中国葡萄属野生种抗白粉病抗逆基因植物表达载体的构建 被引量：8

1

作者 徐伟荣 王跃进 +2 位作者 王西平 郝炜 孙马 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期851-857,共7页

将质粒pSB166中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体pWR306;以中国野生葡萄华东葡萄白河35-1cDNA为模板,通过PCR扩增出葡萄芪合成酶基因(STS)、醛脱氢酶基因(ALDH),与... 将质粒pSB166中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体pWR306;以中国野生葡萄华东葡萄白河35-1cDNA为模板,通过PCR扩增出葡萄芪合成酶基因(STS)、醛脱氢酶基因(ALDH),与pGEM-TEasy克隆载体连接,获得重组质粒pGEM-TEasy-STS和pGEM-TEasy-ALDH;双酶切重组质粒及表达载体pWR306,将STS、ALDH基因片段与线性表达载体pWR306进行定向连接,构建了葡萄芪合成酶基因及醛脱氢酶基因的植物表达载体pWR-STS、pWR-ALDH,并用改进冻融法导入农杆菌GV3101。 展开更多

关键词 中国野生葡萄 葡萄芪合成酶基因 葡萄醛脱氢酶基因 植物表达载体

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ubi启动子驱动的花生芪合酶基因表达载体的构建及玉米遗传转化初报 被引量：11

2

作者 郭志鸿 王汉宁 +3 位作者 陶玲 张金文 白斌 陈正华 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期117-123,共7页

研究克隆了玉米的ubi启动子,以pBI 121为基本载体,构建了含有ubi启动子的中间载体pBI UB及ubi启动子驱动的GFP基因的植物表达载体pBI UG;采用基因枪法将载体pBI UG转入洋葱表皮细胞对启动子活性进行检测,结果表明GFP基因在洋葱表皮细胞... 研究克隆了玉米的ubi启动子,以pBI 121为基本载体,构建了含有ubi启动子的中间载体pBI UB及ubi启动子驱动的GFP基因的植物表达载体pBI UG;采用基因枪法将载体pBI UG转入洋葱表皮细胞对启动子活性进行检测,结果表明GFP基因在洋葱表皮细胞中得到了表达。本实验同时采用RT-PCR技术克隆了花生的芪合酶基因(Res),该基因编码的蛋白质的氨基酸序列与已公布的芪合酶的氨基酸序列的同源性为99.49 %,并且164位的活性中心Cys没有发生突变;将该Res基因插入载体pBI UB构建了ubi启动子控制下的花生芪合酶基因植物表达载体pBI UA,并对玉米进行了遗传转化,得到了转化苗。 展开更多

关键词 花生芪合酶基因 玉米ubi启动子 植物表达载体 玉米 遗传转化

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法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及双元载体的构建 被引量：7

3

作者 崔红 郭小玲 +1 位作者 时向东 刘国顺 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期253-255,共3页

以留兰香(MenthaspicataL)为材料,利用RT PCR方法克隆法呢基焦磷酸合酶基因(fps)的cDNA,核酸序列分析表明,该基因的编码区长1050bp,编码349个氨基酸.进一步将fps基因插入植物表达载体BinAR,酶切鉴定及测序结果都证明fps的植物双元表达... 以留兰香(MenthaspicataL)为材料,利用RT PCR方法克隆法呢基焦磷酸合酶基因(fps)的cDNA,核酸序列分析表明,该基因的编码区长1050bp,编码349个氨基酸.进一步将fps基因插入植物表达载体BinAR,酶切鉴定及测序结果都证明fps的植物双元表达载体构建成功,为fps基因在烟草中的异源表达奠定了基础. 展开更多

关键词 法呢基焦磷酸合酶基因 克隆 双元载体 载体构建 留兰香 RT-CR方法 异戊二烯途径 烟草

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芪合酶基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量：4

