多星韭AwANSs基因的克隆与表达分析

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作者 彭婷 林颖 +6 位作者 谭圆圆 饶英 黄覃 张文娥 汪波 田瑞丰 刘国锋 《生物技术通报》 北大核心 2025年第3期230-239,共10页

【目的】多星韭(Allium wallichii)是极具特色的高山花卉,花青苷合成酶(ANS)是类黄酮代谢途径下游合成花青苷的关键酶,研究ANS基因在紫花和白花多星韭花色形成中发挥的作用。【方法】采用p H示差法检测多星韭紫花和白花不同发育时期总... 【目的】多星韭(Allium wallichii)是极具特色的高山花卉,花青苷合成酶(ANS)是类黄酮代谢途径下游合成花青苷的关键酶,研究ANS基因在紫花和白花多星韭花色形成中发挥的作用。【方法】采用p H示差法检测多星韭紫花和白花不同发育时期总花青苷含量;利用RT-PCR技术克隆紫花和白花Aw ANS基因,并对其进行表达模式分析。【结果】紫花多星韭花朵总花青苷含量随花发育逐渐增加,在S4达到峰值,白花花瓣中均检测不到花青苷含量。从紫花中克隆到2条ANS基因序列(Aw ANS^(pa)和Aw ANS^(pb)),CDS长度均为1074 bp,编码357个氨基酸;从白花中克隆到5条ANS序列(Aw ANS^(wa)、Aw ANS^(wb)、Aw ANS^(wc)、Aw ANS^(wd)、Aw ANS^(we)),Aw ANS^(wa)和Aw ANS^(wd)CDS长度分别为1074 bp和1077 bp,分别编码357、358个氨基酸,另外3条序列出现大片段缺失导致蛋白翻译提前终止。系统进化树分析显示Aw ANSs与洋葱亲缘关系最近。RT-q PCR分析显示,紫花Aw ANSs在花瓣中表达量最高,在根、雌蕊和果实中表达量极低;Aw ANSs在紫花多星韭的表达随花发育而逐渐升高,在S5达到峰值;而在白花中几乎检测不到Aw ANSs表达。【结论】Aw ANSs的表达具有明显的时空表达特异性,在花瓣中表达量最高。与紫花相比,白花多星韭的花瓣中不积累花青素,其Aw ANSs基因在整个花发育过程中也几乎不表达,表明Aw ANSs基因对多星韭紫色花的形成起着重要作用。 展开更多

关键词 多星韭 花青苷合成酶 基因克隆 时空表达分析 花青苷

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克氏原螯虾Hox基因家族鉴定、进化与表达分析

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作者 魏啸宇 胡倩 +1 位作者 顾泽茂 李艳和 《渔业科学进展》 北大核心 2025年第4期168-182,共15页

Hox基因家族是一类与真核生物形态发育密切相关的重要基因。为解析克氏原螯虾(Procambarus clarkii)Hox基因的表达模式以及参与形态发育调控的功能和机制,本研究基于克氏原螯虾基因组和转录组数据,结合生物信息学的方法对Hox基因家族进... Hox基因家族是一类与真核生物形态发育密切相关的重要基因。为解析克氏原螯虾(Procambarus clarkii)Hox基因的表达模式以及参与形态发育调控的功能和机制,本研究基于克氏原螯虾基因组和转录组数据,结合生物信息学的方法对Hox基因家族进行鉴定,并对其序列结构、蛋白理化性质、亚细胞定位预测、物种间共线性情况、系统发育、选择压力、早期发育表达模式和组织分布特征进行了初步分析。结果显示,在克氏原螯虾中鉴定出同一染色体上成簇排列的8个Hox基因(lab、pb、Dfd、Scr、Antp、Ubx、abd-A和Abd-B),除Abd-B基因外,其他基因编码的Hox蛋白均具有一个含YPWM的motif和一个高度保守的Homeodomain结构域;克氏原螯虾Hox蛋白均为亲水性蛋白和不稳定蛋白;亚细胞定位预测显示,克氏原螯虾Hox蛋白主要定位于细胞核;Hox基因家族的不同成员在虾蟹类物种中具有不同的系统发育历史;克氏原螯虾Hox基因主要经历了纯化选择,且不同的Hox基因在甲壳类物种间存在不同的进化速率;Hox基因家族不同成员在克氏原螯虾早期发育不同时期和成虾不同组织的相对表达量有所差异,且在不同组织的相对表达量雌虾普遍高于雄虾。研究结果丰富了甲壳类动物Hox基因的研究,为克氏原螯虾形态发育和进化研究提供了基础资料。 展开更多

