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艰难梭菌tcdA和tcdB基因绝对定量PCR方法的建立及应用
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作者 古文鹏 贾森泉 +5 位作者 周永明 尹建雯 赵世文 赵晓南 吴媛 伏晓庆 《中国抗生素杂志》 北大核心 2025年第2期137-143,共7页
目的建立基于SYBR染料法的能够精确定量艰难梭菌主要毒素tcdA和tcdB基因表达量的绝对定量PCR方法,并进行应用。方法以CD12038艰难梭菌参考菌株为研究对象,扩增tcdA和tcdB基因的部分片段,然后将二者克隆到pUC57质粒载体中进行测序鉴定。... 目的建立基于SYBR染料法的能够精确定量艰难梭菌主要毒素tcdA和tcdB基因表达量的绝对定量PCR方法,并进行应用。方法以CD12038艰难梭菌参考菌株为研究对象,扩增tcdA和tcdB基因的部分片段,然后将二者克隆到pUC57质粒载体中进行测序鉴定。采用梯度稀释的重组质粒为标准品,SYBR荧光染料法进行qPCR扩增,建立标准曲线。然后在4种主要的产毒性艰难梭菌流行参考菌株中验证菌株培养后tcdA和tcdB基因的拷贝数。结果本研究建立了能够精确定量产毒性艰难梭菌tcdA和tcdB基因拷贝数的绝对定量PCR方法,其中tcdA基因的线性范围为(2.71×10^(2)~2.71×10^(9))拷贝/μL,灵敏性为(324.70±33.42)拷贝/μL,批内变异系数(CV)为0.60%~1.12%,批间CV为0.57%~0.92%。tcdB基因的线性范围为(2.59×10^(2)~2.59×10^(9))拷贝/μL,灵敏性为(539.05±133.28)拷贝/μL,批内CV为0.37%~1.61%,批间CV为0.84%~1.76%。2个基因的溶解曲线均呈现单一峰值,特异性良好。对4种产毒性艰难梭菌参考菌株培养24 h后的tcdA和tcdB基因拷贝数研究结果显示,R20291(ST1/RT027)菌株的tcdA和tcdB基因表达水平最高,而其余3个菌株的表达水平较为相似。结论本研究建立了基于产毒性艰难梭菌tcdA和tcdB基因的绝对定量PCR方法,该方法具有线性范围广、灵敏性高、特异性和可重复性良好等特点,为后续艰难梭菌主要毒素基因的精确定量研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 艰难梭菌 tcda tcdB 绝对定量PCR
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中国艰难梭菌高分离株和欧洲流行高毒株tcdA、tcdB基因转录及其毒素的表达(英文)
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作者 李先平 李文革 +1 位作者 王晶 卢金星 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-6,共6页
目的研究和比较中国艰难梭菌A-B+高分离株BJ08和欧洲流行A+B+高毒株(BI/NAP1/027)UK1的tcdA、tcdB转录和毒素表达。方法每隔3h提取艰难梭菌和培养上清,用实时荧光定量PCR的方法测定各个时间段BJ08和UK1菌株tcdA、tcdB基因的表达;用ELIS... 目的研究和比较中国艰难梭菌A-B+高分离株BJ08和欧洲流行A+B+高毒株(BI/NAP1/027)UK1的tcdA、tcdB转录和毒素表达。方法每隔3h提取艰难梭菌和培养上清,用实时荧光定量PCR的方法测定各个时间段BJ08和UK1菌株tcdA、tcdB基因的表达;用ELISA的方法检测BJ08和UK1菌株各个时间段的细胞和培养上清液中A毒素、B毒素的含量。结果 BJ08的生长速率显著大于UK1;BJ08不表达A毒素,但是检测到tcdA基因的转录,tcdA基因表达量显著低于UK1;tcdB的表达以及B毒素在两种菌株的培养上清液中和声波处理的细胞内的差异都不大。结论中国艰难梭菌A-B+高分离株BJ08和欧洲流行A+B+高毒株UK1的B毒素的转录和表达没有明显差异,BJ08菌株在中国有爆发流行的可能。 展开更多
