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苦荞黄酮-3-羟化酶截短体的原核表达与多克隆抗体制备
被引量：
5
1
作者
李玉萍
邓丹丹
+2 位作者
张海纳
李学俊
陈鹏
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期672-677,共6页
为了制备苦荞黄酮-3-羟化酶的多克隆抗体,该研究以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得的苦荞黄酮-3-羟化酶基因截短体(truncated Flavanone-3-hydroxylase,TrF3 H)序列为基础,采用PCR扩增F3 H的截短序列编码区(TrF3 H),构建了原核表达载体pET...
为了制备苦荞黄酮-3-羟化酶的多克隆抗体,该研究以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得的苦荞黄酮-3-羟化酶基因截短体(truncated Flavanone-3-hydroxylase,TrF3 H)序列为基础,采用PCR扩增F3 H的截短序列编码区(TrF3 H),构建了原核表达载体pET47b-TrF3 H,并转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS中进行诱导表达,将经钴离子螯合层析柱纯化后的目的蛋白切胶回收后制备了高效价的多克隆抗体。结果表明:pET47b-TrF3 H在大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS中以包涵体的形式高效表达。蛋白质印迹显示,制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原,天然的黄酮-3-羟化酶蛋白在苦荞的未成熟种子中大量表达。原核表达体系的建立和多克隆抗体的制备为进一步探讨F3H在苦荞中功能奠定了基础。
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关键词
苦荞
黄酮-
3
-羟化酶
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
苦荞黄酮-3-羟化酶截短体的原核表达与多克隆抗体制备
被引量：
5
1
作者
李玉萍
邓丹丹
张海纳
李学俊
陈鹏
机构
西北农林科技大学生命科学学院
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期672-677,共6页
基金
国家自然科学基金(30400282
31171606)
西北农林科技大学基本科研业务费专项(QN2009064)
文摘
为了制备苦荞黄酮-3-羟化酶的多克隆抗体,该研究以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得的苦荞黄酮-3-羟化酶基因截短体(truncated Flavanone-3-hydroxylase,TrF3 H)序列为基础,采用PCR扩增F3 H的截短序列编码区(TrF3 H),构建了原核表达载体pET47b-TrF3 H,并转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS中进行诱导表达,将经钴离子螯合层析柱纯化后的目的蛋白切胶回收后制备了高效价的多克隆抗体。结果表明:pET47b-TrF3 H在大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS中以包涵体的形式高效表达。蛋白质印迹显示,制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原,天然的黄酮-3-羟化酶蛋白在苦荞的未成熟种子中大量表达。原核表达体系的建立和多克隆抗体的制备为进一步探讨F3H在苦荞中功能奠定了基础。
关键词
苦荞
黄酮-
3
-羟化酶
原核表达
多克隆抗体
Keywords
tartary buckwheat flavanone-3-hydroxylase prokaryotic expression polyclonal antibody
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
苦荞黄酮-3-羟化酶截短体的原核表达与多克隆抗体制备
李玉萍
邓丹丹
张海纳
李学俊
陈鹏
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
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