关键词 克氏原螯虾 HOX基因 基因鉴定 表达分析

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一种改进的布尔表达式自下而上分析的语法制导翻译的方法 被引量：3

3

作者 谷洪亮 《小型微型计算机系统》 CSCD 北大核心 2001年第7期837-838,共2页

本文针对文献〔1〕中布尔表达式文法和语义子程序不能适用于算符优先分析的语法制导翻译法的局限 ,从算符优先分析法和语法制导翻译的定义及本质特点出发 ,提出了一种改进方法 ,实现了算符优先分析制导翻译布尔表达式 .

关键词 语法制导翻译 算符优先分析法 布尔表达式 编译程序

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“不可杀人”的现代阐析——从基耶斯洛夫斯基《杀人短片》看文艺与法律的关系 被引量：1

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作者 何云波 李欣仪 《湘潭大学学报（哲学社会科学版）》 CSSCI 北大核心 2013年第1期96-100,105,共5页

《中国古代判词艺术的形态学分析》提出,中国古代判词从语体上可分为语判和书判,从语言形式和风格上可分为骈判、散判和花判,从使用主体上可分为批词和判词、审语和判语。波兰导演基耶斯洛夫斯基在"《十诫》之五.杀人短片"中... 《中国古代判词艺术的形态学分析》提出,中国古代判词从语体上可分为语判和书判,从语言形式和风格上可分为骈判、散判和花判,从使用主体上可分为批词和判词、审语和判语。波兰导演基耶斯洛夫斯基在"《十诫》之五.杀人短片"中,对作为宗教戒律的"不可杀人",作了全新的现代阐析,由此也引出一个文艺与法律的关系的问题。法律有它自身的立场,而艺术的叙事也有它特有的逻辑。但它们的终极目标是一致,可以在一定程度上相互补充。这是《"不可杀人"的现代阐析》的基本观点。《论后现代挪用艺术的法律保护困境》则认为,依据版权法"保护表达不保护思想"的二分原则,借用已有作品表达进行再创作的后现代挪用艺术要么被拒之于版权保护的门外,要么深陷侵权的泥潭。然而,从认识论来说思想/表达间并不存在通常认为的明确界限,表达是能指与所指的统一,思想与形式的重合。机械割裂思想/表达,既不利于艺术繁荣,又损害了版权法的发展完善。 展开更多

关键词 基耶斯洛夫斯基 文艺作品 现代人 杀人 短片 法律 《十诫》 中西小说

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论后现代挪用艺术的法律保护困境 被引量：2

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作者 邓春梅 《湘潭大学学报（哲学社会科学版）》 CSSCI 北大核心 2013年第1期100-105,共6页

《中国古代判词艺术的形态学分析》提出,中国古代判词从语体上可分为语判和书判,从语言形式和风格上可分为骈判、散判和花判,从使用主体上可分为批词和判词、审语和判语。波兰导演基耶斯洛夫斯基在"《十诫》之五.杀人短片"中... 《中国古代判词艺术的形态学分析》提出,中国古代判词从语体上可分为语判和书判,从语言形式和风格上可分为骈判、散判和花判,从使用主体上可分为批词和判词、审语和判语。波兰导演基耶斯洛夫斯基在"《十诫》之五.杀人短片"中,对作为宗教戒律的"不可杀人",作了全新的现代阐析,由此也引出一个文艺与法律的关系的问题。法律有它自身的立场,而艺术的叙事也有它特有的逻辑。但它们的终极目标是一致,可以在一定程度上相互补充。这是《"不可杀人"的现代阐析》的基本观点。《论后现代挪用艺术的法律保护困境》则认为,依据版权法"保护表达不保护思想"的二分原则,借用已有作品表达进行再创作的后现代挪用艺术要么被拒之于版权保护的门外,要么深陷侵权的泥潭。然而,从认识论来说思想/表达间并不存在通常认为的明确界限,表达是能指与所指的统一,思想与形式的重合。机械割裂思想/表达,既不利于艺术繁荣,又损害了版权法的发展完善。 展开更多

