云南地区部分猪场猪呼吸道疾病综合症(PRDC)患病猪群中PRRSV,PCV-2,CSFV,PRV混合感染调查 被引量：25

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作者 舒相华 尹革芬 +4 位作者 杨志雷 宋春莲 李文贵 潘伟荣 刘旭川 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期54-58,共5页

针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型... 针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型PCV-2特异抗体。结果表明:各季节和不同生长阶段猪群存在一种及两种以上的病毒混合感染,四重感染相对较少。从全年看单独感染占39.10%,PCV-2感染率最高,其次是PRV,PRRSV和CSFV;二重感染占26.13%,以PCV-2+PRV最常见,其次是PCV-2+PRRSV、PRV+PRRSV;三重感染占8.05%,PCV-2+PRRSV+PRV最常见;有四重感染出现,仅占1.57%。从季节来看,春季和夏季混合感染最高,分别为76.53%和60.74%,冬季和秋季的混合感染率分别为59.50%和53.55%。从年龄和性别看,育肥猪的混合感染率高于仔猪,分别为68.66%和61.11%,种公猪的感染率高于母猪,分别为70.00%和55.51%。说明4种病毒有单独感染或混合感染,推测其中PCV-2在混合感染中可能充当免疫抑制的角色,混合感染使PRDC症状更明显,死亡率增高。 展开更多

关键词 猪呼吸道疾病综合征 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒

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携带分子标记的PCV1-2嵌合病毒的构建及其生物学特性的初步分析 被引量：1

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作者 徐国 代振江 +8 位作者 曾智勇 梁海英 汤德元 王彬 黄涛 叶百川 张爱琼 何小莉 咸文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期779-784,共6页

为构建携带分子标记的PCV1-2嵌合病毒,本研究通过基因工程技术将V5标签引入PCV2的ORF2末端,以ORF2-V5替换PCV1的ORF2后克隆于pcDNA3.1(+)载体中,构建pcDNA-PCV1-2m-V5。为检验pcDNA-PCV1-2m-V5的体外感染性,将其转染PK-15细胞后,采用IPM... 为构建携带分子标记的PCV1-2嵌合病毒,本研究通过基因工程技术将V5标签引入PCV2的ORF2末端,以ORF2-V5替换PCV1的ORF2后克隆于pcDNA3.1(+)载体中,构建pcDNA-PCV1-2m-V5。为检验pcDNA-PCV1-2m-V5的体外感染性,将其转染PK-15细胞后,采用IPMA、RT-PCR等技术进行检测,结果显示:pcDNA-PCV1-2m-V5具有感染性。采集已注射pcDNA-PCV1-2m-V5质粒的小鼠血清接种于PK-15细胞,应用细胞试验、PCR技术、IFA、western blot及电镜等试验对嵌合病毒进行鉴定。结果显示:在小鼠体内拯救出PCV1-2m-V5嵌合病毒,且V5标签的引入能够很好地区分嵌合病毒和亲本病毒产生的Cap蛋白。本实验可为PCV2的感染性DNA (iDNA)疫苗研发提供素材和参考。 展开更多

关键词 遗传标记 拯救 pcv1-2嵌合病毒 V5标签

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PRRSV、PCV-2临床感染猪外周血中ACTH含量的变化 被引量：1

3

作者 王全溪 李巧苹 +1 位作者 许文滉 罗奕梁 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第1期68-72,共5页