4

作者 谭琳 郑学勤 +1 位作者 康由发 施江 《热带作物学报》 CSCD 2003年第2期42-45,共4页

为获得含白藜芦醇且具有保健作用的转基因番茄,进行了芪合酶基因克隆、植物表达载体构建及导入受体细胞的研究。从葡萄2个品种———雷司令和粉红玫瑰的叶片中提取基因组DNA,并以其为模板,经PCR扩增芪合酶基因,各获得一长约1.6Kb的片段... 为获得含白藜芦醇且具有保健作用的转基因番茄,进行了芪合酶基因克隆、植物表达载体构建及导入受体细胞的研究。从葡萄2个品种———雷司令和粉红玫瑰的叶片中提取基因组DNA,并以其为模板,经PCR扩增芪合酶基因,各获得一长约1.6Kb的片段,将这2个片段分别连接到pGEM-Teasy和pUCm-T上进行测序,1个片段长为1622bp(命名为S1),另一个片段长为1617bp(命名为S2)。然后将S1正向插入pEV2的果实特异性启动子TFP2和NOS终止子,构建了植物表达载体pEV2S1;将S2正向插入植物表达载体pBI121的35S启动子和NOS终止子之间,构建了植物表达载体pBS2。将重组体pEV2S1和pBS2转化大肠杆菌E.coliXL1,并对重组体进行了筛选和鉴定。 展开更多

关键词 芪合酶基因 基因克隆 植物表达载体 转基因番茄 白藜芦醇 基因转化

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烟草柠檬酸合成酶基因的克隆及其光诱导型植物表达载体的构建 被引量：10

5

作者 胡清泉 王奇峰 +2 位作者 李昆志 陈丽梅 玉永雄 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期161-167,共7页

紫花苜蓿为多年生优质豆科牧草。我国南方地区酸性土壤分布比较广,铝害比较严重,限制了紫花苜蓿在南方地区的推广利用。提高有机酸合成酶基因的表达活性,增加有机酸的合成与分泌,有利于增强植物的耐铝性。本研究根据Genebank中已知的烟... 紫花苜蓿为多年生优质豆科牧草。我国南方地区酸性土壤分布比较广,铝害比较严重,限制了紫花苜蓿在南方地区的推广利用。提高有机酸合成酶基因的表达活性,增加有机酸的合成与分泌,有利于增强植物的耐铝性。本研究根据Genebank中已知的烟草柠檬酸合成酶(Citrate Synthase,cs)基因的序列,通过RT-PCR从烟草总RNA中扩增cs基因的cDNA,亚克隆于T载体得到重组载体pMD18-cs,对pMD18-cs中的插入片断进行核酸序列分析确认为cs基因的cDNA全长。用光诱导型启动子(Rubisco,小亚基的启动子)和双元载体pPZP211构建了cs基因的光诱导型植物表达载体pPZP211-PrbcS-cs,为利用基因工程手段提高紫花苜蓿耐铝毒能力,促进其在南方地区推广利用奠定了物质基础。 展开更多

关键词 柠檬酸合成酶基因 光诱导型启动子 植物表达载体 紫花苜蓿 耐铝性

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费尔干猪毛菜病程相关蛋白基因SfPR-1的表达规律和植物表达载体构建 被引量：5

6

作者 王艳 陈西 +1 位作者 周莲洁 杨中敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期116-124,共9页

采用RT-PCR技术探究盐生植物费尔干猪毛菜病程相关蛋白基因SfPR-1(GenBank登录号:JQ670917)在不同发育时期、组织部位、植物激素、非生物胁迫及生物胁迫处理下的表达规律,以揭示该基因在费尔干猪毛菜生长发育和逆境胁迫下的作用。结果表... 采用RT-PCR技术探究盐生植物费尔干猪毛菜病程相关蛋白基因SfPR-1(GenBank登录号:JQ670917)在不同发育时期、组织部位、植物激素、非生物胁迫及生物胁迫处理下的表达规律,以揭示该基因在费尔干猪毛菜生长发育和逆境胁迫下的作用。结果表明,不同组织(根、茎、叶)中,SfPR-1在根中表达量最高,预示该基因可能在根防御中发挥主要作用;SfPR-1在不同发育阶段(种子、种子萌发20 d幼苗、种子萌发30 d幼苗、种子萌发40 d幼苗)的表达特性显示,种子萌发30 d幼苗时,其表达差异最显著,表明其可能在植株后期生长发育中具有重要作用;SfPR-1对不同植物激素(水杨酸SA、茉莉酸JA、脱落酸ABA、乙烯合成前体ACC)均产生了响应,表明该基因在几条主要的抗病防御通路中均发挥作用。非生物胁迫(H2O2、盐、旱、冷)都能够诱导SfPR-1基因的表达,其中对盐响应程度最高。以植源性意大利青霉(Penicillium italicum)进行生物胁迫时,SfPR-1表达呈持续上升趋势。以上结果表明费尔干猪毛菜病程相关蛋白基因SfPR-1是生物与非生物逆境胁迫下均响应的基因,推测其在植物抵御逆境胁迫中发挥重要作用。 展开更多