关键词 后现代艺术 法律保护 困境 20世纪 发展趋势 艺术作品 艺术形式 艺术创新

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中国古代判词艺术的形态学分析 被引量：2

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作者 胡平仁 《湘潭大学学报（哲学社会科学版）》 CSSCI 北大核心 2013年第1期91-95,105,共5页

《中国古代判词艺术的形态学分析》提出,中国古代判词从语体上可分为语判和书判,从语言形式和风格上可分为骈判、散判和花判,从使用主体上可分为批词和判词、审语和判语。波兰导演基耶斯洛夫斯基在"《十诫》之五.杀人短片"中... 《中国古代判词艺术的形态学分析》提出,中国古代判词从语体上可分为语判和书判,从语言形式和风格上可分为骈判、散判和花判,从使用主体上可分为批词和判词、审语和判语。波兰导演基耶斯洛夫斯基在"《十诫》之五.杀人短片"中,对作为宗教戒律的"不可杀人",作了全新的现代阐析,由此也引出一个文艺与法律的关系的问题。法律有它自身的立场,而艺术的叙事也有它特有的逻辑。但它们的终极目标是一致,可以在一定程度上相互补充。这是《"不可杀人"的现代阐析》的基本观点。《论后现代挪用艺术的法律保护困境》则认为,依据版权法"保护表达不保护思想"的二分原则,借用已有作品表达进行再创作的后现代挪用艺术要么被拒之于版权保护的门外,要么深陷侵权的泥潭。然而,从认识论来说思想/表达间并不存在通常认为的明确界限,表达是能指与所指的统一,思想与形式的重合。机械割裂思想/表达,既不利于艺术繁荣,又损害了版权法的发展完善。 展开更多

关键词 法律与文艺 判词艺术 形态学分析 基耶斯洛夫斯基 《杀人短片》 挪用艺术 思想与表达二分原则

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基于语义指向分析的“得”字句英译研究 被引量：1

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作者 陈小曼 《外国语文》 北大核心 2013年第5期113-118,共6页

"得"字句是现代汉语的一种独特表达法。"得"字句的结构类型多样,语义复杂。从《骆驼祥子》、《憩园》等现代汉语名著中选取了若干"得"字句语料,对"得"字句补语的句法成分和语义指向进行了分析... "得"字句是现代汉语的一种独特表达法。"得"字句的结构类型多样,语义复杂。从《骆驼祥子》、《憩园》等现代汉语名著中选取了若干"得"字句语料,对"得"字句补语的句法成分和语义指向进行了分析,在此基础上,从八个方面探讨了"得"字句的英译方法。 展开更多

关键词 “得”字句 补语 语义指向分析 “得”字句英译

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一个新的家蚕LIMonly蛋白基因的序列分析和原核表达

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作者 吴淑春 虞淼 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期29-32,56,共5页

LIM蛋白是一类含有LIM结构域的真核蛋白家族,它可介导细胞分化和发育,转录调控和激活、参与细胞骨架形成等多种重要的生物调节过程。从家蚕蛹cDNA文库获得一个新的编码LIM only蛋白的基因,我们将其命名为BmLIMO(BombyxmoriLIMonly prote... LIM蛋白是一类含有LIM结构域的真核蛋白家族,它可介导细胞分化和发育,转录调控和激活、参与细胞骨架形成等多种重要的生物调节过程。从家蚕蛹cDNA文库获得一个新的编码LIM only蛋白的基因,我们将其命名为BmLIMO(BombyxmoriLIMonly protein)。该基因ORF长度为561 bp,编码长度为186个氨基酸残基的蛋白质,预测分子量为21.6 kDa,等电点为9.14。对BmLIMO基因进行了生物信息学方面的分析,并用DNA重组技术将Bm-LIMO片段克隆到原核表达载体pET-28α中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了可溶性BmLIMO蛋白,这为进一步研究该蛋白功能奠定了基础。 展开更多

关键词 家蚕 LIMonly 生物信息学分析 原核表达

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苹果矮化砧木GA20氧化酶基因的克隆及其表达分析 被引量：6

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作者 郑伶杰 马宏 +3 位作者 张媛 张学英 李中勇 徐继忠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期53-59,共7页

