金针菇脂肪酸合酶β亚基的基因克隆和异源表达及与蓝光受体的相互作用

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作者 许佳妮 刘建雨 +5 位作者 于海龙 王瑞娟 陆欢 徐珍 尚晓冬 张中林 《食用菌学报》 北大核心 2025年第4期1-8,共8页

采用快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆金针菇(Flammulina filiformis)脂肪酸合酶β亚基基因(Fffas),通过生物信息学分析基因结构、蛋白质理化性质、蛋白质二级结构、跨膜结构域、亚细胞定位、信号肽和... 采用快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆金针菇(Flammulina filiformis)脂肪酸合酶β亚基基因(Fffas),通过生物信息学分析基因结构、蛋白质理化性质、蛋白质二级结构、跨膜结构域、亚细胞定位、信号肽和启动子序列,采用原核表达载体诱导表达FfFAS,采用谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白沉降实验分析纯化的FfFAS与金针菇蓝光受体FfCry-DASH的相互作用。结果表明:Fffas基因全长为1210 bp,含1个内含子,编码385个氨基酸;FfFAS的相对分子质量为42018,结构式为C_(1852)H_(2889)N_(515)O_(569)S_(17),等电点为6.89,脂肪系数为70.44,平均亲水系数为—0.454,不稳定系数为51.61;FfFAS的二级结构含有31.95%α-螺旋、5.97%延伸链和62.08%无规则卷曲;FfFAS存在超家族保守结构域,为非跨膜蛋白,定位于细胞核,无信号肽;启动子序列含有光响应元件G-框、Sp1、TCT-基序、TCCC-基序和GATA-基序;FfFAS可与FfCry-DASH互作。本结果可为Fffas基因功能及其蛋白质结构的研究提供参考。 展开更多

关键词 金针菇 脂肪酸合酶β亚基 异源表达 蓝光受体

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高原缺氧条件对大鼠肠黏膜组织及缺氧诱导因子-1α、诱导型一氧化氮合酶表达的影响 被引量：13

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作者 吴文明 张方信 +6 位作者 张盼 邓芝云 杨文翠 马强 陈嘉屿 康生朝 杨玉捷 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期592-594,600,共4页

目的探讨高原缺氧条件对大鼠肠黏膜组织形态以及缺氧诱导因子(HIF)-1α和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将40只雄性Wistar大鼠均分为平原对照组及高原24h、48h、72h组,每组10只。平原对照组在常温环境下饲养1个月后处死,高... 目的探讨高原缺氧条件对大鼠肠黏膜组织形态以及缺氧诱导因子(HIF)-1α和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将40只雄性Wistar大鼠均分为平原对照组及高原24h、48h、72h组,每组10只。平原对照组在常温环境下饲养1个月后处死,高原组在平原饲养1个月后于24h内急运至高原,建立高原缺氧模型,分别于到达高原后24、48、72h处死。分别在光镜和电镜下观察大鼠空肠上段的微观组织学变化,用图像测量软件测量绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度及绒毛表面积。免疫组化染色检测HIF-1α及iNOS在肠黏膜中的表达。结果高原24h组肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度及绒毛表面积分别为313.10±10.84、123.10±2.64、432.60±7.37μm和0.09±0.01mm2,与平原对照组(分别为322.00±12.68、127.70±7.24、447.50±21.93μm和0.10±0.01mm2)相比差异无统计学意义(P>0.05),高原48h组上述指标分别为279.00±9.80、101.10±7.11、376.40±19.05μm和0.06±0.01mm2高原72h组上述指标分别为235.80±19.54、76.10±7.58、311.90±18.38μm和0.05±0.01mm2,均显著低于平原对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且高原72h组低于高原48h组(P<0.05)。高原缺氧组24、48、72h时组织中HIF-1α和iNOS的平均光密度值分别为0.24±0.03和0.16±0.05、0.34±0.02和0.25±0.03、0.45±0.03和0.37±0.02,均高于平原对照组(0.13±0.03和0.07±0.02),差异有统计学意义(P<0.05),且高原72h组高于48h组,48h组高于24h组(P<0.05)。高原24、48、72h组肠黏膜组织中HIF-1α及INOS的表达均呈正相关(r1=0.844,r2=0.831,r3=0.863,P<0.05)。结论高原缺氧条件可使肠黏膜产生组织损伤,并诱导肠黏膜中HIF-1α和iNOS蛋白的表达上调;HIF-1α可能参与了肠组织iNOS蛋白的表达过程和肠黏膜损伤。 展开更多