关键词 费尔干猪毛菜 SfPR-1基因 RT-pcr 表达模式 植物表达载体构建

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马铃薯淀粉合成酶融合基因植物表达载体构建 被引量：2

7

作者 王颖 张金文 +1 位作者 王蒂 李洲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2163-2168,共6页

通过反义抑制马铃薯（Solanum tuberosumL．）块茎淀粉合成酶GBSS、SSⅡ和ssⅢ基因的表达，可降低淀粉中直链淀粉含量和改变分支链的长度，从而降低马铃薯淀粉糊化温度、改善其抗凝沉性。依据GBSS、SSⅡ和SSⅢ基因的cDNA序列分析，从各... 通过反义抑制马铃薯（Solanum tuberosumL．）块茎淀粉合成酶GBSS、SSⅡ和ssⅢ基因的表达，可降低淀粉中直链淀粉含量和改变分支链的长度，从而降低马铃薯淀粉糊化温度、改善其抗凝沉性。依据GBSS、SSⅡ和SSⅢ基因的cDNA序列分析，从各基因中筛选和克隆了一段同源性极低、约500～600bp的片段；通过PCR技术实现了3个片段的融合，得到了1671bp的融合基因GS：S3；将GS：S3反向连接在GBSS5′侧翼序列之后，构建了由GBSS5′侧翼序列驱动的GS2S3反义基因的植物表达载体pBI-GS2S3，并进行了初步转化。 展开更多

关键词 淀粉合成酶 马铃薯淀粉 基因植物 表达载体构建 CDNA序列分析 GBSS 直链淀粉含量 植物表达载体

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酵母海藻糖合成酶基因植物表达载体的构建 被引量：2

8

作者 李莉 贾新成 +1 位作者 秦广雍 霍裕平 《郑州大学学报（理学版）》 CAS 2003年第1期49-51,共3页

以从原核表达载体中酶切得到的 tps1基因为模板 ,设计适当的引物 ,利用 PCR技术 ,克隆出核苷酸数大约 1.5 k的片段 .PCR产物经回收后 ,与 PCAMBIA130 3载体连接并转化大肠杆菌 DH5 a,阳性重组子经PCR鉴定 ,结果表明已获得海藻糖磷酸合... 以从原核表达载体中酶切得到的 tps1基因为模板 ,设计适当的引物 ,利用 PCR技术 ,克隆出核苷酸数大约 1.5 k的片段 .PCR产物经回收后 ,与 PCAMBIA130 3载体连接并转化大肠杆菌 DH5 a,阳性重组子经PCR鉴定 ,结果表明已获得海藻糖磷酸合成酶基因的植物表达载体 . 展开更多

关键词 酵母 海藻糖合成酶基因 海藻糖-6-磷酸合成酶 pcr 植物表达载体 tps1基因 基因表达

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蝴蝶兰ACC合成酶基因片段的克隆及其反义表达载体的构建 被引量：2

9

作者 崔波 蒋素华 +2 位作者 马杰 张仙云 叶永忠 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第34期16781-16782,16785,共3页