为了研究GA20氧化酶基因在苹果矮化砧木中的分子特征和表达特征,利用RT-PCR方法从苹果矮化砧木2号和36号c DNA中克隆了GA20氧化酶基因(GA20ox1),并对该基因及其编码氨基酸序列以及在不同时期砧木及嫁接品种中的表达分别进行了分析。结... 为了研究GA20氧化酶基因在苹果矮化砧木中的分子特征和表达特征,利用RT-PCR方法从苹果矮化砧木2号和36号c DNA中克隆了GA20氧化酶基因(GA20ox1),并对该基因及其编码氨基酸序列以及在不同时期砧木及嫁接品种中的表达分别进行了分析。结果表明,GA20ox1基因c DNA编码序列长1 179 bp,推导编码393个氨基酸(包括终止密码子),预测蛋白相对分子质量44.3 k Da,理论等电点5.89,编码的蛋白质包含GA20ox1基因家族所具有的特征保守结构域,系统进化分析表明该蛋白序列与苹果SH40的同源性达到96.9%。实时荧光定量PCR分析显示:36号砧木在6月份GA20ox1基因表达强度显著低于八棱海棠对照,而7-8月份的均显著高于对照,其上嫁接的品种7月份表达强度显著低于对照。在7-8月份2号砧木及嫁接品种GA20ox1基因的表达强度均显著低于对照。 展开更多

关键词 苹果矮化砧木 GA20氧化酶 克隆 表达分析

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猪带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶的原核表达及其生物学特性分析 被引量：5

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作者 尹才 骆学农 +3 位作者 王帅 陈光丽 曾巧英 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1512-1517,共6页

猪带绦虫(Ts)是一种重要的人畜共患寄生虫,硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)是猪带绦虫及其幼虫重要的功能蛋白。为研究TsTPx蛋白的功能和筛选猪囊虫高效免疫靶标,提取猪带绦虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增tstpx基因,测序分析后构建原核表达载体pET... 猪带绦虫(Ts)是一种重要的人畜共患寄生虫,硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)是猪带绦虫及其幼虫重要的功能蛋白。为研究TsTPx蛋白的功能和筛选猪囊虫高效免疫靶标,提取猪带绦虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增tstpx基因,测序分析后构建原核表达载体pET-30a(+)-tstpx,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,用镍离子亲和层析纯化TsTPx蛋白并进行生物学特性分析,包括抗氧化功能和抗原性。结果如下:SDS-PAGE分析表明,表达的TsTPx蛋白约25ku,主要以可溶性形式存在于菌体裂解上清中。抗氧化功能分析表明,在金属催化氧化(MCO)体系中,TsTPx蛋白对质粒DNA超螺旋结构的保护率与质量浓度呈正相关,20μg·mL-1时可100%保护,电泳图谱中被氧化的开环慢迁移带完全消失;H2O2还原体系中,TsTPx蛋白对H2O2的还原率与质量浓度呈正相关,100μg·mL-1时,在含二硫苏糖醇(DTT)体系中,还原率达69.9%,在不含DTT体系中为54.5%。抗原性分析:Western blotting显示TsTPx蛋白可被猪带绦虫囊尾蚴阶段阳性血清识别,具有良好的反应原性;用TsTPx蛋白免疫家兔,间接ELISA检测的抗体效价高达1∶320 000,具有良好的免疫原性。本研究表达的TsTPx蛋白具有生物学活性和良好的抗原性,为进一步阐明其生物学功能和研制猪囊虫病疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪带绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 原核表达 生物学特性分析

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马铃薯StIgt基因家族的鉴定及其对干旱胁迫的响应分析 被引量：9

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作者 秦天元 刘玉汇 +6 位作者 孙超 毕真真 李安一 许德蓉 王一好 张俊莲 白江平 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期780-786,共7页

