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枯草杆菌纤溶酶基因的克隆及表达
被引量:
8
1
作者
罗文华
郭勇
韩双艳
《华南理工大学学报(自然科学版)》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2007年第11期115-119,共5页
为了提高豆豉纤溶酶(DFE)的表达产量,采用PCR方法从高纤溶活性的枯草芽孢杆菌DC12的基因组中扩增获得DFE基因,将含有启动子至3非翻译区的全长1400 bp基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3,构建了DFE基因的表达质粒,化学转化枯草杆菌WB...
为了提高豆豉纤溶酶(DFE)的表达产量,采用PCR方法从高纤溶活性的枯草芽孢杆菌DC12的基因组中扩增获得DFE基因,将含有启动子至3非翻译区的全长1400 bp基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3,构建了DFE基因的表达质粒,化学转化枯草杆菌WB800获得了DFE的重组表达菌.试验结果表明:DFE基因在自身启动子驱动下,在蛋白酶缺陷型的枯草杆菌中获得了高活性的分泌表达;重组表达菌株培养30 h后,培养物上清液中的纤溶酶活性最高可达690U/mL.
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关键词
豆豉纤溶酶
枯草杆菌
基因克隆
表达
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职称材料
豆豉纤溶酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
被引量:
5
2
作者
吕美云
张新
陆云华
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第6期2270-2271,共2页
[目的]为豆豉纤溶酶的进一步研究与应用奠定基础。[方法]以从芽孢杆菌中提取的总DNA为模板,根据GenBank的豆豉纤溶酶基因(AY720895.2)DNA序列设计1对引物,克隆豆豉纤溶酶基因并进行序列测定。构建毕赤酵母表达载体pL3,在毕赤酵母中表达...
[目的]为豆豉纤溶酶的进一步研究与应用奠定基础。[方法]以从芽孢杆菌中提取的总DNA为模板,根据GenBank的豆豉纤溶酶基因(AY720895.2)DNA序列设计1对引物,克隆豆豉纤溶酶基因并进行序列测定。构建毕赤酵母表达载体pL3,在毕赤酵母中表达豆豉纤溶酶基因。[结果]经PCR扩增可获得约1.1 kb的DNA片段。序列分析表明所克隆DNA片段包含1个1089 bp的开放阅读框,编码363个氨基酸。该克隆基因与所发表的豆豉纤溶酶基因序列的核苷酸序列同源性为98%,而氨基酸序列同源性达100%。[结论]所克隆的豆豉溶纤酶基因在毕赤酵母中成功表达,且表达产物具有正常的生物学活性。
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关键词
豆豉纤溶酶
基因克隆
表达
毕赤酵母
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职称材料
Bacillus sp.nov SK006中纤维蛋白溶解酶的克隆及其在大肠杆菌中的表达
3
作者
秦芸桦
沐万孟
江波
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第9期22-24,共3页
利用PCR技术从Bacillus sp.nov SK006中扩增得到纤维蛋白溶解酶(Fibrinolitic enzymes,FE)基因的DNA片段,将其连接到pMD-T载体上,经测序后克隆至载体PET-22b(+),转化至E.coli BL21(DE3)中,得到的重组菌能高效表达FE。诱导表达后,SDS-PAG...
利用PCR技术从Bacillus sp.nov SK006中扩增得到纤维蛋白溶解酶(Fibrinolitic enzymes,FE)基因的DNA片段,将其连接到pMD-T载体上,经测序后克隆至载体PET-22b(+),转化至E.coli BL21(DE3)中,得到的重组菌能高效表达FE。诱导表达后,SDS-PAGE显示,重组FE分子量约为28 ku。
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关键词
虾酱
纤维蛋白溶解酶
克隆
表达
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职称材料
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
被引量:
2
4
作者
王志会
谢和
《山地农业生物学报》
2019年第2期1-7,共7页
本研究以本实验室曾在酒曲、酒糟、窖泥等样品中分离的具有酱香味的13株菌株作为出发菌株,经脱脂奶粉平板、纤维蛋白双层平板筛选出纤溶酶活性最高的菌株GZHZ V-8 ,结合形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析,GZHZ V-8 菌...
本研究以本实验室曾在酒曲、酒糟、窖泥等样品中分离的具有酱香味的13株菌株作为出发菌株,经脱脂奶粉平板、纤维蛋白双层平板筛选出纤溶酶活性最高的菌株GZHZ V-8 ,结合形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析,GZHZ V-8 菌株为解淀粉芽孢杆菌( Bacillus amyloliquefaciens )。以GZHZ V-8 菌株总DNA为模板扩增出纤溶酶基因的编码区,与pMD18-T载体连接、转化至大肠杆菌( Escherichia coli ) DH5α,分析表明纤溶酶基因开放阅读框包含1092 bp碱基,编码363个氨基酸。纤溶酶基因与表达载体pET-22b(+)连接转化至 E.coli BL21中表达,表达菌株经IPTG诱导表达分泌活性纤溶酶,培养后测得发酵上清液、菌体细胞破碎上清液和菌体细胞破碎沉淀的纤溶酶活力分别为613.26 IU/mL、407.38 IU/mL、993.12 IU/mL。
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关键词
纤溶酶
基因克隆
序列分析
表达
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职称材料
题名
枯草杆菌纤溶酶基因的克隆及表达
被引量:
8
1
作者
罗文华
郭勇
韩双艳
机构
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《华南理工大学学报(自然科学版)》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2007年第11期115-119,共5页
基金
广东省自然科学基金博士启动基金资助项目(05300230)
文摘
为了提高豆豉纤溶酶(DFE)的表达产量,采用PCR方法从高纤溶活性的枯草芽孢杆菌DC12的基因组中扩增获得DFE基因,将含有启动子至3非翻译区的全长1400 bp基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3,构建了DFE基因的表达质粒,化学转化枯草杆菌WB800获得了DFE的重组表达菌.试验结果表明:DFE基因在自身启动子驱动下,在蛋白酶缺陷型的枯草杆菌中获得了高活性的分泌表达;重组表达菌株培养30 h后,培养物上清液中的纤溶酶活性最高可达690U/mL.
