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Eu-TRFM免疫层析试纸条检测大肠杆菌O157:H7方法的建立
1
作者 冯昭仪 吴娅芳 +4 位作者 王英林 赵思远 程家洛 郭旭东 刘箐 《食品与生物技术学报》 北大核心 2025年第2期163-172,共10页
【目的】建立一种快速、高效且灵敏的大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)O157:H7检测方法。【方法】运用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)介导法,以时间分辨荧光微球为标记物与抗体进行偶联,使用荧光读取仪定量分析检测大肠... 【目的】建立一种快速、高效且灵敏的大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)O157:H7检测方法。【方法】运用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)介导法,以时间分辨荧光微球为标记物与抗体进行偶联,使用荧光读取仪定量分析检测大肠杆菌O157:H7。通过对缓冲液的标记pH、时间分辨荧光微球探针添加量、T线抗体质量浓度以及样本与标记抗体的孵育时间进行优化来提高检测灵敏度。【结果】在最优条件下,大肠杆菌O157:H7的检测灵敏度可达3.2×10^(3)CFU/mL,比传统胶体金免疫层析方法提高了10~1000倍,并且与其他8株常见的食源性致病菌不存在交叉反应。另外,该方法在人工污染的饮用水、牛奶和牛肉实际样品检测中均表现出良好的检测性能。【结论】该Eu-TRFM免疫层析试纸条适用于大肠杆菌O157:H7的检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 时间分辨荧光微球 免疫层析试纸条 检测
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猪流行性腹泻病毒荧光微球免疫层析抗原检测方法的建立
2
作者 李慧敏 雷铭楷 +3 位作者 阮胜男 李盼盼 李文涛 何启盖 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4572-4580,共9页
本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双... 本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双抗体夹心法,结合荧光微球免疫层析技术,以时间分辨荧光微球(time-resolved fluorescence nanoparticles,TRFNPs)标记PEDV鼠源多克隆抗体制备荧光探针,以PEDV N蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体分别作检测线(T线)和质控线(C线),组装成荧光微球免疫层析抗原检测试纸条。分别通过检测梯度稀释的培养PEDV病毒液、常见猪病病毒、模拟粪便样品和临床病料验证该方法的敏感度、特异性和临床适用性。结果显示:本方法灵敏度高,最低检测限达103.1 TCID50·mL^(-1),较商品化胶体金试纸条检测灵敏性提高至少10倍。且试纸条T/C值与病毒滴度呈现良好线性关系,可用于PEDV的定量检测。本方法操作简单、耗时短,检测时间为15 min。方法学验证显示,试纸条检测TGEV、PoRV、PDCoV、PRRSV、CSFV、ASFV时不发生交叉反应,特异性良好。试纸条的批内、批间变异系数均小于10%,重复性良好。50份临床样品的检测结果与国标RT-PCR方法总体符合率为96%,方法一致性高。本研究成功建立了基于TRFNPs的PEDV荧光微球免疫层析抗原检测方法,为临床中PEDV的快速检测提供了工具。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 时间分辨荧光微球 免疫层析法 定量检测
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利用时间分辨荧光免疫层析法同时定量检测玉米中的伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3) 被引量：2
3
作者 张佳林 马立才 +3 位作者 侯璐 孟和那仁 温凯 侯晓林 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第13期265-271,共7页
