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基于病毒诱导的基因沉默(VIGS)方法的LsRGL1基因在生菜中的功能分析
1
作者 陈丽 范双喜 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期21-26,60,共7页
为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡... 为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡切片、实时荧光定量PCR(qPCR)方法、酶联免疫吸附法(ELISA)分别研究空白对照组(无TRV载体)、阴性对照组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2空载体)和试验组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2-LsRGL1重组载体)中植株表型、花芽分化、LsRGL1基因的相对表达量和内源激素质量分数的变化。结果表明:病毒侵染后,试验组植株的茎长相对于空白对照组和阴性对照组的茎长明显增大,且试验组各项表型数据均大于2个对照组的表型数据,而空白对照组与阴性对照组各项表型数据之间并未出现明显差异;石蜡切片结果表明试验组植株已经开始花芽分化,相较于对照组提前进入生殖生长时期;qPCR分析结果显示,试验组中LsRGL1基因的相对表达量相较于空白组和阴性对照组的显著下调,且下调幅度均超过50%。试验组中内源激素赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)、生长素(IAA)的含量显著高于对照组的含量,而茉莉酸(JA)含量显著下降。综上可知,沉默LsRGL1基因加快了生菜的抽薹。 展开更多
关键词 生菜 表达分析 内源激素 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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番茄SlERF-H6基因VIGS沉默载体构建
2
作者 李立霞 胡康棣 +1 位作者 姚改芳 张华 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第9期1232-1235,1242,共5页
番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信... 番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信号转导和代谢物调节等多种生理过程中起重要的调节作用。文章以番茄的SlERF-H6(LOC101259323)基因为研究对象,通过对SlERF-H6的基因序列进行分析,获得该基因的特异性区域沉默序列。利用同源重组技术成功构建了番茄SlERF-H6病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)载体。为进一步探究番茄SlERF-H6基因在果实成熟中的作用提供参考。 展开更多
关键词 番茄 病毒诱导的基因沉默(vigs) SlERF-H6基因 同源重组 载体构建
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广藿香PcGA2ox1基因克隆、VIGS载体构建和表达分析
3
作者 严雅玲 曾晴 +2 位作者 严寒静 何梦玲 张宏意 《山东农业科学》 北大核心 2024年第5期19-26,共8页
赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学... 赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学分析结果表明,PcGA2ox1蛋白编码186个氨基酸,为亲水性蛋白,分子量为20.98 kDa,等电点为5.81,不含信号肽,无跨膜结构域,具有GA2ox超基因家族的保守结构域,主要定位在细胞核。系统发育分析结果显示,PcGA2ox1基因与丹参GA2ox7的亲缘关系最为密切。qRT-PCR结果显示,PcGA2ox1基因在广藿香中的表达具有组织特异性,叶中表达量最高,根中表达量最低。用病毒诱导基因沉默(VIGS)技术侵染广藿香的结果显示,侵染两周后,PcGA2ox1基因表达量比阴性对照下降83%,比空白对照下降71%,沉默效果明显。本研究结果可为深入了解PcGA2ox1结构、功能和作用机理奠定基础,并为广藿香优良品种选育提供参考。 展开更多
关键词 广藿香 赤霉素2-氧化酶(GA2ox) 基因克隆 病毒诱导基因沉默(vigs) 表达分析
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miR394a-FBX6模块调控棉花黄萎病抗性
4
作者 廖婵娟 李丹 +6 位作者 赵文军 吴琪 尹秀娟 钟贵买 王智 胡广 翟俊峰 《棉花学报》 北大核心 2025年第3期165-174,I0001,I0002,共12页