干旱胁迫是影响马铃薯产量和品质的主要非生物胁迫因素之一。马铃薯在抵御干旱胁迫的过程中,根系的生长发育和构型分布发挥着重要作用。Igt基因家族是普遍存在于植物中的一类功能基因,在调控植物根系构型和提高植株抗逆性等方面效果显... 干旱胁迫是影响马铃薯产量和品质的主要非生物胁迫因素之一。马铃薯在抵御干旱胁迫的过程中,根系的生长发育和构型分布发挥着重要作用。Igt基因家族是普遍存在于植物中的一类功能基因,在调控植物根系构型和提高植株抗逆性等方面效果显著。本研究以马铃薯双单倍体‘DM-v4.03’高质量基因组为参考,在全基因组范围内分析鉴定了StIgt基因家族的成员,并采用多种生物信息学软件对其进行了系统进化树构建、染色体定位、保守蛋白结构域、基因结构和顺式元件预测。同时,利用本课题组前期对马铃薯四倍体品系在不同干旱条件下的转录组测序结果,分析了StIgts响应干旱胁迫的表达谱。结果表明,在马铃薯中共鉴定获得10个StIgt家族成员,其中StIgt1由本课题组前期克隆获得。除StIgt1位置信息不明外,其余基因不均匀地分布在1、2、5、7、10和11号染色体上。StIgt家族蛋白长度为110~283个氨基酸,分子量介于13.136~32.542 kD之间,预测等电点为3.82~9.86。系统进化树分析发现,该基因家族可分为3个亚族,亚族间的基因结构、蛋白保守域和顺式作用元件差别明显。干旱胁迫下的表达谱分析表明,StIgt6、StIgt7、StIgt9和StIgt10响应早期干旱胁迫,在干旱2 h时即迅速上调表达。这些结果为阐明StIgt基因家族的进化关系和进一步研究其成员的功能特性提供了理论基础。 展开更多

关键词 全基因组 马铃薯 StIgt基因家族 干旱胁迫 表达谱分析

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陆地棉体细胞胚发育过程中AOS基因家族的表达谱初步分析及功能预测 被引量：2

12

作者 吴洁 葛晓阳 +1 位作者 李付广 张朝军 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期538-546,共9页

茉莉酸在调控棉花体细胞胚增殖方面有重要作用,而丙二烯氧化物合酶(AOS)是植物茉莉酸合成途径中的关键酶。作者鉴定出在胚发育过程中表达的AOS基因,这些基因编码区长度均在1500 bp左右,被定位在5条染色体上,有2个基因含有内含子。对其... 茉莉酸在调控棉花体细胞胚增殖方面有重要作用,而丙二烯氧化物合酶(AOS)是植物茉莉酸合成途径中的关键酶。作者鉴定出在胚发育过程中表达的AOS基因,这些基因编码区长度均在1500 bp左右,被定位在5条染色体上,有2个基因含有内含子。对其启动子元件分析发现,它们可能受激素和胁迫的调控在体细胞胚胎发生中起作用。荧光定量分析发现,这些基因在棉花不同组织中的表达模式主要分为3类,GhAOS1和GhAOS6在棉花胚发育过程中表达量相对较高,GhAOS2和GhAOS3在棉花愈伤和胚性愈伤中表达量相对较高,GhAOS4和GhAOS5在茎和叶中表达水平相对较高,暗示这些基因的表达有时空特异性,且GhAOS1和GhAOS6可能在棉花胚发育中发挥重要作用。亚细胞定位分析显示,大部分被定位在过氧化物酶体中,可能参与调控光呼吸、体细胞胚成熟和萌发。上述分析为进一步研究AOS基因家族在棉花体细胞胚发育中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 陆地棉 AOS基因家族 进化分析 表达模式

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小麦F-box基因TaFBL14的克隆及表达分析 被引量：2

13

作者 李铃仙 魏春茹 +2 位作者 李虎滢 魏新燕 于秀梅 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期232-238,共7页

该研究利用同源克隆策略,获得了1条小麦F-box/LRR重复蛋白14基因(TaFBL14)。TaFBL14基因编码486个氨基酸,预测分子量为53.48kD,等电点为5.93,序列N端包含一个F-box结构域,C段包含7个LRR结构域。TaFBL14基因编码蛋白不具有信号肽及核定... 该研究利用同源克隆策略,获得了1条小麦F-box/LRR重复蛋白14基因(TaFBL14)。TaFBL14基因编码486个氨基酸,预测分子量为53.48kD,等电点为5.93,序列N端包含一个F-box结构域,C段包含7个LRR结构域。TaFBL14基因编码蛋白不具有信号肽及核定位信号序列,主要定位在细胞质中,二级结构以α-螺旋为主,呈球状。进化树分析表明,TaFBL14与粗山羊草和乌拉尔托小麦的FBL14蛋白亲缘关系较近。qRT-PCR分析结果显示,TaFBL14基因主要在小麦叶组织中表达,且受非亲和叶锈菌侵染后呈现上调表达趋势,说明该基因可能参与小麦抵御叶锈菌的侵染过程。 展开更多

