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食品中副溶血性弧菌toxR和tdh基因双色荧光PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 曹冬梅 袁慕云 +1 位作者 许龙岩 曹际娟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2013年第5期1451-1457,共7页
目的建立对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)特异性检测toxR(跨膜转录激活蛋白)基因和tdh(热稳定性直接溶血素)毒力基因的Taqman探针双色荧光PCR检测方法。方法根据副溶血性弧菌toxR基因和tdh基因,分别设计引物和探针,建立Taqman... 目的建立对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)特异性检测toxR(跨膜转录激活蛋白)基因和tdh(热稳定性直接溶血素)毒力基因的Taqman探针双色荧光PCR检测方法。方法根据副溶血性弧菌toxR基因和tdh基因,分别设计引物和探针,建立Taqman探针双色荧光PCR扩增体系,进行特异性、灵敏度试验;对副溶血性弧菌分离菌株实施检测,了解其tdh基因和tdh基因分布情况。结果结果表明,副溶血性弧菌标准菌株和3株从食物中毒患者中分离获得的分离株均出现toxR基因和tdh扩增曲线,而溶藻弧菌、单增李斯特菌等31株弧菌属其他菌株和肠杆菌科的菌株未见扩增曲线。从食品中分离的37株副溶血性弧菌分离株均未携带tdh毒力基因。副溶血性弧菌检测灵敏度可达到3.6×102cfu/mL。结论该方法可用于同时检测食品中副溶血性弧菌的特异性和毒力基因。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 toxR基因 tdh基因 双色荧光PCR 检测
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TaqMan探针双重荧光PCR法检测副溶血性弧菌 被引量:12
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作者 许龙岩 袁慕云 +1 位作者 曹际娟 凌莉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第18期263-266,共4页
目的:建立同时检测副溶血性弧菌(VP)和其毒力基因的方法。方法:根据VP的toxR基因和tdh基因,分别设计引物和探针,建立基于TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应扩增体系,进行特异性、敏感性实验,并用建立的方法检测从广东地区和辽宁地区进... 目的:建立同时检测副溶血性弧菌(VP)和其毒力基因的方法。方法:根据VP的toxR基因和tdh基因,分别设计引物和探针,建立基于TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应扩增体系,进行特异性、敏感性实验,并用建立的方法检测从广东地区和辽宁地区进出口食品中分离的VP菌株的毒力基因分布情况。结果:VP标准菌株和3株从食物中毒病人中分离株均出现toxR基因和tdh基因扩增曲线,而31株包括溶藻弧菌、单增李斯特菌等弧菌属和肠杆菌科的菌株扩增结果呈阴性;敏感性实验结果表明,VP浓度与Ct值有很好的反向的线性关系,toxR和tdh线性方程的R2分别为0.999、0.997,最低检测浓度达到3.6×102CFU/mL;检测食品中分离的37株VP只出现toxR基因扩增曲线,未见tdh基因扩增曲线,表明37株VP分离株均未带tdh毒力基因。结论:建立的方法特异性好、灵敏度高,可用于食品中VP的特异性及毒力基因检测。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 toxR基因 tdh基因 TAQMAN探针 双重荧光聚合酶链式反应 检测 食品
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菌落PCR方法的建立及其与常规PCR方法的比较 被引量:15
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作者 徐丽 蔡俊鹏 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期51-55,共5页
为建立一种快速、经济、敏感的PCR检测方法 ,以直接检测出环境、海产品等中的靶基因 ,通过PCR扩增已知携带tlh和tdh基因的副溶血弧菌标准菌株 ,并和常规PCR方法比较 ,初步建立了菌落PCR技术 ;再以副溶血弧菌标准菌株为阳性对照 ,以本实... 为建立一种快速、经济、敏感的PCR检测方法 ,以直接检测出环境、海产品等中的靶基因 ,通过PCR扩增已知携带tlh和tdh基因的副溶血弧菌标准菌株 ,并和常规PCR方法比较 ,初步建立了菌落PCR技术 ;再以副溶血弧菌标准菌株为阳性对照 ,以本实验室自海洋环境中分离得到的数株野生菌株为检测对象 ,采用新建立的菌落PCR以及常规PCR方法对它们进行扩增比较 ,进一步证明了菌落PCR技术检测携带相关基因菌株的可靠性 .通过比较 ,发现菌落PCR和常规PCR的结果相当一致 。 展开更多
关键词 菌落PCR 常规PCR tdh基因 tlh基因
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致病性副溶血性弧菌特异性三重PCR检测方法研究
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作者 金雷 陈瑜 +1 位作者 张小军 施慧 《安徽农业科学》 CAS 2017年第14期132-133,140,共3页
[目的]建立同时检测致病性副溶血性弧菌gyrase、tdh、toxR基因的三重PCR快速检测方法。[方法]用3种基因的特异性引物分别对副溶血性弧菌ATCC33847的模板DNA进行单一扩增,找到各自引物最佳扩增条件;再用3种引物同步对模板DNA进行扩增,通... [目的]建立同时检测致病性副溶血性弧菌gyrase、tdh、toxR基因的三重PCR快速检测方法。[方法]用3种基因的特异性引物分别对副溶血性弧菌ATCC33847的模板DNA进行单一扩增,找到各自引物最佳扩增条件;再用3种引物同步对模板DNA进行扩增,通过优化引物浓度、引物间比例以及退火温度,建立最佳扩增体系。[结果]在最佳三重PCR反应条件下,gyrase、tdh和toxR能同时扩增出清晰条带,大小分别为91、269和368 bp。[结论]该研究为致病性副溶血性弧菌的快速检测提供了一种新的技术方法。 展开更多
关键词 致病性副溶血性弧菌 三重PCR gyrase基因 tdh基因 toxR基因
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