【目的】探究ghr-miR394-GhFBX6模块在棉花黄萎病抗性中的功能,为棉花抗病育种提供候选基因。【方法】利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)分析ghr-miR394a和GhFBX6的表达模式... 【目的】探究ghr-miR394-GhFBX6模块在棉花黄萎病抗性中的功能,为棉花抗病育种提供候选基因。【方法】利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)分析ghr-miR394a和GhFBX6的表达模式。在棉花中瞬时超表达ghr-miR394a,利用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术在棉花中分别瞬时沉默ghr-miR394a和GhFBX6,研究二者在抗黄萎病中的功能。利用5'端RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增(5'-RNA ligase-mediated rapid amplification of cDNA ends,5'RLM-RACE)技术并结合荧光素酶(luciferase,LUC)报告系统,分析ghr-miR394a对GhFBX6的调控作用。【结果】qRT-PCR表明,ghr-miR394a在棉花叶片中的表达量较高,其次为茎和根。与清水处理相比,大丽轮枝菌侵染可显著降低根中ghr-miR394a的表达量,显著提高GhFBX6的表达量。与对照植株相比,在棉花中瞬时沉默ghr-miR394a导致病情指数、病株率显著降低,茎段恢复培养后菌丝积累量较少,棉花对黄萎病的抗性增强;而瞬时过表达ghr-miR394a或瞬时沉默GhFBX6则会降低棉花对大丽轮枝菌的抗性,具体表型为二者的病情指数和病株率均显著升高,过表达ghr-miR394a的茎段恢复培养后菌丝积累量较多,GhFBX6沉默棉株茎秆的维管束褐变程度加重。5'RLM-RACE和LUC报告系统结果表明,ghr-miR394a在转录后水平抑制GhFBX6表达。【结论】ghr-miR394a可靶向抑制GhFBX6的表达,且ghr-miR394a和GhFBX6在棉花黄萎病抗性响应中分别发挥负调控和正调控功能。 展开更多
关键词 miR394 GhFBX6 棉花 黄萎病 抗病性 病毒诱导的基因沉默
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GhALMT10在干旱胁迫下的功能鉴定
5
作者 马鑫 雷建峰 +4 位作者 黄诗雨 张国帅 郭浩猛 李月 代培红 《棉花学报》 北大核心 2025年第3期175-184,共10页
【目的】探究铝激活苹果酸转运蛋白(aluminum-activated malate transporter,ALMT)家族基因GhALMT10在棉花抗旱过程中的生物学功能,为深入了解棉花抗旱机制奠定基础。【方法】通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从陆地... 【目的】探究铝激活苹果酸转运蛋白(aluminum-activated malate transporter,ALMT)家族基因GhALMT10在棉花抗旱过程中的生物学功能,为深入了解棉花抗旱机制奠定基础。【方法】通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从陆地棉TM-1扩增GhALMT10基因编码序列,并进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测该基因在棉花不同组织部位和干旱胁迫下的表达模式。通过病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术,初步验证了该基因在棉花响应干旱胁迫中发挥的生物学功能。【结果】GhALMT10基因编码区长度为1401 bp,编码1个包含466个氨基酸残基的蛋白,预测其为稳定、疏水蛋白。系统进化分析表明GhALMT10与GrALMT10、GaALMT10-like、HsALMT10和TcALMT10亲缘关系较近。qRT-PCR结果显示,该基因在棉花根、茎、叶中都有表达,且在根中的表达量最高。与清水处理相比,干旱胁迫处理3 h该基因的表达量较低,6 h、9 h的表达量显著升高,24 h的表达量显著降低。与阴性对照棉株相比,GhALMT10基因沉默棉株在干旱胁迫下的存活率显著提高,离体叶片失水率显著降低,叶片的叶绿素含量显著升高而丙二醛含量显著降低。【结论】GhALMT10基因沉默棉株对干旱胁迫的耐受能力显著提高,GhALMT10基因负调控棉花抗旱性。 展开更多
关键词 棉花 GhALMT10 干旱胁迫 表达模式分析 病毒诱导的基因沉默 生理生化指标
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石蒜同源基因沉默体系构建及鳞茎发生基因功能验证 被引量：1
6
作者 肖潇 夏宜平 +3 位作者 崔柳 张佳平 洪震 任梓铭 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第1期89-101,共13页