关键词 缺氧 肠黏膜 缺氧诱导因子1 Α亚基 一氧化氮合酶

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植物纤维素合成酶基因的研究进展 被引量：15

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作者 周晓馥 王景余 王兴智 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期376-378,共3页

纤维素是植物细胞壁的主要成分。自然界中每年大约有 180 0亿吨的纤维素产物生成。纤维素的巨大经济价值使纤维素合成酶基因成为基因工程的热点之一。 1996年 ,Delmer小组首次从植物中克隆出纤维素合成酶基因。近年来 ,在纤维素合成酶... 纤维素是植物细胞壁的主要成分。自然界中每年大约有 180 0亿吨的纤维素产物生成。纤维素的巨大经济价值使纤维素合成酶基因成为基因工程的热点之一。 1996年 ,Delmer小组首次从植物中克隆出纤维素合成酶基因。近年来 ,在纤维素合成酶的结构、功能、定位和基因功能的研究方面成果斐然。 展开更多

关键词 植物 纤维素合成酶基因 研究进展 催化亚基 玫瑰花状结构

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抗人F1-F0 ATP合成酶beta亚基单抗的制备及其抗肿瘤活性研究 被引量：8

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作者 张霞 彭艳 +5 位作者 俞丽丽 陈建鹤 王怡波 林建波 倪健 殷明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期984-987,992,共5页

目的:制备鼠抗人F1-F0ATP合成酶beta亚基(hATP5B)单抗,并对其特异性和抗肿瘤活性进行研究。方法:以原核表达人hATP5B免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,筛选分泌抗hATP5B单抗的杂交瘤细胞株。采用Protein A亲和层析法纯化抗体腹水,SDS-PAG... 目的:制备鼠抗人F1-F0ATP合成酶beta亚基(hATP5B)单抗,并对其特异性和抗肿瘤活性进行研究。方法:以原核表达人hATP5B免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,筛选分泌抗hATP5B单抗的杂交瘤细胞株。采用Protein A亲和层析法纯化抗体腹水,SDS-PAGE检测纯化产物纯度。利用Western blot、细胞免疫荧光对其特异性进行鉴定,并通过抑制乳腺癌细胞MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr表面ATP生成,细胞毒性实验进行抗肿瘤活性研究。结果:获得一株稳定表达抗hATP5B单抗的杂交瘤细胞株Mab3B8,Western blot和细胞免疫荧光结果表明,该抗体与乳腺癌MCF-7及其耐药细胞MCF-7/Adr细胞天然抗原结合;可明显抑制MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr细胞膜表面ATP合成;与化疗药物多柔比星(曾用名:阿霉素)联合作用,可降低化疗药物多柔比星对肿瘤细胞的IC50。结论:成功建立了一株可特异性识别天然hATP5B的单抗,有阻断肿瘤细胞膜表面ATP合成活性并可明显增强MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr细胞对多柔比星敏感性的作用。此项研究对膜表达F1-F0ATP合成酶功能探讨及肿瘤治疗研究都具有重要意义。 展开更多

关键词 F1-F0ATP合成酶beta亚基 单克隆抗体 多柔比星 肿瘤耐药

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重组色氨酸合成酶催化合成L-5-羟基色氨酸 被引量：3

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作者 徐礼生 高贵珍 +4 位作者 曹稳根 赵亮 张兴桃 焦庆才 鲍妮娜 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第1期47-51,68,共6页