关键词 小麦 F-box基因TaFBL14 序列分析 表达模式

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梅花PmWRKY40基因的克隆及其表达分析 被引量：3

14

作者 彭婷 王艺琴 +3 位作者 陈曼曼 冯蓝萍 包满珠 张俊卫 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期71-78,共8页

为揭示梅花WRKY基因的功能,采用RT-PCR技术从梅花品种'雪梅'(Prunus mume'Xuemei')中分离得到1个WRKY转录因子基因PmWRKY40。序列分析结果显示,该基因cDNA全长1072bp,完整开放阅读框972bp,编码323个氨基酸,包含1个WRKY... 为揭示梅花WRKY基因的功能,采用RT-PCR技术从梅花品种'雪梅'(Prunus mume'Xuemei')中分离得到1个WRKY转录因子基因PmWRKY40。序列分析结果显示,该基因cDNA全长1072bp,完整开放阅读框972bp,编码323个氨基酸,包含1个WRKY结构和1个C2H2型锌指结构。系统进化分析结果显示,梅花PmWRKY40蛋白与欧洲甜樱桃亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析表明:PmWRKY40基因受低温、氧化胁迫诱导,但诱导程度存在差异。此外,SA处理显著提高PmWRKY40的表达,ABA处理则抑制该基因表达。推测PmWRKY40可能在梅花响应低温胁迫过程中起重要作用。 展开更多

关键词 梅花 WRKY转录因子 非生物胁迫 低温胁迫 氧化胁迫 激素处理 基因克隆 表达分析

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烟草OSCA基因家族鉴定及非生物胁迫诱导表达模式分析 被引量：5

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作者 邓智超 田冬冬 +6 位作者 宋青松 郭存 文利超 王奇 初雨蒙 刘涛 郭永峰 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2022年第1期14-21,共8页

高渗门控钙渗透通道(OSCA,hyperosmolal-gatedcalcium-permeable channel)是一种Ca2+非选择性阳离子通道,OSCA家族含有钙依赖性通道DUF221结构域。为了进一步了解烟草OSCA基因家族特征和功能,本研究从栽培烟草K326基因组中鉴定到23个OSC... 高渗门控钙渗透通道(OSCA,hyperosmolal-gatedcalcium-permeable channel)是一种Ca2+非选择性阳离子通道,OSCA家族含有钙依赖性通道DUF221结构域。为了进一步了解烟草OSCA基因家族特征和功能,本研究从栽培烟草K326基因组中鉴定到23个OSCA家族基因,并对Nt OSCA家族系统进化关系、基因结构与蛋白结构域、启动子、不同组织器官及干旱和盐胁迫下表达模式进行分析。根据进化关系,Nt OSCA基因家族被分为4个亚家族,并且同一亚家族成员间蛋白及基因结构相似。启动子分析结果表明,Nt OSCA家族基因启动子中存在着多种不同的胁迫响应元件,其中干旱响应元件和脱落酸响应元件较多。进一步组织表达分析结果表明,Nt OSCA基因家族成员在不同组织的表达量不同。干旱和盐胁迫表达模式分析表明,20个Nt OSCA基因在干旱胁迫下表达量上调,15个Nt OSCA基因在盐胁迫下表达量上调。这说明OSCA基因家族在烟草抗旱和抗盐胁迫中具有重要作用。 展开更多

关键词 烟草 OSCA 家族分析 表达分析 干旱胁迫 盐胁迫

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白蜡虫far3基因cDNA全长克隆、原核表达和酶活分析 被引量：2