本研究以浙江省野生资源丰富的海滨石蒜(Lycoris insularis)为材料,构建了以鳞茎为外植体的石蒜同源基因沉默体系,并通过该体系验证了海滨石蒜鳞茎发生基因的生物功能。通过设计特异性引物,从鳞茎中克隆获得LiCWIN基因片段,全长1 706 bp... 本研究以浙江省野生资源丰富的海滨石蒜(Lycoris insularis)为材料,构建了以鳞茎为外植体的石蒜同源基因沉默体系,并通过该体系验证了海滨石蒜鳞茎发生基因的生物功能。通过设计特异性引物,从鳞茎中克隆获得LiCWIN基因片段,全长1 706 bp;经双酶切后与烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus, TRV)载体TRV2-GFP连接,从而构建病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)重组载体;转化根癌农杆菌后,用菌液侵染损伤刺激后的鳞茎块。侵染2 d后,观察到鳞茎维管组织中存在绿色荧光;实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorogenic quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测发现,沉默组LiCWIN基因表达量显著降低。侵染40 d后,相较于空载体对照组,LiCWIN基因沉默组小鳞茎发生数量下降且发育迟缓。上述结果表明,VIGS体系在海滨石蒜鳞茎组织中成功沉默了功能基因,且对小鳞茎后期发育的表型产生了持续影响。特别是LiCWIN基因沉默后,小鳞茎发生受阻。本研究为石蒜鳞茎发生发育关键基因的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 石蒜属 基因功能 瞬时验证 病毒诱导的基因沉默 体系构建 CWIN基因 小鳞茎发生
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桑树PDS基因VIGS转化体系的构建与鉴定 被引量：7
7
作者 李瑞雪 王钰婷 +3 位作者 胡飞 夏家凤 汪泰初 赵卫国 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1432-1438,共7页
【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(T... 【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(TRV)连接构建重组病毒载体p TRV2-PDS,转化农杆菌GV3101后通过压迫注射方式侵染桑树幼苗叶片。【结果】克隆获得的桑树PDS基因干扰片段346 bp,与改造后的TRV质粒连接可成功构建携带桑树PDS基因的重组病毒载体p TRV2-PDS。桑树叶片被侵染15 d后,接种重组病毒载体p TRV2-PDS桑树的第二轮真叶开始出现叶片白化现象,侵染20 d后,白化现象沿叶脉向四周逐渐扩散,叶片呈现明显的白化表型。实时荧光定量PCR检测结果显示,重组病毒载体p TRV2-PDS侵染的桑叶PDS基因相对表达量仅为阴性对照(p TRV2)的58%,二者差异极显著(P<0.01),表明桑树PDS基因表达被有效抑制。【结论】利用TRV构建的桑树VIGS体系能有效沉默PDS基因,使桑树叶片呈现明显的白化症状,即可用于后续的桑树功能基因鉴定。 展开更多
关键词 桑树 八氢番茄红素脱氢酶(PDS) 病毒诱导的基因沉默(vigs) 烟草脆裂病毒(TRV) 白化表型
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病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术及其在大豆基因功能研究和育种中的应用潜力 被引量：4
8
作者 王爽 郭兵福 +4 位作者 郭勇 张丽娟 金龙国 杨慧 邱丽娟 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期536-540,共5页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观察表型等优点而被广泛应用于基因的功能鉴定。文章对VIGS技术的分子机理、病毒载体系统、稳定遗传VIGS植株的获得策略及其在大豆中的应用等内容进行了综述并对今后的发展趋势进行了讨论。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 vigs 病毒载体 功能基因 育种
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芦笋病毒诱导基因沉默体系的初步构建
9
作者 吴贺 李云宾 +3 位作者 董陈文华 林春 刘正杰 毛自朝 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期31-41,共11页