利用重组色氨酸合成酶催化合成L-5-羟基色氨酸,采用单因素以及响应面分析方法考察了p H、反应温度、底物浓度和底物摩尔比对L-5-羟基色氨酸合成的影响。最佳转化条件为:反应温度为32℃,p H=8.6,5-羟基吲哚与工业角蛋白水解氨基酸液中L-... 利用重组色氨酸合成酶催化合成L-5-羟基色氨酸,采用单因素以及响应面分析方法考察了p H、反应温度、底物浓度和底物摩尔比对L-5-羟基色氨酸合成的影响。最佳转化条件为:反应温度为32℃,p H=8.6,5-羟基吲哚与工业角蛋白水解氨基酸液中L-丝氨酸的适宜底物摩尔比为1.1∶1,底物工业角蛋白水解氨基酸液中L-丝氨酸最适合浓度为180 mmol/L,反应平衡时间为18 h,工业角蛋白水解氨基酸液中L-丝氨酸摩尔转化率达到86.5%。 展开更多

关键词 色氨酸合成酶 5-羟基色氨酸 L-丝氨酸 5-羟基吲哚 生物工程

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水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成2-甲基-L-色氨酸 被引量：2

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作者 徐礼生 高贵珍 +5 位作者 曹稳根 赵亮 张兴桃 焦庆才 陈军 宋曼 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期547-552,共6页

本文作者研究了水/有机溶剂双相体系中利用色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和2-甲基吲哚合成2-甲基-L-色氨酸,考察了有机溶剂、有机溶剂体积分数、p H、反应温度、表面活性剂、金属离子和底物浓度对色氨酸合成酶催化合成2-甲基-L-色氨酸的影... 本文作者研究了水/有机溶剂双相体系中利用色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和2-甲基吲哚合成2-甲基-L-色氨酸,考察了有机溶剂、有机溶剂体积分数、p H、反应温度、表面活性剂、金属离子和底物浓度对色氨酸合成酶催化合成2-甲基-L-色氨酸的影响。有机溶剂包括二甲苯、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯和辛醇,表面活性剂包括吐温80、聚乙二醇辛基苯基醚(OP)、CTAB和Trion X-100,金属离子包括Mg2+、Ca2+、Cu2+、Co2+和Zn2+。结果表明,酶法最佳转化条件为:有机相溶剂为甲苯,甲苯体积分数为2%,反应温度为40℃,水相p H为8,底物L-丝氨酸浓度为150mmol/L,表面活性剂Trion X-100质量分数为2%,金属离子Ca2+浓度为0.1 mmol/L,色氨酸合成酶酶促反应5 h,2-甲基-L-色氨酸的质量浓度为21.17 g/L。重组大肠杆菌DM206可作为2-甲基-L-色氨酸生产菌,具有较好的2-甲基-L-色氨酸生产潜力。 展开更多

关键词 色氨酸合成酶 2-甲基-L-色氨酸 L-丝氨酸 2-甲基吲哚

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淡色库蚊ATP合酶B亚基基因克隆和序列分析及其与溴氰菊酯抗性的关系 被引量：2

7

作者 王卫杰 刘新颖 +4 位作者 方福瑾 过琴 王贺 齐莉莉 赵文爱 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期900-905,共6页

【目的】克隆淡色库蚊Culex pipiens pallens ATP合酶B亚基基因编码区序列,并进行生物信息学分析,研究其与溴氰菊酯抗性关系。【方法】通过PCR方法扩增ATP合酶B亚基基因编码区序列;利用生物信息学网站在线分析工具,预测ATP合酶B亚基基... 【目的】克隆淡色库蚊Culex pipiens pallens ATP合酶B亚基基因编码区序列,并进行生物信息学分析,研究其与溴氰菊酯抗性关系。【方法】通过PCR方法扩增ATP合酶B亚基基因编码区序列;利用生物信息学网站在线分析工具,预测ATP合酶B亚基基因编码蛋白的理化性质和功能特征;通过实时定量PCR方法比较ATP合酶B亚基基因在室内筛选的淡色库蚊溴氰菊酯敏感品系和抗性品系中的表达,并在现场种群溴氰菊酯敏感和抗性个体中做进一步验证。【结果】成功克隆淡色库蚊ATP合酶B亚基基因编码区序列(Gen Bank登录号:KY783434),长717 bp,编码238个氨基酸。生物信息学分析表明,其编码蛋白理论相对分子量为26.96 k D,等电点为8.97,在第70-231位氨基酸具有ATP合酶B亚基结构域,未发现信号肽和跨膜区。实时定量PCR结果显示,ATP合酶B亚基基因在室内筛选的淡色库蚊抗溴氰菊酯品系和现场种群溴氰菊酯抗性个体中表达量均上调。【结论】本研究获得了淡色库蚊ATP合酶B亚基基因编码区序列,进行了生物信息学分析,并证实其在溴氰菊酯抗性个体中高表达,为进一步研究该基因在蚊抗药性中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 淡色库蚊 ATP合酶B亚基 抗药性 溴氰菊酯 生物信息学