关键词 艰难梭菌 tcda tcdB
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基于新型宽带同轴的超短波双极化TCDA设计 被引量:1
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作者 周承冕 岳家璇 +2 位作者 肖科 丁亮 柴舜连 《电波科学学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期393-399,406,共8页
为解决在VHF和UHF频段内的紧耦合偶极子阵列(tightly coupled dipole array, TCDA)天线馈电网络设计困难、不利于工程化的问题,提出一款采用新型宽带同轴馈电的具有低剖面、双极化特点的TCDA天线设计方案.该天线采用双偶极子单元结构,... 为解决在VHF和UHF频段内的紧耦合偶极子阵列(tightly coupled dipole array, TCDA)天线馈电网络设计困难、不利于工程化的问题,提出一款采用新型宽带同轴馈电的具有低剖面、双极化特点的TCDA天线设计方案.该天线采用双偶极子单元结构,由二阶Wilkinson功分器和新型宽带同轴巴伦共同组成馈电网络,接地短路枝节抑制E面共模谐振,频率选择表面(frequency selective surface, FSS)层抑制H面扫描失配.通过ADS-HFSS联合进行高效的电磁仿真,结果表明,该TCDA在110~500 MHz内电压驻波比(voltage standing wave ratio, VSWR)典型值<2,±45°扫描角度VSWR典型值<2.5,剖面高度小于0.1λ_(l ow).该天线具有剖面低、易于全金属化的特点,为超短波频段TCDA的工程实际化提供了一种可靠的方法. 展开更多
关键词 超宽带天线 紧耦合偶极子阵列(tcda) 馈电技术 超短波 双极化
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呼和浩特地区腹泻患者艰难梭菌检测方法比较、临床分离株的毒素特征及药物敏感性分析 被引量:7
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作者 郭素芳 王俊瑞 +3 位作者 王艳艳 申慧敏 吕莹莹 韩艳秋 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2020年第12期1288-1292,共5页
目的了解呼和浩特地区艰难梭菌腹泻患者临床分离株的毒素特征及艰难梭菌药物敏感性,为艰难梭菌治疗和防控提供参考数据。方法收集2018年7月至2019年6月间本院疑似艰难梭菌感染的252例腹泻患者的粪便标本。同一样本分别检测:粪便艰难梭... 目的了解呼和浩特地区艰难梭菌腹泻患者临床分离株的毒素特征及艰难梭菌药物敏感性,为艰难梭菌治疗和防控提供参考数据。方法收集2018年7月至2019年6月间本院疑似艰难梭菌感染的252例腹泻患者的粪便标本。同一样本分别检测:粪便艰难梭菌培养和鉴定、VIDAS酶联荧光法粪便直接检测艰难梭菌毒素A/B(CDAB)和艰难梭菌谷氨酸脱氢酶(GDH)。培养获得的艰难梭菌进行PCR扩增毒素基因和二元毒素基因(tcdA、tcdB、cdtA、cdtB),以明确是否为产毒菌株;琼脂稀释法测定艰难梭菌对抗菌药物的敏感性。结果艰难梭菌毒素A/B(CDAB)阳性7例,灰区5例;谷氨酸脱氢酶(GDH)阳性39例;培养出艰难梭菌37株;PCR扩增毒素基因检测30株为产毒株,毒素基因tcdA(-)/tcdB(+)型3株,tcdA(+)/tcdB(+)型27株,二元毒素基因检测均为阴性;克林霉素、头孢西丁耐药率较高,分别为100%和97.3%,莫西沙星耐药率54.1%。万古霉素、甲硝唑无耐药株检出。结论 GDH法具有较好的灵敏性,可作为艰难梭菌感染的筛查;CDAB检测特异性较高,但敏感性较低;毒素基因检测有较高的敏感性和特异性,tcdA(+)/tcdB(+)型艰难梭菌为我院主要流行株;96.7%的临床感染患者为I级;克林霉素、莫西沙星耐药率较高,需限制使用;全部菌株对甲硝唑、万古霉素敏感,可以经验用药。 展开更多