采集61头有呼吸道疾病症状猪的病料,采用分子生物学方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、PRRSV变异株、猪圆环病毒2型(PCV-2)的检测,并采集血液分离血清,用放射性免疫法检测其外周血中促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量.结果表明:PCV-2... 采集61头有呼吸道疾病症状猪的病料,采用分子生物学方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、PRRSV变异株、猪圆环病毒2型(PCV-2)的检测,并采集血液分离血清,用放射性免疫法检测其外周血中促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量.结果表明:PCV-2核酸阳性率为72.13%,PRRSV为39.34%,PRRSV变异株为22.95%;临床存在混合感染,特别是PRRSV与PCV-2的混合感染,感染率达16.39%;PRRSV、PRRSV变异株和PCV-2的感染均比对照组极显著地提高ACTH的含量,其中以PRRSV变异株与PRRSV的混合感染对ACTH的影响最大,ACTH含量达32.20 pg.mL-1.可见,PRRSV、PCV-2的感染促进了ACTH的分泌,增加猪的应激反应,从而降低病猪的免疫功能. 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 猪圆环病毒2型(pcv-2) 促肾上腺皮质激素(ACTH)

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检测PRRSV-Ⅰ、PRRSV-Ⅱ和PCV-2多重PCR方法的建立及初步应用 被引量：4

4

作者 徐艇 刘长龙 +1 位作者 石逢庄 袁世山 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期24-30,共7页

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virns,PRRSV)欧洲株(PRRSV-I)、北美株(PRRSV-II)常与猪圆环病毒2型(Porcine Circorirns type2,PCV-2)呈混合感染,严重影响养猪业的经济效益。本文根据GenBank... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virns,PRRSV)欧洲株(PRRSV-I)、北美株(PRRSV-II)常与猪圆环病毒2型(Porcine Circorirns type2,PCV-2)呈混合感染,严重影响养猪业的经济效益。本文根据GenBank上已发表的PRRSV北美型(PRRSV-I)、PRRSV欧洲型(PRRSV-II)、圆环病毒2型(PCV-2)的基因组全序列,分别设计了3对能特异性扩增PRRSV-I、PRRSV-II和PCV-2的引物,建立并优化了可同时检测PRRSV-I、PRRSV-II和PCV-2三种病毒的多重PCR方法,通过对临床病料的检测,证实了此方法具有高特异性、高灵敏度、高效率、低成本的特点,适合大量样本的分析与鉴定。利用该方法能在24h内对样品进行检测并获得结果,因此本方法的建立对这3种病毒的早期快速诊断有十分重要的意义。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 猪圆环病毒2型(pcv-2) 多重PCR

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稳定表达IL-10的PK-15细胞的构建及其在PCV2增殖中的应用 被引量：2

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作者 张敬寒 李枝兰 +6 位作者 韩佃刚 何帅 刘金华 吕念词 邹丰才 柴俊 张以芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第3期1085-1095,共11页

【目的】研究白细胞介素-10(IL-10)对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)复制的影响,筛选PCV2高感染性细胞系和提高PCV2病毒滴度,为后续疫苗的研发及IL-10在PCV2感染中的作用研究提供参考。【方法】利用PCR技术扩增猪IL-10... 【目的】研究白细胞介素-10(IL-10)对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)复制的影响,筛选PCV2高感染性细胞系和提高PCV2病毒滴度,为后续疫苗的研发及IL-10在PCV2感染中的作用研究提供参考。【方法】利用PCR技术扩增猪IL-10基因,将目的基因与慢病毒表达载体(pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro)进行连接,获得重组质粒pCDH-CMV-IL-10,将其与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞进行慢病毒包装。用收集的慢病毒液感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选后得到细胞株PK-15-IL-10,对照组细胞分别命名为PK-15-pCDH和PK-15。PCV2感染PK-15-IL-10、PK-15-pCDH和PK-15细胞株后,在24、48和72 h分别收集细胞液,利用CCK-8检测细胞活力。利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测IL-10基因的表达水平和PCV2的复制情况;利用间接免疫荧光试验(IFA)观察PCV2在细胞中的复制情况及测定PCV2的病毒滴度(TCID50)。【结果】试验成功构建了重组质粒pCDH-CMV-IL-10,将其与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞后,48 h时细胞状态最好,荧光最强。分别收集共转染48和72 h的慢病毒液上清感染PK-15细胞,pCDH-CMV-IL-10组的荧光最强,将其在嘌呤霉素浓度为2.5μg/mL的完全培养基中继续培养,获得仍有绿色荧光的稳转细胞株。实时荧光定量PCR和Western blotting检测发现,IL-10基因在pCDH-IL-10细胞株中的表达量明显高于对照组PK-15-pCDH和PK-15,PCV2的拷贝数增加了4倍,复制能力增强,且将病毒稀释连续传3代后,PK-15-IL-10细胞中的PCV2极显著高于PK-15细胞(P<0.01)。细胞增殖试验表明,猪IL-10基因在细胞中过表达对细胞活力无明显影响;IFA结果表明,PK-15-IL-10细胞中的荧光比PK-15细胞更强,PCV2在PK-15-IL-10细胞中的TCID50在感染后48 h极显著高于PK-15细胞(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了pCDH-CMV-IL-10的慢病毒表达载体,并利用其感染PK-15细胞,继续培养后筛选出过表达IL-10的PK-15-IL-10细胞株,用PCV2感染该细胞株能促进PCV2在PK-15细胞中的复制。本试验结果为后期疫苗研究提供了参考,为进一步研究IL-10对PCV2在PK-15细胞中复制的影响奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型(pcv2) 白细胞介素-10(IL-10) 免疫抑制 慢病毒表达载体 稳定表达细胞系