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鸭疫里默氏杆菌ATP合成酶F1亚单位α亚基的部分生物学特性研究 被引量：2

8

作者 邢林林 卢凤英 +8 位作者 愈慧 祁晶晶 姜盼 孙冰清 崔俊生 欧长灿 于圣青 常维山 胡青海 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期266-269,共4页

为筛选和鉴定鸭疫里默氏杆菌(RA)的感染相关蛋白,本研究采用血清1型RA CH3株活菌和灭活菌体免疫鸭的阳性血清分别与血清2型Th4株的全菌蛋白进行交叉免疫蛋白质组学分析,结果表明ATP合成酶F1亚单位α亚基(ATP-F1-α)、Gro EL蛋白和TPR re... 为筛选和鉴定鸭疫里默氏杆菌(RA)的感染相关蛋白,本研究采用血清1型RA CH3株活菌和灭活菌体免疫鸭的阳性血清分别与血清2型Th4株的全菌蛋白进行交叉免疫蛋白质组学分析,结果表明ATP合成酶F1亚单位α亚基(ATP-F1-α)、Gro EL蛋白和TPR repeat-containing protein等的抗体仅存在于活菌免疫鸭的血清中,推测其可能为感染相关的交叉性抗原;而Tbd R1的抗体在活菌和灭活菌免疫鸭的血清中均存在。利用自杀质粒同源重组的方法构建了ATP-F1-α的基因缺失株,并将其与野生株CH3的生长曲线进行比较。结果表明,缺失株菌体形态与野生株相似,但其在TSB培养基中的生长几乎停滞。以上结果表明RA ATP-F1-α既是一种交叉抗原,又与细菌的生长相关。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 免疫蛋白质组学 ATP合成酶F1亚单位α亚基 交叉抗原 缺失

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槐定碱对骨癌痛大鼠脊髓NR2B mRNA和nNOS mRNA表达的影响 被引量：7

9

作者 严继贵 王迎新 +1 位作者 杨宇清 王雅洁 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1142-1146,共5页

目的观察槐定碱对骨癌痛大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚型NR2B mRNA和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)mRNA表达的影响,探讨其抗癌痛的作用机制。方法将W256癌细胞注入40只SD雌性大鼠骨髓腔复制骨癌痛模型后随机分为槐定碱治疗组(... 目的观察槐定碱对骨癌痛大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚型NR2B mRNA和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)mRNA表达的影响,探讨其抗癌痛的作用机制。方法将W256癌细胞注入40只SD雌性大鼠骨髓腔复制骨癌痛模型后随机分为槐定碱治疗组(腹腔注射槐定碱25 mg/kg)及模型对照组,另取10只大鼠骨髓腔注入生理盐水,治疗前后分别测量大鼠热痛阈和机械痛阈;采用逆转录PCR(RT-PCR)检测大鼠脊髓NR2B mRNA和nNOS mRNA的表达。结果槐定碱能够明显提高W256癌细胞诱导的骨癌痛大鼠热痛阈和机械痛阈,明显下调骨癌痛大鼠脊髓组织NR2B mRNA和nNOS mRNA的表达。结论槐定碱抗骨癌痛作用可能与下调脊髓与痛觉过敏密切相关的NMDAR-nNOS/NO-cGMP信号转导通路有关。 展开更多