[目的]克隆蝴蝶兰ACC合成酶cDNA片段,构建其反义表达载体。[方法]根据已报道的蝴蝶兰ACC合成酶的基因序列,设计并合成了1对引物,通过RT-PCR以蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC合成酶的cDNA片段,将其连接到MD19-T质粒载体上进行测序。用XbaⅠ和Sa... [目的]克隆蝴蝶兰ACC合成酶cDNA片段,构建其反义表达载体。[方法]根据已报道的蝴蝶兰ACC合成酶的基因序列,设计并合成了1对引物,通过RT-PCR以蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC合成酶的cDNA片段,将其连接到MD19-T质粒载体上进行测序。用XbaⅠ和SacⅠ对重组质粒和pBI221酶切后连接,构建蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因表达载体。[结果]获得了蝴蝶兰ACC合成酶的cD-NA片段,测序结果显示,该片段与参考的已报道序列具有98.92%和76.36%的同源性。通过引入XbaⅠ和SacⅠ酶切位点,进行载体构建,构建了蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因表达载体。[结论]成功构建了蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因植物表达载体,为进一步研究其对蝴蝶兰花期和生长的影响打下了基础。 展开更多

关键词 蝴蝶兰 ACC合成酶 基因克隆 反义基因 植物表达载体构建

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美洲黑杨木质素生物合成转录因子PdLim1基因的克隆、表达及植物表达载体构建 被引量：1

10

作者 王璐 李百炼 +1 位作者 张金凤 张德强 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1-8,共8页

在植物体内,Lim1基因与木质素生物合成酶基因启动子区域富含AC的Pal盒结合,转录调控木质素的生物合成过程。该研究组合利用生物信息学和realtime PCR方法,首次从美洲黑杨形成层cDNA中分离出PdLim1cDNA全长,并进行了测序和序列分析。结... 在植物体内,Lim1基因与木质素生物合成酶基因启动子区域富含AC的Pal盒结合,转录调控木质素的生物合成过程。该研究组合利用生物信息学和realtime PCR方法,首次从美洲黑杨形成层cDNA中分离出PdLim1cDNA全长,并进行了测序和序列分析。结果表明,克隆的美洲黑杨PdLim1cDNA片段总长为952bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为594bp,可编码长度为197个氨基酸残基的蛋白质,所推导的蛋白质氨基酸序列与拟南芥AtLim1和水稻OsLim1蛋白的同源性分别为82.1%和78.2%。组织特异性realtime PCR结果显示,PdLim1基因在杨树根、茎、叶片和顶端分生组织中均有表达,但其表达模式却不同:PdLim1在成熟叶片和成熟木质部中表达丰度最高,在树皮、根部、韧皮部和形成层表达丰度较高,在未成熟木质部有少量表达,在顶端分生组织中表达丰度最低。在此基础上,以pBI121为表达载体,构建了在CaMV35S启动子驱动下,PdLim1基因的正义(pBI121-CaMV35S-sense PdLim1)和反义(pBI121-CaMV35S-antisense PdLim1)类型的双元植物表达载体。该研究为杨树PdLim1的基因工程改良木材纤维品质性状提供了重要的理论依据,具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 杨树 Lim1转录因子 木质素生物合成 REALTIME pcr 植物表达载体

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果实特异表达芪合酶基因的表达载体构建及农杆菌重组

11

作者 马兵钢 谭琳 +2 位作者 胡新文 牛建新 郑学勤 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第5期393-396,共4页

本研究利用基因工程技术构建了附加果实特异表达启动子的芪合酶基因植物表达载体,并通过农杆菌直接转化技术将其转入LBA4404、EHA105,并采用PCR及限制性酶切分析对所获得的农杆菌工程菌株进行鉴定。为利用芪合酶基因转化植物并在食用果... 本研究利用基因工程技术构建了附加果实特异表达启动子的芪合酶基因植物表达载体,并通过农杆菌直接转化技术将其转入LBA4404、EHA105,并采用PCR及限制性酶切分析对所获得的农杆菌工程菌株进行鉴定。为利用芪合酶基因转化植物并在食用果实中产生白藜芦醇做准备。 展开更多