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猪圆环病毒2型PCR检测方法建立及检测限探讨 被引量：1

6

作者 李思雨 王翠 +8 位作者 马涛 覃艳然 卢丽飞 许宗丽 梁兆斌 刘文波 覃一峰 严斯刚 韦祖樟 《中国猪业》 2024年第6期76-82,共7页

近年来,猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)在自然界中的流行毒株越来越多样,为更便捷地检测自然界中的猪圆环病毒,本研究建立了一种检测PCV2流行毒株感染的PCR方法,为PCV2流行病学调查提供技术支持。本研究根据GenBank中公开的PCV2全... 近年来,猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)在自然界中的流行毒株越来越多样,为更便捷地检测自然界中的猪圆环病毒,本研究建立了一种检测PCV2流行毒株感染的PCR方法,为PCV2流行病学调查提供技术支持。本研究根据GenBank中公开的PCV2全基因序列,设计特异引物,经过构建阳性质粒、灵敏度试验、特异性试验,建立了PCR检测方法。结果显示,建立的PCR方法检测极限为500 copies/μL,以猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪塞内卡病毒、猪盖塔病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和猪圆环病病毒3型的cDNA/DNA作为模板,用该方法扩增的猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪塞内卡病毒、猪盖塔病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和猪圆环病病毒3型等的结果均为阴性,表明建立的方法特异性良好;应用该方法检测了疑似猪圆环病毒组织样品279份,检测到猪圆环病毒2型阳性样品118份,PCV2的阳性率为42.29%。本研究成功建立了检测PCV2感染的PCR方法,为进一步流行病学调查和生物学特性研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 圆环病毒2型 PCR检测 流行病学 检测限 pcv 基因序列

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猪圆环病毒2型感染对猪小肠上皮细胞Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1基因mRNA表达的影响 被引量：3

7

作者 杨昕坦 阮峥 李焕荣 《北京农学院学报》 2019年第1期56-60,共5页

紧密连接在维持肠道黏膜完整性和免疫系统正常发挥功能中作用重大。【目的】旨在探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪小肠上皮细胞(IPEC)紧密连接的影响。【方法】利用基因克隆获得Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1 (ZO-1)基因的重组质粒并... 紧密连接在维持肠道黏膜完整性和免疫系统正常发挥功能中作用重大。【目的】旨在探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪小肠上皮细胞(IPEC)紧密连接的影响。【方法】利用基因克隆获得Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1 (ZO-1)基因的重组质粒并建立荧光定量RT-PCR标准曲线;利用所建立的方法检测PCV2感染的IPEC中Claudin-1蛋白和闭锁小带蛋白-1mRNA的动态变化。【结果】构建的两种紧密连接蛋白基因的重组质粒荧光定量RT-PCR标准曲线线性关系良好,相关系数均达0.99以上。PCV2感染的IPEC中Claudin-1蛋白和ZO-1mRNA表达在4、12、24、48、72h均显著下降。【结论】PCV2感染可抑制猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白相关基因的表达,破坏细胞间的紧密连接,增加肠道通透性。 展开更多