关键词 槐定碱 骨癌痛 N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基 神经元型一氧化氮合酶

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棉花3种抗逆相关基因对苗蚜为害的应答反应 被引量：3

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作者 张帅 崔金杰 +2 位作者 吕丽敏 王春义 雒珺瑜 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期215-221,共7页

使用荧光定量PCR方法,分析了中棉所41、中棉所44、中棉所49和中棉所79等4种不同遗传背景的棉花品种在受到苗蚜为害时,编码类受体蛋白激酶(LRR-RLK)、ATP合酶β亚基(Atpβ)和捕光蛋白复合物Ⅱ(Lhcb2)等3种代谢相关基因的变化情况。在4种... 使用荧光定量PCR方法,分析了中棉所41、中棉所44、中棉所49和中棉所79等4种不同遗传背景的棉花品种在受到苗蚜为害时,编码类受体蛋白激酶(LRR-RLK)、ATP合酶β亚基(Atpβ)和捕光蛋白复合物Ⅱ(Lhcb2)等3种代谢相关基因的变化情况。在4种棉花品种中,LRR-RLK的表达量变化情况差异较大,该类LRR-RLK的表达量变化与蚜虫的为害有关;Lhcb2基因在中棉所41的子叶和真叶中、中棉所49的真叶中、中棉所44和中棉所79的子叶中对棉蚜的为害应答比较强烈;Atpβ基因在中棉所41和中棉所49真叶中、中棉所44子叶和真叶中应答反应比较强烈,在中棉所79中应答反应较弱。以上试验结果暗示不同的棉花品种应对苗蚜为害可能存在不同的代谢途径。 展开更多

关键词 棉花 苗蚜 代谢相关基因 ATP合酶β亚基(Atpβ) 捕光蛋白复合物Ⅱ 表达量

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谷氨酸棒杆菌3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶基因的克隆与过量表达 被引量：1

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作者 王玉华 于含松 +2 位作者 刘加欢 刘回民 胡耀辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第5期162-165,共4页

本实验对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)AS10111及其亚硝基胍诱变获得的丙氨酸和酪氨酸双营养缺陷型、抗3-甲基色氨酸突变菌株JLC1中3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶(DS)基因进行克隆和序列分析,将突变体来源DS基因构... 本实验对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)AS10111及其亚硝基胍诱变获得的丙氨酸和酪氨酸双营养缺陷型、抗3-甲基色氨酸突变菌株JLC1中3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶(DS)基因进行克隆和序列分析,将突变体来源DS基因构建pZ8-1-DSM重组质粒,在谷氨酸棒杆菌突变株JLC1中进行表达,重组菌株JLC1(pZ8-1-DSM)DS酶活力分别是宿主菌和野生型菌株DS酶活力的5.9和7.3倍,色氨酸产量达到14.90g/L,较宿主菌提高了65%。这表明通过在谷氨酸棒杆菌中过量表达3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶基因可以有效提高该酶活力和色氨酸的产量。 展开更多

关键词 谷氨酸棒杆菌 L-色氨酸3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶 过量表达

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棉蚜ATP合成酶基因AgoATPb的克隆与表达 被引量：1

12

作者 杨卫军 董艳蕾 +3 位作者 吴秋芳 张美玲 韩丽滨 张元臣 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第2期329-336,共8页

