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兔抗小鼠睾丸表达蛋白38(TEX38)多克隆抗体的制备与应用
被引量：
2
1
作者
杨玲
袁露
+5 位作者
杨凡
葛婷婷
徐文华
许林巍
牛长敏
郑英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期933-939,共7页
目的制备兔抗小鼠睾丸表达蛋白38(TEX38)的多克隆抗体。方法以小鼠TEX38真核表达质粒pCDNA3.1-TEX38为模板扩增出TEX38可读框全长序列,并将其与pET-30a(+)连接,构建pET-30a-TEX38原核表达质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌E.coli BL21中,...
目的制备兔抗小鼠睾丸表达蛋白38(TEX38)的多克隆抗体。方法以小鼠TEX38真核表达质粒pCDNA3.1-TEX38为模板扩增出TEX38可读框全长序列,并将其与pET-30a(+)连接,构建pET-30a-TEX38原核表达质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌E.coli BL21中,并采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达。将其纯化和复性后,作为抗原免疫新西兰大白兔,抽取血清获得TEX38多克隆抗体。用ELISA检测免疫后的血清效价,Western blot法和免疫荧光染色法分别鉴定多克隆抗体的特异性。结果成功构建了pET-30a-TEX38重组质粒,并成功表达和纯化了TEX38原核蛋白。免疫后,5只兔血清的抗体滴度均达到1∶1000000。通过Western blot法和免疫荧光染色验证,表明抗体特异性较好,TEX38主要定位于小鼠睾丸生精细胞和精子。结论成功制备了兔抗小鼠TEX38多克隆抗体,并确定TEX38可在小鼠睾丸生精细胞和精子表达。
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关键词
睾丸表达蛋白
38
(
tex38
)
多克隆抗体
精子发生
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题名
兔抗小鼠睾丸表达蛋白38(TEX38)多克隆抗体的制备与应用
被引量：
2
1
作者
杨玲
袁露
杨凡
葛婷婷
徐文华
许林巍
牛长敏
郑英
机构
扬州大学医学院妇产与生殖医学研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期933-939,共7页
基金
国家自然科学基金(82071696)。
文摘
目的制备兔抗小鼠睾丸表达蛋白38(TEX38)的多克隆抗体。方法以小鼠TEX38真核表达质粒pCDNA3.1-TEX38为模板扩增出TEX38可读框全长序列,并将其与pET-30a(+)连接,构建pET-30a-TEX38原核表达质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌E.coli BL21中,并采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达。将其纯化和复性后,作为抗原免疫新西兰大白兔,抽取血清获得TEX38多克隆抗体。用ELISA检测免疫后的血清效价,Western blot法和免疫荧光染色法分别鉴定多克隆抗体的特异性。结果成功构建了pET-30a-TEX38重组质粒,并成功表达和纯化了TEX38原核蛋白。免疫后,5只兔血清的抗体滴度均达到1∶1000000。通过Western blot法和免疫荧光染色验证,表明抗体特异性较好,TEX38主要定位于小鼠睾丸生精细胞和精子。结论成功制备了兔抗小鼠TEX38多克隆抗体,并确定TEX38可在小鼠睾丸生精细胞和精子表达。
关键词
睾丸表达蛋白
38
(
tex38
)
多克隆抗体
精子发生
Keywords
testis
expressed
38
(
tex38
)
polyclonal antibody
spermatogenesis
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
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被引量
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1
兔抗小鼠睾丸表达蛋白38(TEX38)多克隆抗体的制备与应用
杨玲
袁露
杨凡
葛婷婷
徐文华
许林巍
牛长敏
郑英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
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