【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄... 【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄红素脱氢酶编码基因(AoPDS)和镁螯合酶Ⅰ亚基编码基因(AoCH42)为报告基因,基于苹果潜伏球形病毒(apple latent spherical virus,ALSV)沉默载体,采用真空渗透法通过农杆菌对芦笋露白种子进行侵染,经表型和qRT-PCR检测,构建芦笋的VIGS体系,并进一步验证编码芦笋NADH-脱氢酶铁硫蛋白亚基S8基因(AoNDUFS8)的功能。【结果】侵染21 d后,AoPDS和AoCH42沉默植株分别出现白化和黄化表型;AoNDUFS8沉默植株长势瘦弱,发育迟缓。qRT-PCR结果显示:与对照组相比,植株侵染后,目的基因表达均下降,预示成功构建芦笋VIGS体系。【结论】基于ALSV的VIGS体系能有效沉默芦笋中的目的基因,为后续芦笋功能基因组分析提供了实践基础。 展开更多
关键词 芦笋 病毒诱导基因沉默(vigs)体系 PDS CH42 基因功能
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TRV介导欧洲甜樱桃果实VIGS体系的建立 被引量：7
10
作者 齐希梁 李明 +1 位作者 刘聪利 宋露露 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1309-1315,共7页
【目的】建立欧洲甜樱桃果实VIGS体系。【方法】利用In-Fusion cloning技术,构建欧洲甜樱桃的烟草脆裂病毒(TRV)介导基因沉默表达载体pTRV2-ANS,转入农杆菌GV3101中,采用注射压迫法侵染欧洲甜樱桃果实,通过分子检测、qRT-PCR和表型观察... 【目的】建立欧洲甜樱桃果实VIGS体系。【方法】利用In-Fusion cloning技术,构建欧洲甜樱桃的烟草脆裂病毒(TRV)介导基因沉默表达载体pTRV2-ANS,转入农杆菌GV3101中,采用注射压迫法侵染欧洲甜樱桃果实,通过分子检测、qRT-PCR和表型观察技术评价TRV介导VIGS沉默体系的效果。【结果】TRV::ANS侵染的欧洲甜樱桃果实ans基因的表达显著低于TRV::00侵染的果实。与TRV::00比较,TRV::ANS侵染的欧洲甜樱桃果实的果皮和果肉颜色都没有发生着色,果皮和果肉颜色呈绿色,而TRV::00侵染的欧洲甜樱桃果实的果皮和果肉正常着色。【结论】研究建立的TRV介导欧洲甜樱桃VIGS体系可有效沉默欧洲甜樱桃果实内源基因表达。该体系为欧洲甜樱桃果实品质基因的功能验证及分子机制研究奠定了技术基础。 展开更多
关键词 欧洲甜樱桃 TRV vigs 基因沉默 果实
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利用BSMV-VIGS技术快速分析小麦TNBL1基因的抗黄矮病功能 被引量：9
11
作者 赵丹 赵继荣 +4 位作者 黄茜 李宁 刘艳 黄占景 张增艳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2106-2110,共5页
小麦黄矮病是由蚜虫介导的大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarfvirus,BYDV)侵染引起的小麦重要病害之一。利用cDNA-AFLP分析,筛选出在抗黄矮病小麦易位系YW642中特异表达的长度为292bp的cDNA片段,以此片段为启始序列,利用RACE和RT-PCR技... 小麦黄矮病是由蚜虫介导的大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarfvirus,BYDV)侵染引起的小麦重要病害之一。利用cDNA-AFLP分析,筛选出在抗黄矮病小麦易位系YW642中特异表达的长度为292bp的cDNA片段,以此片段为启始序列,利用RACE和RT-PCR技术克隆出该基因的全长cDNA序列,推导该基因编码1个NBS-LRR蛋白,将其命名为TNBL1。本研究利用大麦条纹花叶病毒(BSMV)诱导的基因沉默(virus-inducing gene silencing,VIGS)技术,快速分析TNBL1是否参与小麦抗黄矮病反应。通过PCR添加酶切位点、定向酶切与连接,将TNBL1特异的292bp片段反向整合到BSMV-γ链的多克隆位点上,获得重组载体BSMV-γ:TNBL1as,体外转录BSMV-VIGS载体的3个组分(BSMV-TNBL1as、BSMV-α和BSMV-β),等量混合、摩擦接种到抗黄矮病的小麦易位系YW642幼苗叶片上,使YW642中TNBL1基因沉默,然后接种BYDV病原进行黄矮病抗性鉴定。结果表明,TNBL1基因沉默后的YW642对BYDV敏感、显现感病症状,其体内BYDV含量较未发生基因沉默的YW642中的明显增加,证明TNBL1基因是正向调控小麦抗BYDV反应的1个重要基因。 展开更多
关键词 小麦 中间偃麦草 黄矮病 病毒诱导的基因沉默 NBS-LRR
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VIGS诱导MdHB-1沉默对苹果果实成熟的影响 被引量：9