为确定棉蚜(Aphis gossypii)ATP合成酶B亚基基因在棉蚜不同组织和日龄,以及取食不同植物的表达情况,以棉蚜为研究对象,采用RT-PCR和RACE技术获得AgoATPb的全长cDNA序列,通过Expasy、SignalP-4.0 Server等在线工具对其进行了生物信息学分... 为确定棉蚜(Aphis gossypii)ATP合成酶B亚基基因在棉蚜不同组织和日龄,以及取食不同植物的表达情况,以棉蚜为研究对象,采用RT-PCR和RACE技术获得AgoATPb的全长cDNA序列,通过Expasy、SignalP-4.0 Server等在线工具对其进行了生物信息学分析,同时利用实时荧光定量PCR技术研究了该基因在棉蚜不同组织和不同日龄,以及在不同植物上取食的表达水平。结果表明,棉蚜AgoATPb基因全长cDNA序列为1247 bp,开放阅读框(ORF)长度为822 bp,编码274个氨基酸,5′端非编码区长128 bp,3′端非编码区长297 bp,理论分子量为31.40 ku,等电点为8.95,无信号肽和跨膜区域。氨基酸序列比对结果表明,棉蚜AgoATPb与其他昆虫同源基因编码蛋白的氨基酸序列一致性为47%~99%。除了不在胚胎表达外,AgoATPb基因在棉蚜其他日龄和不同组织均有表达,且在不同日龄间与不同组织表达水平存在显著差异。取食不同植物后棉蚜AgoATPb基因表达水平存在显著差异,取食棉花表达水平最高,其次是黄瓜和西葫芦,取食甜瓜表达水平最低,推测该基因可能与棉蚜适应寄主植物有关。 展开更多

关键词 棉蚜 ATP合成酶B亚基 生物信息学 基因克隆 寄主

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色氨酸合成酶酶法合成S-苯基-L-半胱氨酸

13

作者 徐礼生 高贵珍 +4 位作者 曹稳根 徐基贵 赵亮 史宏伟 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期707-710,共4页

利用重组色氨酸合成酶催化合成S-苯基-L-半胱氨酸,考察了反应温度、pH、底物摩尔比和底物浓度对色氨酸合成酶酶活的影响。最佳转化条件为:反应温度为37℃,pH=8,苯硫酚与L-丝氨酸的适宜底物摩尔比为1.2∶1,底物最适合浓度为400 mmol/L,... 利用重组色氨酸合成酶催化合成S-苯基-L-半胱氨酸,考察了反应温度、pH、底物摩尔比和底物浓度对色氨酸合成酶酶活的影响。最佳转化条件为:反应温度为37℃,pH=8,苯硫酚与L-丝氨酸的适宜底物摩尔比为1.2∶1,底物最适合浓度为400 mmol/L,反应达到平衡时间为16 h,底物L-丝氨酸摩尔转化率达到91%,苯硫酚与色氨酸合成酶活性位点Ser 235和Gly 233形成稳定的氢键。 展开更多

关键词 色氨酸合成酶 S-苯基-L-半胱氨酸 L-丝氨酸 苯硫酚 生物工程

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酿酒酵母ATP合酶δ亚基融合蛋白的构建、表达及生物学功能分析

14

作者 于立权 闫智慧 蒋伶活 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期99-103,共5页

利用分子克隆手段构建了酿酒酵母ATP合酶δ亚基和流感病毒血凝素(haemagglutinin,HA)标签融合蛋白的表达质粒。该融合蛋白在酿酒酵母细胞中能够正常表达,而且能够互补编码δ亚基的ATP16基因缺失株在利用非发酵性碳源方面的表型缺陷,表... 利用分子克隆手段构建了酿酒酵母ATP合酶δ亚基和流感病毒血凝素(haemagglutinin,HA)标签融合蛋白的表达质粒。该融合蛋白在酿酒酵母细胞中能够正常表达,而且能够互补编码δ亚基的ATP16基因缺失株在利用非发酵性碳源方面的表型缺陷,表明该融合蛋白具有野生型δ亚基的功能。同时,构建了在大肠杆菌细胞中表达该δ亚基的ScAtp16p-His6融合蛋白,并用纯化的融合蛋白在家兔中制备了其多抗血清。结果表明此多抗可以很好地与ScAtp16p-His6和HA-ScAtp16p两种融合蛋白特异性结合。这些研究材料的获得为深入研究ATP合酶的解偶联机制和磷酸化调控机理奠定了基础。 展开更多

关键词 酿酒酵母F1F0-ATP合酶δ亚基 融合蛋白 功能分析

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长柄链格孢四个二甲酰亚胺类杀菌剂胁迫差异表达基因的克隆与序列分析

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作者 罗义勇 刘卫红 +3 位作者 柳陈坚 毕薇 张克勤 杨金奎 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期213-222,共10页

