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蛇毒类凝血酶的纯化及鉴定
被引量：
5
1
作者
段涛
程波
+1 位作者
王旻
孔毅
《化学与生物工程》
CAS
2006年第7期40-41,62,共3页
采用Source 30Q及Phenyl sepharose HP柱层析进行纯化,并用体外MTT实验研究了蛇毒类凝血酶抗肿瘤转移作用。结果得到SDS-PAGE条带均一、分子量为27.6 ku的类凝血酶I11-H2,体外MTT实验证明,I11-H2具有较理想的抗肿瘤转移作用。
关键词
蛇毒类凝血酶
纯化
抗肿瘤转移
在线阅读
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职称材料
基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱法检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量
被引量：
8
2
作者
咸瑞卿
杭宝建
+4 位作者
巩丽萍
王聪聪
张迅杰
彭丽
石峰
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期810-816,共7页
蛇毒血凝酶类药物是以蝮蛇蛇毒为原料制备的止血药,主要活性成分为蛇毒类凝血酶(svTLEs)。不同蛇种来源的svTLEs结构不同,止血机制不同,药理作用也存在差异,因此准确鉴别蛇毒种属来源和svTLEs含量对于保障该类产品的质量至关重要。研究...
蛇毒血凝酶类药物是以蝮蛇蛇毒为原料制备的止血药,主要活性成分为蛇毒类凝血酶(svTLEs)。不同蛇种来源的svTLEs结构不同,止血机制不同,药理作用也存在差异,因此准确鉴别蛇毒种属来源和svTLEs含量对于保障该类产品的质量至关重要。研究基于蛋白质组学技术,筛选出了具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLE特征肽,并建立了基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量的方法。采用胰蛋白酶对纯化的矛头蝮蛇svTLE进行酶解,利用纳升液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(Nano LC-Q-Exactive-MS)和Proteome Discoverer^(2).2软件分别进行多肽的检测和鉴定,通过BLAST搜索与Uniprot数据库对比分析,筛选出具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLEs特征肽“EAYNGLPAK”。针对该特征肽对酶解温度、酶解时间和酶用量等样品前处理方法进行了优化,利用超高效液相色谱-串联质谱,以m/z 481.9>315.2和481.9>485.2作为检测离子对,采用ESI+模式进行了多反应监测(MRM)定性定量分析。结果显示,特征肽在2.5~30 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)大于0.9996,多水平加标回收率范围为95.5%~101.9%,各水平平行测定结果的相对标准偏差(RSD)为1.1%~3.2%,完全能够满足实际样品检测需求。方法简便快捷,灵敏度高,专属性强,可用于矛头蝮蛇蛇毒种属鉴别及svTLE含量测定,从源头保证血凝酶类产品的质量,并可为其他蛇毒类产品的质量控制提供参考。
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关键词
超高效液相色谱-串联质谱
特征肽
蛇毒类凝血酶
矛头蝮蛇
蛇毒
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职称材料
题名
蛇毒类凝血酶的纯化及鉴定
被引量：
5
1
作者
段涛
程波
王旻
孔毅
机构
广东药学院
武汉工程大学
中国药科大学
出处
《化学与生物工程》
CAS
2006年第7期40-41,62,共3页
文摘
采用Source 30Q及Phenyl sepharose HP柱层析进行纯化,并用体外MTT实验研究了蛇毒类凝血酶抗肿瘤转移作用。结果得到SDS-PAGE条带均一、分子量为27.6 ku的类凝血酶I11-H2,体外MTT实验证明,I11-H2具有较理想的抗肿瘤转移作用。
关键词
蛇毒类凝血酶
纯化
抗肿瘤转移
Keywords
snake venom thrombin-like enzyme（svtle）
purification
tumor anti-metastasis
分类号
Q814.1 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱法检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量
被引量：
8
2
作者
咸瑞卿
杭宝建
巩丽萍
王聪聪
张迅杰
彭丽
石峰
机构
山东省食品药品检验研究院
山东大学药学院
华润双鹤利民药业(济南)有限公司质量部
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期810-816,共7页
基金
国家药典委员会药品标准制修订研究课题(2019H04).
文摘
蛇毒血凝酶类药物是以蝮蛇蛇毒为原料制备的止血药,主要活性成分为蛇毒类凝血酶(svTLEs)。不同蛇种来源的svTLEs结构不同,止血机制不同,药理作用也存在差异,因此准确鉴别蛇毒种属来源和svTLEs含量对于保障该类产品的质量至关重要。研究基于蛋白质组学技术,筛选出了具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLE特征肽,并建立了基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量的方法。采用胰蛋白酶对纯化的矛头蝮蛇svTLE进行酶解,利用纳升液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(Nano LC-Q-Exactive-MS)和Proteome Discoverer^(2).2软件分别进行多肽的检测和鉴定,通过BLAST搜索与Uniprot数据库对比分析,筛选出具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLEs特征肽“EAYNGLPAK”。针对该特征肽对酶解温度、酶解时间和酶用量等样品前处理方法进行了优化,利用超高效液相色谱-串联质谱,以m/z 481.9>315.2和481.9>485.2作为检测离子对,采用ESI+模式进行了多反应监测(MRM)定性定量分析。结果显示,特征肽在2.5~30 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)大于0.9996,多水平加标回收率范围为95.5%~101.9%,各水平平行测定结果的相对标准偏差(RSD)为1.1%~3.2%,完全能够满足实际样品检测需求。方法简便快捷,灵敏度高,专属性强,可用于矛头蝮蛇蛇毒种属鉴别及svTLE含量测定,从源头保证血凝酶类产品的质量,并可为其他蛇毒类产品的质量控制提供参考。
关键词
超高效液相色谱-串联质谱
特征肽
蛇毒类凝血酶
矛头蝮蛇
蛇毒
Keywords
ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UHPLC-MS/MS)
marker peptide
snake
venom
thrombin-like
enzyme
s(
svtle
s)
Bothrops atrox
snake
venom
分类号
O658 [理学—分析化学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蛇毒类凝血酶的纯化及鉴定
段涛
程波
王旻
孔毅
《化学与生物工程》
CAS
2006
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱法检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量
咸瑞卿
杭宝建
巩丽萍
王聪聪
张迅杰
彭丽
石峰
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2022
8
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职称材料
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