12
作者 温小红 姜永华 +1 位作者 周轲 任小林 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期113-119,共7页
为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,V... 为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,VIGS技术成功抑制果肉MdHB-1表达,使MdACO1表达量下调,果实的呼吸强度和乙烯释放速率受到显著抑制,果实硬度、可溶性固形物和可滴定酸质量分数的下降延缓。说明:MdHB-1不仅可以正向调控苹果果实MdACO1表达,还参与果实的成熟衰老过程。 展开更多
关键词 '澳洲青苹’苹果 vigs 转录因子MdHB-1 果实成熟
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VIGS载体在果树中的应用研究进展 被引量：7
13
作者 张新华 季娜娜 +2 位作者 闵德栋 邵淑君 李富军 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期507-514,共8页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物中天然存在的一种抵御外源核酸入侵的防御反应,属于转录后基因沉默现象,现在已被开发成通过改造含有目的基因片段的病毒载体来抑制植物内源基因表达的遗传技术。与传统的... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物中天然存在的一种抵御外源核酸入侵的防御反应,属于转录后基因沉默现象,现在已被开发成通过改造含有目的基因片段的病毒载体来抑制植物内源基因表达的遗传技术。与传统的植物转基因技术相比,VIGS技术具有简便、高效、高通量的优势,近年来在果树基因功能的研究中发挥了重要作用。由于VIGS技术需要借助病毒载体来实现,所以选择适宜的病毒载体是在性状各异的果树中成功构建VIGS体系的关键。本文介绍了在果树中应用的VIGS载体及其在基因功能研究中的应用实例,并分析了病毒载体在诱导果树基因沉默时存在的一些问题及解决方法。 展开更多
关键词 果树 病毒诱导的基因沉默 病毒载体
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VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性 被引量：5
14
作者 阮小蕾 王加峰 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期418-422,共5页
将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完... 将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完整的Rep mRNA,但接种后不同时间在接种叶以上部位陆续出现了Rep mRNA的降解;接种后30 d内,接种叶下部第1片叶上始终未出现Rep mRNA的降解;另外,在发生mRNA降解的叶片上都能相继检测到小分子干涉RNA(short interferring RNA,si RNA)的产生。这说明转基因番木瓜的抗病性与mRNA的降解及siRNA的积累有着密切的关系。这种抗性发生在转录后水平上,是由病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)介导产生的。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 病毒诱导的基因沉默 抗病机制
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利用VIGS技术对抗SMV候选基因GmZ15的功能分析 被引量：4
15
作者 黄赛花 郑桂杰 +1 位作者 杨永庆 智海剑 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期582-587,共6页
大豆花叶病毒(SMV)是我国大豆田间主要病毒性病害,阐明大豆对SMV的抗性机制对抗性的利用具有重要意义。利用VIGS技术对抗性基因RSC3Q的候选基因Gm Z15进行功能分析,结果表明:Gm Z15在SMV的诱导后表达量发生明显变化,在接种后24 h表达量... 大豆花叶病毒(SMV)是我国大豆田间主要病毒性病害,阐明大豆对SMV的抗性机制对抗性的利用具有重要意义。利用VIGS技术对抗性基因RSC3Q的候选基因Gm Z15进行功能分析,结果表明:Gm Z15在SMV的诱导后表达量发生明显变化,在接种后24 h表达量达到最高。沉默Gm Z15后的表达量分别为缓冲液对照和p GG7R2空载体对照组的0.3和0.2倍,差异极显著,表明Gm Z15被有效沉默。沉默后接种SMV结果显示,沉默后48 h SMV的浓度约是未沉默处理的6倍,说明沉默Gm Z15有助于SMV的积累,但在其上位叶中均检测到少量SMV且差异未达到显著水平,由此推测Gm Z15介导着一种大豆对SMV的防御反应,齐黄1号对SC3株系的抗性另有其它基因参与。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒 病毒诱导的基因沉默 抗病基因 功能验证