为了阐明烟草赤星病病原真菌长柄链格孢Alternaria longipes对二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)抗性的分子机理,前期克隆了16个DCFs胁迫差异表达基因的部分cDNA片段。为了利用基因敲除技术进一步分析这些差异表达基因的功能,本研究选取4个差异... 为了阐明烟草赤星病病原真菌长柄链格孢Alternaria longipes对二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)抗性的分子机理,前期克隆了16个DCFs胁迫差异表达基因的部分cDNA片段。为了利用基因敲除技术进一步分析这些差异表达基因的功能,本研究选取4个差异表达基因,即AlATP7、AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88,应用DNA walking技术对它们两侧的未知序列进行克隆。DNA测序和Blast搜索表明,AlATP7基因开放阅读框为712 bp,含4个外显子和3个内含子,编码169个氨基酸;AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88基因未克隆到全长序列,5′末端还有200-300 bp才到达翻译起始密码子ATG;在这些DNA序列中,AlCIT1基因长1 214 bp,含1个内含子,编码386个氨基酸;AlGLUT基因长1 308 bp,含1个内含子,编码417个氨基酸;AlHSP88基因长2 087bp,含2个内含子,编码628个氨基酸。与其他丝状真菌的氨基酸序列同源性比对发现,AlATP7和线粒体ATP合酶D亚基、Al-CIT1和柠檬酸合成酶、AlGLUT和主要易化子超家族(MFS)类型葡萄糖转运子、AlHSP88和热休克蛋白HSP88分别具有很高的同源性。同时,还对4个DCFs胁迫差异表达基因的系统发育进行分析。基于这些蛋白功能的文献报道和前期的研究,推测A.longipes存在着一种新的DCFs抗性机制:A.longipes利用MFS类型葡萄糖转运子将DCFs排除到细胞外解毒,线粒体ATP合酶和柠檬酸合成酶参与能量供给,而热休克蛋白AlHSP88可能在该机制中促进一些重要蛋白的正确折叠和修复过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 长柄链格孢 线粒体 ATP合酶D亚基 柠檬酸合成酶 主要易化子超家族类型葡萄糖转运子 热休克蛋白HSP88

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植物中邻氨基苯甲酸合成酶的研究进展 被引量：8

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作者 钱旭 于可济 +3 位作者 袁冠绅 杨航宇 潘秋红 朱保庆 《热带生物学报》 2015年第4期504-511,共8页

综述了邻氨基苯甲酸合成酶(anthranilate synthase,AS)的相关代谢途径,ASα和β亚基的特性,AS基因的调控机理以及AS在提高植物营养品质等方面的相关研究进展,并对AS的研究前景进行了展望。

关键词 邻氨基苯甲酸合成酶 色氨酸 调控 应用

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RNAi法分析香菇色氨酸合酶基因的功能 被引量：3

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作者 王晨 罗义 +4 位作者 王刚正 徐瑞平 周雁 龚钰华 边银丙 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期1-8,共8页

色氨酸合酶(tryptophan synthase,TrpB)是生物体内一种重要的功能蛋白,在生物抗逆应激反应过程中发挥着重要的调控作用。本研究以香菇(Lentinula edodes)耐热栽培菌株S606为实验材料,采用双向启动子(Leactin和Legpd)启动LetrpB蛋白β亚... 色氨酸合酶(tryptophan synthase,TrpB)是生物体内一种重要的功能蛋白,在生物抗逆应激反应过程中发挥着重要的调控作用。本研究以香菇(Lentinula edodes)耐热栽培菌株S606为实验材料,采用双向启动子(Leactin和Legpd)启动LetrpB蛋白β亚基功能结构域的反向互补片段(400 bp),构建了LetrpB基因的RNAi载体,利用农杆菌介导法将该载体转入香菇菌丝中,在潮霉素培养基上筛选转化子,再通过PCR检测片段是否插入,获得了稳定的阳性转化子。实时荧光定量PCR结果显示,与野生型菌株相比,转化子的LetrpB基因表达量显著下调,转化子LeALDH、LeamiE等基因的表达量也显著下调,而LeYuccA的表达量显著上调。40℃高温处理24 h后,野生型S606的菌丝体在25℃条件下可以恢复生长,而RNAi转化子的菌丝体则不能恢复生长。研究结果表明,香菇菌株S606的LetrpB基因参与了热胁迫应激反应。 展开更多

