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水貂犬瘟热病毒受体SLAM的原核表达 被引量:6
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作者 王聪 张洪亮 +3 位作者 黄娟 靳继惠 王怡男 单虎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第2期68-71,共4页
为了获得犬瘟热病毒受体信号淋巴激活分子(SLAM)蛋白,本试验以pMD18-T-SLAM为模板,应用PCR方法扩增得到水貂SLAM基因,将SLAM基因连接到经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后的pGEX-6p-1原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-6p-1-SLAM,转化至大肠埃... 为了获得犬瘟热病毒受体信号淋巴激活分子(SLAM)蛋白,本试验以pMD18-T-SLAM为模板,应用PCR方法扩增得到水貂SLAM基因,将SLAM基因连接到经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后的pGEX-6p-1原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-6p-1-SLAM,转化至大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果表明,目的基因插入位置和阅读框正确,经诱导成功表达出分子质量约为63.2ku的SLAM-GST融合蛋白,该融合蛋白能与鼠抗GST标签单克隆抗体发生特异性反应,具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 受体 信号淋巴激活分子 原核表达 水貂
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稳定表达山羊SLAM受体的BHK-21细胞系的建立及应用 被引量:3
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作者 张家林 李翠翠 +3 位作者 谢梅梅 王子龙 陈伟业 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期506-509,共4页
信号淋巴激活分子(SLAM)又称为CD150,是小反刍兽疫病毒(PPRV)和犬瘟热病毒(CDV)等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞的主要受体,在病毒侵入细胞中发挥重要作用。为建立稳定表达山羊SLAM(g SLAM)的真核细胞系,本研究将人工合成的g SLAM基因克... 信号淋巴激活分子(SLAM)又称为CD150,是小反刍兽疫病毒(PPRV)和犬瘟热病毒(CDV)等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞的主要受体,在病毒侵入细胞中发挥重要作用。为建立稳定表达山羊SLAM(g SLAM)的真核细胞系,本研究将人工合成的g SLAM基因克隆至真核表达质粒p IRESpuro3中,并在该基因的3'端引入Flag标签序列作为分子标记,构建了重组质粒p IRES3-g SLAM。将该重组质粒转染BHK-21细胞,经嘌呤霉素加压筛选及采用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组PPRV病毒(r PPRV/GFP)感染鉴定后,筛选到稳定表达g SLAM基因的细胞系。r PPRV/GFP感染和western blot鉴定表明,无论是否有嘌呤霉素压力的存在,该细胞系在传代至第20代,仍能稳定表达g SLAM蛋白。由于g SLAM氨基酸序列与犬的同源性较高,以表达GFP重组CDV强毒株(r CDV/GFP)感染该细胞系,病毒可以感染且能形成明显的细胞病变,表明该细胞系可用于CDV强毒分离和致弱机制等相关研究。 展开更多
关键词 信号淋巴细胞激活分子 BHK-21细胞 小反刍兽疫 犬瘟热 病毒分离
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小反刍兽疫病毒血凝素蛋白与受体蛋白SLAM的相互作用 被引量:3
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作者 蒙学莲 窦永喜 +2 位作者 朱学亮 骆学农 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期426-433,共8页
旨在利用免疫共沉淀技术验证小反刍兽疫病毒血凝素蛋白和受体蛋白SLAM间的相互作用。鉴于截短的H蛋白仍具有正常的与细胞受体结合的能力,分别构建pcDNA3.1-tH真核表达载体和SLAM及其缺失突变体(m1-胞外区、m2-无信号肽胞外区、m3-胞外区... 旨在利用免疫共沉淀技术验证小反刍兽疫病毒血凝素蛋白和受体蛋白SLAM间的相互作用。鉴于截短的H蛋白仍具有正常的与细胞受体结合的能力,分别构建pcDNA3.1-tH真核表达载体和SLAM及其缺失突变体(m1-胞外区、m2-无信号肽胞外区、m3-胞外区N端29-136位氨基酸和m4-胞外区C端137-240位氨基酸)编码基因的pEGFP-N1系列真核表达载体,将测序正确的重组质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1细胞株,利用免疫共沉淀技术验证tH蛋白与SLAM蛋白相互作用的关键氨基酸区段。结果表明,成功构建了预期的重组表达载体,转染CHO细胞后目的蛋白正确表达;免疫共沉淀时,tH能与SLAM、m1、m2和m3蛋白发生反应,但没有与m4蛋白发生反应。由此可知,SLAM N端29-136位氨基酸是决定SLAM与PPRV H蛋白结合的关键氨基酸区段,这与麻疹病毒属其他宿主SLAM受体的研究结果一致。 展开更多