16

作者 赵遵岭 王雪庆 杨璞 《四川动物》 北大核心 2019年第2期149-156,共8页

脂酰辅酶A还原酶(FAR)可将脂酰辅酶A还原为相应的脂肪醇,在白蜡生物合成中起至关重要的作用。本研究通过cDNA末端快速扩增技术获得白蜡虫Ericerus pela far3基因cDNA全长,其开放阅读框(ORF)1 566 bp。对白蜡虫FAR3编码蛋白进行系统发育... 脂酰辅酶A还原酶(FAR)可将脂酰辅酶A还原为相应的脂肪醇,在白蜡生物合成中起至关重要的作用。本研究通过cDNA末端快速扩增技术获得白蜡虫Ericerus pela far3基因cDNA全长,其开放阅读框(ORF)1 566 bp。对白蜡虫FAR3编码蛋白进行系统发育分析,发现FAR3与人类Homo sapiens、小鼠Mus musculus、黑腹果蝇Drosophila melanogaster等物种的FAR聚为一支;成功构建pET-30a eGFP/EpelFAR3原核表达质粒,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21感受态细胞,在浓度为0.05 mmol·L^(-1)的异丙基硫代半乳糖苷诱导6 h后有较高的蛋白表达量;经Western blot验证,表达蛋白分子量与预估蛋白分子量符合;质谱分析蛋白质分值为3 900,肽段覆盖度74%,所得肽段与理论序列相符;利用底物C24脂酰辅酶A、C26脂酰辅酶A、C28脂酰辅酶A和C30脂酰辅酶A对原核表达蛋白进行活性分析,利用气相色谱进行蛋白活性验证,没有理论产物相应脂肪醇的生成。本研究中白蜡虫far3 cDNA ORF的获得及原核表达的实现,为进一步的功能和组织表达定位研究奠定了基础。 展开更多

关键词 白蜡虫 脂酰辅酶A还原酶 CDNA末端快速扩增技术 原核表达 酶活分析

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大豆基因组中OSCA基因家族的进化和表达分析 被引量：13

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作者 李建伟 杨珺凯 +4 位作者 贾博为 孙明哲 刘瑀 殷奎德 孙晓丽 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期589-599,共11页

OSCA是钙通透性阳离子通道蛋白,在高渗胁迫感应中发挥重要的作用。本研究利用生物信息,筛选并鉴定出21个大豆OSCA家族成员。通过染色体定位及同源性分析表明,OSCA家族成员分布在15条染色体上,且存在大量的复制现象;通过Ka/Ks分析表明大... OSCA是钙通透性阳离子通道蛋白,在高渗胁迫感应中发挥重要的作用。本研究利用生物信息,筛选并鉴定出21个大豆OSCA家族成员。通过染色体定位及同源性分析表明,OSCA家族成员分布在15条染色体上,且存在大量的复制现象;通过Ka/Ks分析表明大豆OSCA家族基因的进化经受纯化选择压力。通过构建系统进化树,将大豆OSCA家族分为2个亚家族,第一亚家族又分为三组(GroupⅠ~Ⅲ),且各组内成员具有相似的内含子-外显子组成模式。保守性分析结果表明,大豆OSCA基因家族很保守,都包含3个功能结构域(即Late exocytosis,Cytosolic domain of 10TM putative phosphate transporter和Calcium-dependent channel);进一步组织表达分析结果表明,OSCA基因家族在不同组织的表达量不同。盐碱胁迫表达模式分析表明,OSCA3.1上调表达变化倍数最大。进一步的启动子分析结果表明,这些盐碱胁迫应答的基因启动子中存在着多种不同的胁迫响应元件,其中干旱和ABA应答相关的元件较多。以上结果为OSCA基因家族提供了新的有价值的信息,并为后续研究提供了重要参考。 展开更多

关键词 大豆 OSCA 家族分析 表达分析

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猪源IRAV的克隆、表达及单克隆抗体的制备

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作者 王桦 焦亚娟 +10 位作者 孔宁 孙大格 董苏洁 陈晓勇 翟焕杰 童武 郑浩 于海 虞凌雪 童光志 单同领 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期126-134,共9页