关键词 香菇 色氨酸合酶 RNAI 耐热性

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菘蓝色氨酸合成酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量：2

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作者 杨树 潘淑琴 +2 位作者 张丽红 王喆之 李焘 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期66-70,共5页

对菘蓝色氨酸合成酶基因IiTSA进行克隆,并对其进行生物信息学分析.结果表明:菘蓝IiTSA基因全长2 111bp,包含8个外显子和7个内含子;cDNA全长1 035bp,编码311个氨基酸,编码的蛋白定位在叶绿体基质中,是一种无信号肽和跨膜结构域的疏水性蛋... 对菘蓝色氨酸合成酶基因IiTSA进行克隆,并对其进行生物信息学分析.结果表明:菘蓝IiTSA基因全长2 111bp,包含8个外显子和7个内含子;cDNA全长1 035bp,编码311个氨基酸,编码的蛋白定位在叶绿体基质中,是一种无信号肽和跨膜结构域的疏水性蛋白;二级结构主要由α-螺旋、β-转角、延伸链和不规则卷曲组成;序列比对结果显示,菘蓝IiTSA核酸序列和氨基酸序列与其他多种植物的TSA核酸序列和氨基酸序列均具有较高的同源性. 展开更多

关键词 菘蓝 靛蓝 色氨酸合成酶 生物信息学

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基于7-异戊二烯色氨酸合成酶催化合成C-7异戊烯化的吲哚二酮哌嗪生物碱 被引量：1

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作者 刘瑞 张弘弛 +1 位作者 李慧 周凤 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期413-421,共9页

以L-色氨酸系的二酮哌嗪为底物,7-异戊二烯色氨酸合成酶催化合成异戊烯化的吲哚二酮哌嗪;采用分子对接方法分析底物与酶的亲和关系;采用MTT法测定合成的异戊烯化吲哚二酮哌嗪对3种肿瘤细胞的抑制活性;单因素法优化活性最高的异戊烯化吲... 以L-色氨酸系的二酮哌嗪为底物,7-异戊二烯色氨酸合成酶催化合成异戊烯化的吲哚二酮哌嗪;采用分子对接方法分析底物与酶的亲和关系;采用MTT法测定合成的异戊烯化吲哚二酮哌嗪对3种肿瘤细胞的抑制活性;单因素法优化活性最高的异戊烯化吲哚二酮哌嗪的酶催化条件。结果表明,催化合成7个C-7异戊烯化的吲哚二酮哌嗪生物碱,分子对接结果验证酶催化效率;体外抗肿瘤活性筛选出cyclo-L-7-dimethylallyl-Trp-L-Pro的活性最高,其最佳酶催化条件为:反应时间18 h,温度为35℃,pH为8.0(Tris-HCl缓冲液),添加5 mmol·L^(-1)的MgCl_(2)。 展开更多

关键词 吲哚二酮哌嗪 7-异戊二烯色氨酸合成酶 分子对接 抗肿瘤活性

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色氨酸合成酶基因工程菌合成S-甲基-L-半胱氨酸 被引量：1

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作者 徐礼生 高贵珍 +5 位作者 曹稳根 赵亮 张兴桃 焦庆才 鲍妮娜 宋曼 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期655-660,共6页

通过密码子优化设计构建色氨酸合成酶基因工程菌,单因素以及响应面法研究色氨酸合成酶基因工程菌制备S-甲基-L-半胱氨酸。结果表明,温度39℃、pH 8.5、L-丝氨酸浓度360mmol/L,反应平衡时间20 h,S-甲基-L-半胱氨酸的质量浓度为40.49 g/L。

关键词 色氨酸合成酶 S-甲基-L-半胱氨酸 L-丝氨酸 甲硫醇

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