关键词
豆豉纤溶酶
枯草杆菌
基因克隆
表达
Keywords
Douchi
fibrinolytic enzyme
Bacillus subtilis
gene
cloning
expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
豆豉纤溶酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
被引量:
5
2
作者
吕美云
张新
陆云华
机构
宜春学院化学与生物工程学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第6期2270-2271,共2页
基金
江西省教育厅科研项目(2007-314)
文摘
[目的]为豆豉纤溶酶的进一步研究与应用奠定基础。[方法]以从芽孢杆菌中提取的总DNA为模板,根据GenBank的豆豉纤溶酶基因(AY720895.2)DNA序列设计1对引物,克隆豆豉纤溶酶基因并进行序列测定。构建毕赤酵母表达载体pL3,在毕赤酵母中表达豆豉纤溶酶基因。[结果]经PCR扩增可获得约1.1 kb的DNA片段。序列分析表明所克隆DNA片段包含1个1089 bp的开放阅读框,编码363个氨基酸。该克隆基因与所发表的豆豉纤溶酶基因序列的核苷酸序列同源性为98%,而氨基酸序列同源性达100%。[结论]所克隆的豆豉溶纤酶基因在毕赤酵母中成功表达,且表达产物具有正常的生物学活性。
关键词
豆豉纤溶酶
基因克隆
表达
毕赤酵母
Keywords
Douchi
fibrinolytic enzyme
Gene
cloning
expression
Pichia pastoris
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
Bacillus sp.nov SK006中纤维蛋白溶解酶的克隆及其在大肠杆菌中的表达
3
作者
秦芸桦
沐万孟
江波
机构
江南大学食品科学与技术国家重点实验室
a江南大学食品学院
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第9期22-24,共3页
基金
国家自然科学基金(20976073)
江南大学内自主科研项目(JUSRP21107)
文摘
利用PCR技术从Bacillus sp.nov SK006中扩增得到纤维蛋白溶解酶(Fibrinolitic enzymes,FE)基因的DNA片段,将其连接到pMD-T载体上,经测序后克隆至载体PET-22b(+),转化至E.coli BL21(DE3)中,得到的重组菌能高效表达FE。诱导表达后,SDS-PAGE显示,重组FE分子量约为28 ku。
关键词
虾酱
纤维蛋白溶解酶
克隆
表达
Keywords
shrimp paste
,
fibrinolytic enzyme
,
cloning
,
expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
被引量:
2
4
作者
王志会
谢和
机构
贵州大学生命科学学院
出处
《山地农业生物学报》
2019年第2期1-7,共7页
文摘
本研究以本实验室曾在酒曲、酒糟、窖泥等样品中分离的具有酱香味的13株菌株作为出发菌株,经脱脂奶粉平板、纤维蛋白双层平板筛选出纤溶酶活性最高的菌株GZHZ V-8 ,结合形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析,GZHZ V-8 菌株为解淀粉芽孢杆菌( Bacillus amyloliquefaciens )。以GZHZ V-8 菌株总DNA为模板扩增出纤溶酶基因的编码区,与pMD18-T载体连接、转化至大肠杆菌( Escherichia coli ) DH5α,分析表明纤溶酶基因开放阅读框包含1092 bp碱基,编码363个氨基酸。纤溶酶基因与表达载体pET-22b(+)连接转化至 E.coli BL21中表达,表达菌株经IPTG诱导表达分泌活性纤溶酶,培养后测得发酵上清液、菌体细胞破碎上清液和菌体细胞破碎沉淀的纤溶酶活力分别为613.26 IU/mL、407.38 IU/mL、993.12 IU/mL。
关键词
纤溶酶
基因克隆
序列分析
表达
Keywords
fibrinolytic
enzyme
gene
cloning
sequence analysis
expression
分类号
Q939.9 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
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被引量
操作
1
枯草杆菌纤溶酶基因的克隆及表达
罗文华
郭勇
韩双艳
《华南理工大学学报(自然科学版)》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2007
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
豆豉纤溶酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
吕美云
张新
陆云华
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
Bacillus sp.nov SK006中纤维蛋白溶解酶的克隆及其在大肠杆菌中的表达
秦芸桦
沐万孟
江波
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达
王志会
谢和
《山地农业生物学报》
2019
2
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