关键词 pcv2 猪小肠上皮细胞 Claudin-1蛋白 闭锁小带蛋白-1 荧光定量RT-PCR

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猪圆环病毒2型鸡痘病毒活载体疫苗诱导的CTL杀伤活性检测

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作者 秦晓冰 牛晋国 +3 位作者 杨瑞梅 韩先杰 孙月平 单虎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第1期9-14,共6页

通过基因工程的方法获得猪圆环病毒2型(PCV-2)二联重组鸡痘活载体疫苗vUTAL-P1-ORF2ORF1和核酸疫苗pVAX1IL-18ORF2ORF1。将采取不同的免疫方案接种本体动物猪,在二免后15 d分别采猪抗凝血,用淋巴细胞分离液处理,得到淋巴细胞作为效应细... 通过基因工程的方法获得猪圆环病毒2型(PCV-2)二联重组鸡痘活载体疫苗vUTAL-P1-ORF2ORF1和核酸疫苗pVAX1IL-18ORF2ORF1。将采取不同的免疫方案接种本体动物猪,在二免后15 d分别采猪抗凝血,用淋巴细胞分离液处理,得到淋巴细胞作为效应细胞;构建重组质粒p Display-ORF2,并转染PK-15传代细胞,用G418多次筛选得到靶细胞。借助CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay试剂盒从细胞免疫水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性评价该重组鸡痘活载体疫苗的免疫效果。结果表明,采用"Pri me pVAX1-ORF2ORF1,boost vPUTAL-P1-ORF2ORF1"的免疫方案所获得的杀伤活性最高达66.005%±2.671%(效靶比50∶1)和38.870%±2.883%(效靶比25∶1),显著高于对照组(P<0.01)。说明vUTA-P1-ORF2ORF1可以诱导猪产生高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性,且以核酸疫苗首免,重组鸡痘活载体疫苗追加免疫的接种方案最优,为PCV-2基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。 展开更多

关键词 特异性 细胞毒性T淋巴细胞 猪圆环病毒2型 重组鸡痘活疫苗 细胞免疫

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提高猪圆环病毒2型产量的方法比较

9

作者 华涛 张雪花 +6 位作者 唐波 常晨 刘国阳 冯磊 吴培培 张道华 侯继波 《江西农业学报》 CAS 2015年第11期89-94,共6页

为了获得较高的病毒滴度,降低疫苗成本,选用4种刺激剂:二磷酸氯喹(CQ)、刀豆素(Con A)、D-氨基葡萄糖(D-G)和β-甲基-环糊精(MβCD),采用单独刺激和联合刺激感染PCV2的PK-15细胞,研究PCV2增殖情况。结果显示,MβCD和D-G单独作用均能显... 为了获得较高的病毒滴度,降低疫苗成本,选用4种刺激剂:二磷酸氯喹(CQ)、刀豆素(Con A)、D-氨基葡萄糖(D-G)和β-甲基-环糊精(MβCD),采用单独刺激和联合刺激感染PCV2的PK-15细胞,研究PCV2增殖情况。结果显示,MβCD和D-G单独作用均能显著促进PCV2的感染和复制,且效果优于另外2种单独作用;采用3 mmol/L D-氨基葡萄糖和2.5 mmol/L MβCD联合作用方法,在病毒5次传代期间病毒滴度显著高于单独作用组,最高滴度达到107.3TCID50/m L,该法有助于提高PCV2复制效率,提高疫苗的产量。 展开更多