关键词 艰难梭菌 厌氧培养法 毒素基因tcda/B 药敏试验
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一个面向对象软件自动测试框架的设计和实现 被引量:4
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作者 江曼 王天青 潘金贵 《计算机应用与软件》 CSCD 北大核心 2007年第3期69-71,共3页
介绍了一个测试用例驱动的面向对象软件自动化测试框架(TCDA)。TCDA使用UML作为形式化的分析和设计规格说明,从UML的体系结构视图中自动获取测试用例,并以XML的形式保存这些测试用例。TCDA可以根据具体编程语言,将测试用例翻译成由一系... 介绍了一个测试用例驱动的面向对象软件自动化测试框架(TCDA)。TCDA使用UML作为形式化的分析和设计规格说明,从UML的体系结构视图中自动获取测试用例,并以XML的形式保存这些测试用例。TCDA可以根据具体编程语言,将测试用例翻译成由一系列源文件组成的测试脚本。测试执行过程中,测试脚本首先会被编译和链接,生成可执行文件,接着这些可执行文件将被运行,同时测试结果将被记录和分析,并最终生成一个结果分析报告。TCDA的原型系统使用Java实现。该系统包括测试配置、测试用例生成、测试脚本生成、测试执行和结果分析五个模块,分别支持以上描述的过程。 展开更多
关键词 UML 测试用例 测试用例生成 tcda
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中国部分地区艰难梭菌PCR-核糖体分型及毒素基因多态性研究 被引量:10
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作者 王晶 李春辉 +6 位作者 杜鹏程 曹波 陈晨 卢金星 李中杰 余宏杰 程颖 《中国感染控制杂志》 CAS 2014年第1期1-7,共7页
目的了解中国部分地区艰难梭菌聚合酶链反应(PCR)-核糖体型别分布及其A、B毒素基因多态性,为建立适宜中国的艰难梭菌分子检测和分子分型技术提供基础数据,同时在基因水平上为艰难梭菌感染导致的复杂临床表现提供依据。方法对中国3个城市... 目的了解中国部分地区艰难梭菌聚合酶链反应(PCR)-核糖体型别分布及其A、B毒素基因多态性,为建立适宜中国的艰难梭菌分子检测和分子分型技术提供基础数据,同时在基因水平上为艰难梭菌感染导致的复杂临床表现提供依据。方法对中国3个城市(北京、广州、济南)分离的64株艰难梭菌临床株进行PCR-核糖体分型,并对不同型别的26株代表菌株的A、B毒素基因进行扩增测序。结果 64株艰难梭菌中,毒素基因型以A+B+型(45株,70.31%)为主,A-B+型19株(29.69%)。共存在9种PCR-核糖体型别,以017型(21株,32.81%)为主要型别,其次为001型(13株,20.31%)、012型(11株,17.19%)。A-B+菌株中,14株(73.68%)是017型,1株是001型。A、B毒素基因呈现一定的多态性,其中有7种A毒素序列型别(TSTA),6种B毒素序列型别(TSTB),8种A、B毒素序列型别组合(TSTG)。结论我国部分地区的艰难梭菌可能以PCR-核糖体017型为主,A、B毒素基因在菌株间存在多态性,且核糖体型别与毒素基因多态性间存在相对应的关联。应进一步扩大菌株数量和范围,探寻适合我国的分子检测和分子分型方法,从而帮助医院更好地预防和控制艰难梭菌感染。 展开更多
关键词 艰难梭菌 艰难梭状芽孢杆菌 假膜性肠炎 核糖体分型 A毒素基因 B毒素基因 抗生素相关腹泻 医院感染
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