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苏麦3号小麦穗部病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系的建立及验证 被引量：3
16
作者 吴磊 姜朋 +2 位作者 张瑜 马鸿翔 张旭 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期-,共5页
为了探讨利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系在小麦穗部进行基因沉默的可行性,用大麦条纹花叶病毒诱导苏麦3号小麦穗部PDS基因的转录后沉默,再接种禾谷镰刀菌进行抗性鉴定。结果表明,与接种空载BSMV∶00的对照相比,接种BSMV∶PDS的小麦穗... 为了探讨利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系在小麦穗部进行基因沉默的可行性,用大麦条纹花叶病毒诱导苏麦3号小麦穗部PDS基因的转录后沉默,再接种禾谷镰刀菌进行抗性鉴定。结果表明,与接种空载BSMV∶00的对照相比,接种BSMV∶PDS的小麦穗中PDS基因表达量下调了77%(P<0.05)。接种BSMV∶00的小麦穗受到赤霉病菌侵染后,穗部平均病小穗数和DON毒素含量分别为2.75个和4.55μg/g,与接种无菌水对照无显著差异(P>0.05)。说明在苏麦3号穗部VIGS系统中,通过接种病毒能使靶标基因沉默;接种赤霉病菌后,苏麦3号病小穗数和DON毒素含量不受接种病毒的影响,对赤霉病菌的抗性保持不变,建立的VIGS体系可以应用于小麦赤霉病抗性候选基因的功能分析。 展开更多
关键词 小麦 赤霉病抗性 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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黄花菜八氢番茄红素脱氢酶基因HcPDS的克隆及VIGS转化表达验证 被引量：4
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作者 李森 程宵婧 +5 位作者 侯非凡 公菲菲 刘娟 杜崴 亢秀萍 邢国明 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期25-32,共8页
为了拓宽对黄花菜基因功能研究的技术体系,本研究以黄花菜‘大同黄花’为试验材料,基于转录组数据库检索和PCR技术克隆得到了黄花菜HcPDS基因完整编码序列,序列全长1710 bp,编码570个氨基酸。该基因编码的蛋白质具有PDS基因家族典型的Ph... 为了拓宽对黄花菜基因功能研究的技术体系,本研究以黄花菜‘大同黄花’为试验材料,基于转录组数据库检索和PCR技术克隆得到了黄花菜HcPDS基因完整编码序列,序列全长1710 bp,编码570个氨基酸。该基因编码的蛋白质具有PDS基因家族典型的Phytoene desat结构域,分子量为63.71972 kD,等电点为7.53,是亲水不稳定性蛋白。通过序列比对,发现HcPDS基因与水仙、芦笋等植物中的PDS基因具有较高的同源性。通过构建黄花菜病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系,黄花菜幼苗被侵染后,接种pTRV2-HcPDS的植株新叶出现不完全的光漂白现象,叶片中的HcPDS基因表达量相比接种TRV2空载的阴性对照和空白对照植株分别下降了73.33%和71.72%。空白对照和阴性对照植株叶片则无光漂白现象出现,且空白对照和阴性对照的HcPDS基因表达量相比无显著差异。所构建的黄花菜VIGS体系可有效沉默HcPDS基因,为黄花菜功能基因的鉴定与分析奠定了技术基础。 展开更多
关键词 黄花菜 基因克隆 病毒诱导的基因沉默 表达鉴定
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在小麦上实施基因沉默的VIGS系统优化 被引量：4
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作者 张立荣 杨文香 刘大群 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期111-113,共3页