关键词 pcv2 病毒滴度 D-氨基葡萄糖 β-甲基-环糊精 联合作用

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猪断奶后多系统衰竭综合征诊断方法的系列研究 被引量：14

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作者 崔尚金 全艳平 +6 位作者 李曦 蔡阳 符芳 胡守萍 付德霞 吴东来 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期146-149,共4页

本研究对猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的诊断方法临床症状和病理变化、病毒的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等进行了系列研究,这些方法适用于猪断... 本研究对猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的诊断方法临床症状和病理变化、病毒的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等进行了系列研究,这些方法适用于猪断奶后多系统衰竭综合征的诊断。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 病毒分离 聚合酶链反应 免疫组化 酶联免疫吸附试验

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嵌合猪圆环病毒的构建 被引量：3

11

作者 邵小雪 杨倩 +2 位作者 孟凡伟 于红欣 周双海 《北京农学院学报》 2016年第1期55-59,共5页

【目的】为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的嵌合病毒,并为PCV2疫苗研究奠定基础。【方法】以PCV1基因组为骨架,将其衣壳基因替换为PCV2衣壳基因,来构建嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)DNA克隆,将PCV1-2DNA克隆转染PK-15细胞... 【目的】为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的嵌合病毒,并为PCV2疫苗研究奠定基础。【方法】以PCV1基因组为骨架,将其衣壳基因替换为PCV2衣壳基因,来构建嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)DNA克隆,将PCV1-2DNA克隆转染PK-15细胞以获得拯救病毒PCV1-2,并测定PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性。【结果】酶切和序列测定显示成功构建出PCV1-2DNA克隆;免疫荧光试验和PCR检测显示成功获得拯救病毒PCV1-2,其效价达到106.0 TCID50/mL以上;一步生长曲线显示PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性与其亲本病毒近似。【结论】成功构建了1种具有较高体外增殖能力的嵌合猪圆环病毒。 展开更多

关键词 嵌合猪圆环病毒 pcv1-2 感染性DNA克隆

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检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒的二重荧光LAMP方法的建立 被引量：2

12

作者 谢志勤 张民秀 +11 位作者 谢芝勋 范晴 罗思思 谢丽基 黄娇玲 王盛 曾婷婷 张艳芳 李孟 李丹 邓显文 刘加波 《中国兽药杂志》 2020年第9期1-9,共9页

建立一种二重荧光LAMP的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV)的快速诊断技术。根据已发表的PRRSV NSP2基因和PCV2 ORF2基因序列保守区域,分别设计并合成了两组针对PRRSV和PCV2序列的特异性引物和两条探针,两条探针分别... 建立一种二重荧光LAMP的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV)的快速诊断技术。根据已发表的PRRSV NSP2基因和PCV2 ORF2基因序列保守区域,分别设计并合成了两组针对PRRSV和PCV2序列的特异性引物和两条探针,两条探针分别标记不同的荧光基团,PRRSV-Probe 5’端标记FAM荧光基团,3’端标记BHQ1淬灭基团,PCV-Probe 5’端标记CY5.5荧光基团,3’端标记BHQ2淬灭基团。对组成反应体系中的引物、探针以及反应试剂进行优化,建立了二重荧光LAMP检测PRRSV和PCV2方法。对建立的方法进行特异性和敏感性测试,并用模拟混合样品和临床样品进行检测验证。结果显示,本研究建立的方法可以鉴别区分PRRSV和PCV2,特异性试验表明该方法只检测出PRRSV或PCV2,且与参试的对照病毒无交叉反应,特异性好。敏感性测试表明该方法最低检测PRRSV或PCV为100拷贝,敏感性好。对临床样品的检测,结果与荧光定量PCR方法检测结果一致。本研究建立的PRRSV和PCV2二重荧光LAMP检测方法,具有良好的特异性和敏感性,可用于临床样品中检测PRRSV和PCV2。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒 二重LAMP 检测

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