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鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用
被引量：
4
1
作者
耿士忠
刘欢
+5 位作者
焦新安
潘志明
钱珊珊
郭荣显
安树敏
薛颖
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期149-152,158,共5页
目的进行鸡白痢沙门菌Spi C蛋白原核表达并建立以Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA。方法以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spi C基因。将spi C基因克隆至原核表达载体p ET30a中,构建重组原核表达质粒p ET30a-spi C,...
目的进行鸡白痢沙门菌Spi C蛋白原核表达并建立以Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA。方法以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spi C基因。将spi C基因克隆至原核表达载体p ET30a中,构建重组原核表达质粒p ET30a-spi C,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,纯化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品。结果通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-Spi C。重组蛋白GST-Spi C免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-Spi C,表明体外表达的重组蛋白His-Spi C有良好的免疫反应原性。所建立的以重组蛋白His-Spi C介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spi C基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染。结论重组蛋白His-Spi C呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-Spi C建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法。
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关键词
鸡白痢沙门菌
来杭鸡
spic基因
原核表达
间接ELISA
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职称材料
题名
鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用
被引量：
4
1
作者
耿士忠
刘欢
焦新安
潘志明
钱珊珊
郭荣显
安树敏
薛颖
机构
扬州大学
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期149-152,158,共5页
基金
863项目(2011AA10A212)
国家自然科学基金(31230070)
中国博士后基金(2014M551670)
文摘
目的进行鸡白痢沙门菌Spi C蛋白原核表达并建立以Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA。方法以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spi C基因。将spi C基因克隆至原核表达载体p ET30a中,构建重组原核表达质粒p ET30a-spi C,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,纯化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品。结果通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-Spi C。重组蛋白GST-Spi C免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-Spi C,表明体外表达的重组蛋白His-Spi C有良好的免疫反应原性。所建立的以重组蛋白His-Spi C介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spi C基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染。结论重组蛋白His-Spi C呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-Spi C建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法。
关键词
鸡白痢沙门菌
来杭鸡
spic基因
原核表达
间接ELISA
Keywords
Salmonella pullorum
leghorn chicken
spic
gene
prokaryotic expression
indirect ELISA
分类号
R446.61 [医药卫生—诊断学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用
耿士忠
刘欢
焦新安
潘志明
钱珊珊
郭荣显
安树敏
薛颖
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
4
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