建立了一种可同时定量检测玉米中伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3)的时间分辨荧光免疫层析方法。利用活化酯法制备时间分辨荧光微球和伏马毒素抗体的偶联物,将伏马毒素抗原包被到硝酸纤维素膜上作为T线,通过优化不同T线包被条数,最终建立伏... 建立了一种可同时定量检测玉米中伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3)的时间分辨荧光免疫层析方法。利用活化酯法制备时间分辨荧光微球和伏马毒素抗体的偶联物,将伏马毒素抗原包被到硝酸纤维素膜上作为T线,通过优化不同T线包被条数,最终建立伏马毒素竞争性免疫层析方法。并对所建立方法的灵敏度、特异性、准确度、精密度和与国标方法分析结果的相关性进行评价。包被两条T线建立的检测方法检出限为107.68~168.28μg/kg,定量限为283.46~444.63μg/kg;与伏马毒素B_(1)、伏马毒素B_(2)和伏马毒素B_(3)的交叉反应率分别为100%、85.59%和72.72%,与其它5种常见的真菌毒素均无明显交叉;加标回收率范围88.37%~117.42%,变异系数小于10%;该方法与国标方法GB 5009.240-2016中规定的免疫亲和柱净化-高效液相色谱法(IAC-HPLC)检测结果的符合度在92.17%~107.21%之间。建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法能满足对玉米中伏马毒素B_(1)、B_(2)和B_(3)的现场快速定量检测。 展开更多
关键词 时间分辨荧光微球 伏马毒素B_(1) 伏马毒素B_(2) 伏马毒素B_(3) 玉米 定量检测
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时间分辨荧光免疫层析定量检测牦牛肉中喹诺酮类药物 被引量：13
4
作者 赵维章 崔乃元 +4 位作者 张汉青 贺敏华 张正英 王云平 马立才 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第18期239-243,251,共6页
目的:本研究旨在建立一种简单、快速、高灵敏的牦牛肉中喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、达氟沙星等)残留的荧光定量免疫层析检测方法。方法:将环丙沙星鼠单克隆抗体G10785与羧基化铕微球进行偶联标记,环丙沙星... 目的:本研究旨在建立一种简单、快速、高灵敏的牦牛肉中喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、达氟沙星等)残留的荧光定量免疫层析检测方法。方法:将环丙沙星鼠单克隆抗体G10785与羧基化铕微球进行偶联标记,环丙沙星抗原和羊抗鼠二抗分别包被于硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T)和控制线(C);根据T线荧光信号值与C线荧光信号值的比值(T/C)和样本中喹诺酮类药物浓度建立定量标准曲线;对所建立方法的灵敏度、准确度、精密度等进行评价,并将其与LC-MS/MS方法进行对比。结果:本研究所建立方法的定量限<0.96μg/kg,批内回收率为82.94%~111.27%,变异系数为4.13%~9.90%,批间回收率为88.86%~107.05%,变异系数为3.86%~9.39%。与环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、达氟沙星的交叉反应率分别为100%、77.36%、107.66%、93.55%和50.92%。结论:本研究所建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法准确度、精密度、灵敏度较高,性能稳定,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 牦牛肉 喹诺酮类药物 时间分辨 荧光微球 食品安全
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呕吐毒素时间分辨荧光免疫层析法的建立与评价 被引量：6
5
作者 张东升 严艺琳 +3 位作者 熊晓辉 董曼佳 游京晶 张一平 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第20期233-239,共7页
构建并评价了呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)时间分辨荧光免疫层析法(TRFIA)。以Eu^(3+)螯合物的纳米微球为荧光探针标记抗DON单抗,采用竞争抑制建立免疫层析定量方法,优化了微球与抗体标记量,检测的环境温度、反应时间、加样体积及缓冲... 构建并评价了呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)时间分辨荧光免疫层析法(TRFIA)。以Eu^(3+)螯合物的纳米微球为荧光探针标记抗DON单抗,采用竞争抑制建立免疫层析定量方法,优化了微球与抗体标记量,检测的环境温度、反应时间、加样体积及缓冲体系;研究了方法的灵敏度、精密度及准确度。结果表明,每100μL荧光微球结合纯单抗50μg,最佳划膜浓度为1.0 mg/m L,最佳测定条件为室温(25±2)℃,10 min,加样体积100μL,PBS (0.01 mol/L,pH7.2)的缓冲体系,方法的灵敏度为0.25 ng/m L,线性范围为0.5~25.0 ng/m L,玉米、小麦阴性样本(加标浓度200、500、1000、2000μg/kg)平均加标回收率为91.4%~109.3%,6种典型样本经TRFIA与免疫亲和净化-高效液相色谱法(IAC-HPLC)同时测定DON含量,相关系数r达0.9754。TRFIA具有灵敏度高、速度快、定量准等技术特点,适用于谷物及制品中DON的快速定量。 展开更多