关键词 农杆菌 果实 芪合酶基因 表达载体构建 植物表达载体 基因工程技术 研究利用 特异表达 限制性酶切分析 工程菌

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肠出血性大肠埃希菌EIS基因的克隆与植物表达载体的构建

12

作者 吴仙花 李贺 +5 位作者 施利利 罗峰 夏卜贤 陈晓木 孙守钧 裴忠有 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第5期12-15,共4页

为给利用转基因植物生产出血性大肠杆菌疫苗的研究奠定基础,应用PCR扩增技术从原核表达载体pET-28a(+)-EIS上克隆对出血性大肠杆菌具有保护性免疫的EIS基因序列,并采用T-A克隆方法克隆到pUC18上,通过酶切、连接、转化等技术构建植物表... 为给利用转基因植物生产出血性大肠杆菌疫苗的研究奠定基础,应用PCR扩增技术从原核表达载体pET-28a(+)-EIS上克隆对出血性大肠杆菌具有保护性免疫的EIS基因序列,并采用T-A克隆方法克隆到pUC18上,通过酶切、连接、转化等技术构建植物表达载体,经酶切、测序验证后将构建植物表达载体导入农杆菌中。结果:扩增到约为1 800bp的EIS基因,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1300-EIS,并导入到农杆菌EHA105中。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌 EIS基因 植物表达载体 pcr 克隆 疫苗

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拟南芥CAX 1基因克隆及表达载体的构建 被引量：2

13

作者 江丽慧 伍林涛 +5 位作者 高志宏 秦信蓉 宋金宝 熊文霞 李东 张薇 《种子》 北大核心 2018年第7期1-4,共4页

传递逆境胁迫如盐胁迫、干旱胁迫和病菌感染响应的重要第二信使是钙离子,而且在拟南芥植物细胞内,钙离子浓度受到严格的控制。CAX 1定位于液泡膜,是将钙离子存储于液泡的钙离子通道。利用PCR技术从拟南芥植物中的cDNA扩增出基因CAX 1。... 传递逆境胁迫如盐胁迫、干旱胁迫和病菌感染响应的重要第二信使是钙离子,而且在拟南芥植物细胞内,钙离子浓度受到严格的控制。CAX 1定位于液泡膜,是将钙离子存储于液泡的钙离子通道。利用PCR技术从拟南芥植物中的cDNA扩增出基因CAX 1。在此基础上将扩增出来的含有CAX 1基因片段与pMD 18-T载体连接得到重组质粒,再连接在pBI 121质粒的CaMV 35S启动子和NOS终止子之间,转化在感受态的大肠杆菌后经过培养,并进行菌落PCR验证和酶切鉴定,以期为研究转运蛋白CAX 1过量表达株系是否影响植物抗病提供参考。 展开更多

关键词 拟南芥 CAX1基因 基因克隆 pcr技术扩增 植物表达载体构建

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未知功能基因BnaC03g45680D的克隆和植物表达载体的构建

14

作者 张启 甄文轩 +3 位作者 杨晓桐 卢天运 徐如强 臧新 《贵州农业科学》 CAS 2018年第3期21-24,共4页

为探明基因BnaC03g45680D的生物学功能,以甘蓝型油菜(鼎油杂4号)为试验材料,采用RT-PCR技术并进一步利用农杆菌介导法转化植物进行研究。结果表明:甘蓝型油菜叶片RNA扩增出介于678bp的基因片段,其与Genbank报道的甘蓝型油菜基因BnaC03g4... 为探明基因BnaC03g45680D的生物学功能,以甘蓝型油菜(鼎油杂4号)为试验材料,采用RT-PCR技术并进一步利用农杆菌介导法转化植物进行研究。结果表明:甘蓝型油菜叶片RNA扩增出介于678bp的基因片段,其与Genbank报道的甘蓝型油菜基因BnaC03g45680D预测序列的同源性为100%;构建了含有2×CaMV35S启动子的植物表达载体PCAMBIA1300S-BnaC03g45680D。 展开更多

关键词 油菜 基因BnaC03g45680D RT-pcr 植物表达载体

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