关键词 血凝素蛋白 slam 转染 免疫共沉淀 相互作用
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小反刍兽疫病毒疫苗毒株N75-1感染细胞源外泌体对山羊SLAM表达的影响 被引量:2
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作者 褚云馨 陈燕 +5 位作者 马雨晴 曾巍 陈松睿 赵治钤 王晶钰 齐雪峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2500-2508,共9页
淋巴细胞信号活化分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)在淋巴细胞的主要受体。本研究旨在探索PPRV感染细胞源外泌体对山羊SLAM表达的影响。通过荧光定量PCR法、流式细胞术和Western blot技术检测PPRV疫苗毒株N75-1感染山羊外周血单核细胞(... 淋巴细胞信号活化分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)在淋巴细胞的主要受体。本研究旨在探索PPRV感染细胞源外泌体对山羊SLAM表达的影响。通过荧光定量PCR法、流式细胞术和Western blot技术检测PPRV疫苗毒株N75-1感染山羊外周血单核细胞(PBMCs)源外泌体(Exo-PPRV)共育对接纳细胞(正常山羊PBMCs)中SLAM表达水平和细胞因子分泌水平的影响。结果表明,与正常细胞分泌外泌体(Exo-Mock)共育组相比,Exo-PPRV共培养组细胞SLAM mRNA和细胞表面表达水平均显著上调(P<0.05),TNF-α、IL-10和IFN-γ表达水平升高,而IFN-α水平降低(P<0.05)。进一步研究表明,Exo-PPRV中荷载高水平的PPRV H蛋白且可以将其传递至接纳细胞中,同时pcDNA3.1-H转染组中SLAM表达水平较pcDNA3.1对照转染组和未转染组明显升高。以上结果表明,PPRV感染PBMCs源外泌体对接纳细胞中SLAM表达水平具有显著正调控作用,外泌体中载荷高水平PPRV H蛋白是其调控接纳细胞SLAM表达的关键分子之一。 展开更多
关键词 外泌体 小反刍兽疫病毒 山羊PBMCs 淋巴细胞信号活化分子
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犬瘟热病毒血凝素蛋白功能研究进展 被引量:1
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作者 胡焱 吴姣榕 《现代畜牧兽医》 2024年第5期82-86,共5页
犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染动物导致发病的一种烈性传染病,宿主范围广泛,感染发病的动物出现复杂的临床症状,死亡率高。血凝素(H)蛋白是CDV结构蛋白之一,具有主要的特异性抗原位点,可与信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)或上皮细... 犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染动物导致发病的一种烈性传染病,宿主范围广泛,感染发病的动物出现复杂的临床症状,死亡率高。血凝素(H)蛋白是CDV结构蛋白之一,具有主要的特异性抗原位点,可与信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)或上皮细胞黏附蛋白Nectin-4发生相互作用,介导病毒的吸附、出芽等,还与CDV跨动物种属传播具有密切联系。文章对CDV H蛋白功能及特点进行概述,围绕H蛋白对CDV的致病性及疫苗研究进展进行了讨论,以期为H蛋白研究及CD防控提供参考。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 血凝素蛋白 信号传导淋巴细胞激活分子(slam) Nectin-4 跨物种传播
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犬瘟热病毒细胞受体研究进展 被引量:4
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作者 苏建青 褚秀玲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期194-199,共6页
犬瘟热病毒是一种引起犬类、毛皮动物、野生动物和部分海洋哺乳动物发生多系统感染的病毒性传染病。犬瘟热的宿主范围和组织嗜性主要由其感染动物的细胞表面受体决定。目前,已经确认的犬瘟热受体有信号淋巴细胞激活因子。为了更好地对... 犬瘟热病毒是一种引起犬类、毛皮动物、野生动物和部分海洋哺乳动物发生多系统感染的病毒性传染病。犬瘟热的宿主范围和组织嗜性主要由其感染动物的细胞表面受体决定。目前,已经确认的犬瘟热受体有信号淋巴细胞激活因子。为了更好地对犬瘟热病毒的受体进行研究,就当前犬瘟热病毒的受体研究进行综述。 展开更多
关键词 犬瘟热 受体 信号淋巴细胞激活因子
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