以大麦条纹花叶病毒(Barley stripe mosaic virus,BSMV)改造的VIGS(Virus induced gene silencing)载体在单子叶植物中能够介导基因沉默,因此BSMV在植物基因功能鉴定中具有广泛的应用。本试验通过在近等基因系TcLr24中对BSMV VIGS载体... 以大麦条纹花叶病毒(Barley stripe mosaic virus,BSMV)改造的VIGS(Virus induced gene silencing)载体在单子叶植物中能够介导基因沉默,因此BSMV在植物基因功能鉴定中具有广泛的应用。本试验通过在近等基因系TcLr24中对BSMV VIGS载体系统进行优化,以保证更方便地在小麦近等基因系(NIL)中实施VIGS功能验证。 展开更多
关键词 大麦条纹花叶病毒 vigs 基因功能鉴定
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黑籽南瓜NBS类基因CfRFN2的克隆及VIGS验证 被引量：2
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作者 丁玉梅 侯思名 +4 位作者 姚春馨 杨加珍 谢俊俊 曾亚文 杨正安 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期727-737,共11页
黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的具有高抗枯萎病遗传性状的瓜类种质资源。为鉴定黑籽南瓜中NBS-LRR类基因的抗病功能,该研究从其叶片中克隆了NBS类基因CfRFN 2(GenBank ID:MK618462),测序全长为4303 bp,完整的编码框长度为40... 黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的具有高抗枯萎病遗传性状的瓜类种质资源。为鉴定黑籽南瓜中NBS-LRR类基因的抗病功能,该研究从其叶片中克隆了NBS类基因CfRFN 2(GenBank ID:MK618462),测序全长为4303 bp,完整的编码框长度为4092 bp,编码1363个氨基酸残基,该基因注释为拟南芥抗病蛋白At4g27190类转录体X1的同源基因,含有1个NB-ARC和2个LRR结构域,属于具有信号肽的可溶性蛋白。核苷酸相似性分析显示,CfRFN 2与其他瓜类NBS类基因相似性在87%~98%之间;系统进化树分析表明,CfRFN2蛋白和瓜类的其他NBS类抗病蛋白聚为一个分支,其中CfRFN2蛋白与中国南瓜和美洲南瓜的RPS2、印度南瓜的RPS2-like亲缘关系最近,其次是黄瓜的At4g27190和苦瓜的At4g27220,与甜瓜的Atg27190亲缘关系相对较远;组织表达特性分析表明,CfRFN 2基因在黑籽南瓜叶片中表达量最高,其次是茎,而在果皮和根中表达量较低。该研究采用烟草脆裂病毒载体系统,构建了黑籽南瓜VIGS沉默载体pTRV2-CfRFN 2,含沉默载体的农杆菌侵染黑籽南瓜幼苗后接种枯萎病菌,qRT-PCR检测表明,接种后2 d和4 d的转pTRV2-CfRFN 2沉默组植株的CfRFN 2基因表达量比接种后同时期的野生型植株显著降低(分别下降34.75%和98.27%),病情指数增加为野生型的1.32倍,初步证明黑籽南瓜CfRFN 2基因具有抗枯萎病的功能,推测该基因可能在黑籽南瓜抗枯萎病防御过程中发挥着重要作用。该研究中NBS类基因CfRFN2的克隆和VIGS验证为黑籽南瓜更多优异基因的克隆和功能验证奠定了前期基础,也为发掘黑籽南瓜优异抗病基因和开展瓜类分子育种提供新信息。 展开更多
关键词 黑籽南瓜 NBS类基因 枯萎病 基因克隆 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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刺萼龙葵PDS基因VIGS载体的构建 被引量：2
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作者 王旭 王新果 +2 位作者 张朝贤 黄红娟 魏守辉 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期137-141,共5页
病毒诱导的基因沉默(VIGS)是通过插入目的基因片段的重组病毒来抑制植物内源基因表达的遗传技术,主要用于基因的功能分析。茄科植物刺萼龙葵(Solanum rostratum)是一种外来恶性杂草,研究证实,在农杆菌GV3101介导下,刺萼龙葵的八氢番茄... 病毒诱导的基因沉默(VIGS)是通过插入目的基因片段的重组病毒来抑制植物内源基因表达的遗传技术,主要用于基因的功能分析。茄科植物刺萼龙葵(Solanum rostratum)是一种外来恶性杂草,研究证实,在农杆菌GV3101介导下,刺萼龙葵的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因能被部分沉默,导致叶片和花朵出现白化表型。半定量RT-PCR检测显示,被侵染叶片和花朵的mRNA显著降解。VIGS沉默体系的建立可适用于研究刺萼龙葵的部分功能基因,有助于深入了解其生长发育调控的分子机制。 展开更多
关键词 刺萼龙葵 八氢番茄红素脱氢酶 病毒诱导基因沉默 烟草脆裂病毒
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