜品种。展开更多
文摘【目的】目前国内外西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)的核酸检测中缺乏安全、稳定的RNA标准参考样品,对检测结果的精确度和可信度造成一定的影响。本研究旨在研制一种安全稳定的WNV核酸检测质控品,为西尼罗热监测提供技术支持。【方法】将WNV核酸检测靶基因、MS2噬菌体外壳蛋白CP及成熟酶蛋白A基因序列插入到表达载体得到重组质粒pET-CPA-WN,经转化、表达、纯化后,制备WNV装甲RNA质控品,并对其进行实时荧光定量PCR和数字PCR定量、均匀性及稳定性分析,评估其作为标准物质的可能性。【结果】PCR检测、双酶切和基因测序结果均显示已成功构建重组质粒pET-CPA-WN,表达纯化后得到了大小均一、直径为23~28 nm的病毒样颗粒。核酸酶消化后实时荧光定量PCR检测结果显示,颗粒溶液中几乎无核酸残余且形成了包封靶基因的装甲RNA;其定植结果为8.80×10~9拷贝/mL。稳定性试验结果表明,该装甲RNA可在37℃稳定保持20 d,随机抽取10个样本进行均匀性检验证明其均匀性良好。【结论】本研究基于MS2噬菌体制备的装甲RNA拷贝数高,均匀性和稳定性良好,可为WNV分子检测提供安全、稳定的参考样品。
文摘为筛选适宜日光温室东西垄向宜机化栽培的小型西瓜品种,选择了16个西瓜品种作为供试材料,对西瓜植株形态指标、果实综合品质指标进行调查分析,采用相关分析、层次分析(analytic hierarchy process,AHP)和动态时序逼近理想解排序法(dynamic technique for order preference by similarity to ideal solution,DTOPSIS)对西瓜品种进行综合评价。结果表明:植株茎粗、叶片宽、叶长宽比、叶周长、总节位数5个形态指标与产量和品质显著相关;综合考虑形态指标、风味品质和经济品质指标,采用层次分析确定评价指标最终权重排名前5的是产量、单果变异系数、单果质量、可溶性固形物含量和可溶性糖含量。基于DTOPSIS分析法得出综合排序前3的品种分别是宝冠、洪新和京阑,推荐作为日光温室东西垄向宜机化栽培西瓜品种。