干扰素调节的抗病毒基因(IRAV)是近年来被发现的一种具有抗病毒活性的新型干扰素刺激基因,其对登革热病毒的增殖具有良好的抑制作用,但目前鲜有猪源IRAV基因的研究。本研究,从PK-15细胞中克隆了IRAV全长的cDNA。猪源IRAV cDNA全长为1241... 干扰素调节的抗病毒基因(IRAV)是近年来被发现的一种具有抗病毒活性的新型干扰素刺激基因,其对登革热病毒的增殖具有良好的抑制作用,但目前鲜有猪源IRAV基因的研究。本研究,从PK-15细胞中克隆了IRAV全长的cDNA。猪源IRAV cDNA全长为1241 bp,其中包含858 bp的开放阅读框,编码一个大小为285个氨基酸的多肽,定位于细胞质。将猪源IRAV蛋白在BL21(DE3)中诱导表达,经纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,最终获得5株分泌猪源IRAV单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2B10、2G12、2H1、5A8和2C5。将获得的分泌性抗IRAV单克隆抗体经Western blot和间接免疫荧光试验分析后,确定该抗体可以与PK-15细胞中过表达的猪源IRAV发生特异性反应。本研究成功制备针对猪源IRAV的单克隆抗体,为后续深入研究猪源IRAV的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 猪源IRAV 系统发育分析 表达 定位 单克隆抗体

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巨桉EgrWOX5基因的克隆、表达分析与超表达载体构建

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作者 徐双 曾炳山 范春节 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第10期1957-1962,共6页

以巨桉(Eucalyptus grandis)EG5无性系为试验材料,通过RT-PCR技术从中克隆得到了1个巨桉WOX家族基因成员的CDS序列,命名为Egr WOX5(Gen Bank登录号为KF964019)。该基因全长为543 bp,编码181个氨基酸,具有WOX基因家族最保守的特征结构域-... 以巨桉(Eucalyptus grandis)EG5无性系为试验材料,通过RT-PCR技术从中克隆得到了1个巨桉WOX家族基因成员的CDS序列,命名为Egr WOX5(Gen Bank登录号为KF964019)。该基因全长为543 bp,编码181个氨基酸,具有WOX基因家族最保守的特征结构域-Homeobox domain(HD)结构域;其氨基酸序列与草本植物的拟南芥At WOX5基因和木本植物杨树Ptr WOX5基因的氨基酸序列有较高的相似性。组织表达分析结果显示,Egr WOX5基因特异性地在巨桉EG5的根组织中表达。这些结果间接或直接地说明Egr WOX5在巨桉根组织的发育过程中发挥重要作用。本研究还利用Gateway技术成功构建了Egr WOX5基因的超表达载体,为后续基因功能的进一步鉴定奠定基础。 展开更多

关键词 巨桉 WOX5 基因克隆 表达分析 超表达载体构建

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桑树磷脂酶MaPLA1-2D亚型4个基因的克隆与胁迫应答分析

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作者 郝博文 李瑞卿 +3 位作者 夏宇 尚姝婷 李文强 张敏娟 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1107-1116,共10页

磷脂酶(phospholipase)是一类在植物生长发育和胁迫应答中起重要调控作用的磷脂水解酶,也是一类重要的信号转导酶。而磷脂酶A1(PLA1)在植物应答生物胁迫和非生物胁迫中的功能研究鲜见报道。研究从桑树(Morus alba L.)中克隆了磷脂酶PLA1... 磷脂酶(phospholipase)是一类在植物生长发育和胁迫应答中起重要调控作用的磷脂水解酶,也是一类重要的信号转导酶。而磷脂酶A1(PLA1)在植物应答生物胁迫和非生物胁迫中的功能研究鲜见报道。研究从桑树(Morus alba L.)中克隆了磷脂酶PLA1的1个亚型MaPLA1-2D基因,对其进行了序列分析、组织表达、胁迫诱导表达和蛋白亚细胞定位分析。结果表明,桑树PLA1-2D亚型基因包括4个成员,命名为MaPLA1-2D.1~MaPLA1-2D.4。4个基因在桑树根和叶中高水平表达,蛋白亚细胞定位在叶绿体。序列和进化分析表明MaPLA1-2D基因4个成员与拟南芥AtDAD1基因的保守结构域序列具有较高相似度且进化关系紧密。MaPLA1-2D基因4个成员的启动子含有多种胁迫应答顺式元件和激素响应元件;胁迫诱导表达模式分析表明MaPLA1-2D基因表达受干旱和脱落酸处理显著诱导。以上结果说明,MaPLA1-2D基因与拟南芥DAD同源,可能在桑树非生物胁迫应答中发挥重要功能。 展开更多

关键词 桑树 磷脂酶A1 MaPLA1-2D 基因克隆 表达分析 非生物胁迫

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