关键词 呕吐毒素 时间分辨荧光微球 免疫层析法 评价 检测
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基于纳米材料的免疫层析试纸在兽药残留检测中的应用 被引量：6
6
作者 杨娅林 陆彦蓉 +2 位作者 殷晓阳 李华明 彭大鹏 《中国兽药杂志》 2022年第10期60-68,共9页
兽药残留是食品安全的重要影响因素,开发兽药残留检测方法是保证食品安全的重要手段。免疫层析试纸是一种操作简单、生产成本低且具有良好灵敏度的检测方法,适用于现场检测、大规模食品筛选,在兽药残留检测中具有巨大的应用价值。纳米... 兽药残留是食品安全的重要影响因素,开发兽药残留检测方法是保证食品安全的重要手段。免疫层析试纸是一种操作简单、生产成本低且具有良好灵敏度的检测方法,适用于现场检测、大规模食品筛选,在兽药残留检测中具有巨大的应用价值。纳米材料可提供特殊的检测信号,是影响免疫层析试纸检测灵敏度和定量分析的关键因素。文章主要对胶体金、磁性纳米材料、量子点以及时间分辨荧光微球这几种纳米标记材料进行介绍,指出各自的优缺点及应用情况,并对该技术在兽药残留检测中的应用趋势进行展望。 展开更多
关键词 免疫层析试纸 兽药残留 胶体金 磁性纳米材料 量子点 时间分辨荧光微球
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水产品中氯霉素时间分辨荧光免疫层析定量检测方法 被引量：21
7
作者 崔乃元 赵义良 +1 位作者 马立才 李云 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第24期241-245,共5页
该研究旨在建立一种简单、快速、高灵敏的鱼、虾和蟹中氯霉素残留的荧光定量免疫层析检测方法,以满足水产品中氯霉素残留检测的需求。通过将氯霉素鼠单克隆抗体G375-5与羧基化铕微球进行偶联标记,氯霉素抗原和羊抗鼠二抗分别包被于硝酸... 该研究旨在建立一种简单、快速、高灵敏的鱼、虾和蟹中氯霉素残留的荧光定量免疫层析检测方法,以满足水产品中氯霉素残留检测的需求。通过将氯霉素鼠单克隆抗体G375-5与羧基化铕微球进行偶联标记,氯霉素抗原和羊抗鼠二抗分别包被于硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T)和控制线(C);根据T线信号值与C线信号值的比值(T/C)和样本中氯霉素浓度建立定量标准曲线;针对鱼、虾、蟹样品,对荧光免疫层析检测方法的灵敏度、准确度和精密度等进行评价,并将其在实际水产样品中与HPLC法进行结果对比。结果表明,该研究建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法对水产品中氯霉素的定量限为0.1μg/kg,添加回收率为73.5%~114.2%,变异系数3.9%~11.5%,与国标仪器方法检测结果的一致性较高。因此,该研究所建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法在水产品氯霉素的快速检测工作中具有较高的应用价值和应用前景。 展开更多
关键词 氯霉素 时间分辨 荧光微球 水产品 食品安全
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降钙素原时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立及性能评价 被引量：7
8
作者 黄德智 应昊俊 +1 位作者 刘飞 蒲晓允 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期581-586,共6页
目的建立一种时间分辨荧光免疫层析定量降钙素原(procalcitonin, PCT)的检测方法并评价其性能。方法利用双抗体夹心法原理,以时间分辨荧光的纳米微球作为标记示踪物,运用免疫层析技术建立PCT免疫检测方法,并对该方法进行线性、灵敏度、... 目的建立一种时间分辨荧光免疫层析定量降钙素原(procalcitonin, PCT)的检测方法并评价其性能。方法利用双抗体夹心法原理,以时间分辨荧光的纳米微球作为标记示踪物,运用免疫层析技术建立PCT免疫检测方法,并对该方法进行线性、灵敏度、精密度、特异性、相关性等性能指标的测定。结果本检测方法线性良好,线性范围为0.05～100 ng/mL,方程为Y=0.074 7X+0.524 6,R^2=0.990 4,灵敏度为0.03 ng/mL,批内精密度CV≤5.42%,批间精密度CV≤6.86%,与AE-180全自动化学发光免疫分析仪结果一致性较好,阳性符合率96.61%,阴性符合率94.44%,假阳性率5.56%,假阴性率3.39%和诊断符合率95.53%。结论本研究建立了PCT时间分辨免疫层析检测方法,该方法简便、经济、快速、并可以定量,各项性能参数均达到临床检测要求,可用于临床血清PCT浓度的检测。 展开更多
关键词 降钙素原 时间分辨荧光微球 免疫层析
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