期刊导航
期刊开放获取
上海教育软件发展有限公..
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
2
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
ureI和ctB-ureI真核质粒构建及表达分析
被引量：
3
1
作者
王保宁
杨远
+3 位作者
邝玉
曹康
李明远
李婉宜
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期764-766,770,共4页
目的：构建ureI和ctB—ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况。方法：用pIRES-RD2真核表达载体分别在5’端连接ureI和ctB—ureI基因，经双酶切和测序鉴定正确后，相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞，用荧光显微镜观察荧光标签，确...
目的：构建ureI和ctB—ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况。方法：用pIRES-RD2真核表达载体分别在5’端连接ureI和ctB—ureI基因，经双酶切和测序鉴定正确后，相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞，用荧光显微镜观察荧光标签，确定质粒的转染率；用人抗幽门螺旋杆菌抗体和马抗CtB抗体，采用免疫荧光和免疫酶组织化学等方法研究该两种真核表达质粒在细胞中目的蛋白表达情况。结果：成功构建了ureI和ctB—ureI的真核表达质粒pIRES—RD2-ureI和pIRES-RD2-ctB—ureI，用此质粒转染HEK293T细胞48～72h后，荧光显微镜显示该两种质粒的转染率约为80％；用免疫荧光和免疫酶组织化学方法表明了该两种基因均能在HEK293T细胞表达并有免疫反应性，表达的ureI主要分布在胞质内或细胞膜附近，ctB—ureI在CtB信号肽引导下分布于HEK293T细胞质、细胞膜附近以及细胞外。结论：成功构建了真核载体pIRES2-DsRed2-ureI和pIRES2-DsRed2-ctB—ureI，目的蛋白表达于HEK293T细胞胞质内并有一定免疫反应性。
展开更多
关键词
尿素膜通道蛋白(ureI)
霍乱毒素B亚单位与尿素膜通道蛋白融合(CtB-ureI)
真核表达
在线阅读
下载PDF
职称材料
ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析
被引量：
8
2
作者
王保宁
杨晓芳
+4 位作者
施桥发
李明远
陈翠萍
曹康
李虹
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期276-279,共4页
目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureI的ureI基因5′端插入ct...
目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureI的ureI基因5′端插入ctB基因,构建ctB和ureI双基因原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,转该质粒于E.coliBL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌。IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-ProAnalizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用Westernblot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性。结果工程菌含完整的ctB和ureI基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。在22℃,1mmol/LIPTG诱导4h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%。Westernblot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体。结论成功构建了能表达CtB/UreI蛋白的大肠杆菌表达菌株。对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和UreI的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。
展开更多
关键词
幽门螺杆菌
霍乱毒素B亚单位
尿素膜通道蛋白
融合表达
免疫特性
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
ureI和ctB-ureI真核质粒构建及表达分析
被引量：
3
1
作者
王保宁
杨远
邝玉
曹康
李明远
李婉宜
机构
四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室
成都医学院病原生物学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期764-766,770,共4页
基金
四川省科技厅科技支撑项目(2008SZ0025)
文摘
目的：构建ureI和ctB—ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况。方法：用pIRES-RD2真核表达载体分别在5’端连接ureI和ctB—ureI基因，经双酶切和测序鉴定正确后，相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞，用荧光显微镜观察荧光标签，确定质粒的转染率；用人抗幽门螺旋杆菌抗体和马抗CtB抗体，采用免疫荧光和免疫酶组织化学等方法研究该两种真核表达质粒在细胞中目的蛋白表达情况。结果：成功构建了ureI和ctB—ureI的真核表达质粒pIRES—RD2-ureI和pIRES-RD2-ctB—ureI，用此质粒转染HEK293T细胞48～72h后，荧光显微镜显示该两种质粒的转染率约为80％；用免疫荧光和免疫酶组织化学方法表明了该两种基因均能在HEK293T细胞表达并有免疫反应性，表达的ureI主要分布在胞质内或细胞膜附近，ctB—ureI在CtB信号肽引导下分布于HEK293T细胞质、细胞膜附近以及细胞外。结论：成功构建了真核载体pIRES2-DsRed2-ureI和pIRES2-DsRed2-ctB—ureI，目的蛋白表达于HEK293T细胞胞质内并有一定免疫反应性。
关键词
尿素膜通道蛋白(ureI)
霍乱毒素B亚单位与尿素膜通道蛋白融合(CtB-ureI)
真核表达
Keywords
urea membrane channel protein （urel）
ureI fused with cholerae toxin B （ctB-ureI）
eukaryotic expression
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析
被引量：
8
2
作者
王保宁
杨晓芳
施桥发
李明远
陈翠萍
曹康
李虹
机构
四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室
兰州生物制品研究所
四川大学人类疾病生物治疗国家重点实验室
中国药品生物制品检定所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期276-279,共4页
基金
国家科技部重点项目人类疾病动物模型及防治策略专项资助(No.96-A23-06-02)
文摘
目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureI的ureI基因5′端插入ctB基因,构建ctB和ureI双基因原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,转该质粒于E.coliBL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌。IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-ProAnalizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用Westernblot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性。结果工程菌含完整的ctB和ureI基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。在22℃,1mmol/LIPTG诱导4h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%。Westernblot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体。结论成功构建了能表达CtB/UreI蛋白的大肠杆菌表达菌株。对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和UreI的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。
关键词
幽门螺杆菌
霍乱毒素B亚单位
尿素膜通道蛋白
融合表达
免疫特性
Keywords
Helicobacter pylod
cholera toxin subunit B（CtB）
urea
membrane
channel
protein
（Ure Ⅰ）
fused expression
immunity analysis
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
ureI和ctB-ureI真核质粒构建及表达分析
王保宁
杨远
邝玉
曹康
李明远
李婉宜
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析
王保宁
杨晓芳
施桥发
李明远
陈翠萍
曹康
李虹
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部
