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三重靶向介导的Smac过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期进程的影响 被引量：1
1
作者 齐亚莉 刘扬 +3 位作者 梁硕 龚守良 王志成 刘威武 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期90-94,共5页
目的:利用基因重组技术获得三重靶向性Smac过表达的条件复制型腺病毒,探讨其对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期的影响。方法:利用重组技术构建Smac过表达载体pShuttle-Egr1-Smac-HREhTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,与骨架载体pAdEasy在BJ5183(Ad... 目的:利用基因重组技术获得三重靶向性Smac过表达的条件复制型腺病毒,探讨其对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期的影响。方法:利用重组技术构建Smac过表达载体pShuttle-Egr1-Smac-HREhTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,与骨架载体pAdEasy在BJ5183(AdEasy-1+)菌中进行重组,获得Smac过表达的条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac,感染MDA-MB-231细胞后,利用化学试剂氯化钴模拟肿瘤细胞乏氧状态,设立对照组、CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组,并根据是否进行4Gy照射,每组分为未照射组和照射组,共8个实验组。利用Western blotting法检测各组细胞Smac蛋白的表达,利用流式细胞术检测细胞凋亡率和不同周期进程细胞百分率。结果:Western blotting法检测,经条件复制型腺病毒CRAd.pESmac感染、乏氧和照射后,Smac蛋白表达水平增加,CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组Smac蛋白表达水平最高。流式细胞术检测,与对照组比较,CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01);与相应未照射组比较,4Gy照射后CARd.pE-Smac+4Gy组、乏氧+4Gy组和CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01),CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组升高最为明显,且S期和G2/M期细胞百分率明显增加(P<0.05或P<0.01),与诱导凋亡的结果有相似的趋势。结论:在条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac感染MDA-MB-231细胞、并经乏氧和辐射处理后,实现了三重靶向介导的Smac过表达,其具有促进肿瘤细胞凋亡和诱导G2/M期细胞阻滞的作用。 展开更多
关键词 乏氧 辐射 第2个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂 乳腺肿瘤 细胞凋亡
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α-细辛醚调控GADD153和Smac mRNA表达诱导人食管癌细胞株Eca-109凋亡研究 被引量：5
2
作者 张妍 何航 +1 位作者 王丽 朱艳琴 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第10期1046-1049,共4页
目的α-细辛醚具有止咳、平喘、解痉、镇静、抗惊厥等功效,文中旨在探讨α-细辛醚对人食管癌细胞株Eca-109促凋亡作用,以及对生长抑制DNA损伤基因153(GADD153)和第2个线粒体来源的半胱氨酸酶的激活剂(Smac)表达的影响。方法体外培养人... 目的α-细辛醚具有止咳、平喘、解痉、镇静、抗惊厥等功效,文中旨在探讨α-细辛醚对人食管癌细胞株Eca-109促凋亡作用,以及对生长抑制DNA损伤基因153(GADD153)和第2个线粒体来源的半胱氨酸酶的激活剂(Smac)表达的影响。方法体外培养人食管癌Eca-109细胞,以加入药物不同分为空白对照组、5-氟尿嘧啶组(5-FU,500μg/m L)和不同剂量的α-细辛醚(25、50、100μg/m L);继续培养后,采用MTT法检测细胞增殖率,Annexin V-PI法检测细胞凋亡率,Western blot和实时荧光定量PCR法分别检测GADD153、Smac蛋白及mRNA的相对表达量。结果 5-氟尿嘧啶组、α-细辛醚25μg/m L组、α-细辛醚50μg/m L组、α-细辛醚/100μg/m L组细胞凋亡率[(15.59±0.48)%、(4.61±1.13)%、(9.48±1.09)%、(12.41±0.98)%]较空白对照组[(0.29±0.08)%]明显升高(P<0.05),与空白对照组比较,α-细辛醚组细胞GADD153、Smac蛋白及GADD153、Smac mRNA相对表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论α-细辛醚通过上调GADD153及Smac mRNA的表达,抑制人食管癌Eca-109细胞增殖,促进其凋亡,凋亡途径由内质网和线粒体通路共同介导。 展开更多
关键词 Α-细辛醚 生长抑制DNA损伤基因153 SMAC
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Smac在TRAIL诱导人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡中的作用 被引量：1
3
作者 金军 赵健 +5 位作者 李博华 张霞 张瑞萍 李晓东 钱卫珠 郭亚军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期87-89,共3页
目的 :初步研究 Smac在 TNF相关的凋亡诱导配体 (TNF- related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导的人骨肉瘤 Saos- 2细胞凋亡中的作用。 方法 :观察细胞形态变化和以琼脂糖凝胶电泳分析 TRAIL 作用的 Saos- 2细胞 DNA片段 ,利用流... 目的 :初步研究 Smac在 TNF相关的凋亡诱导配体 (TNF- related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导的人骨肉瘤 Saos- 2细胞凋亡中的作用。 方法 :观察细胞形态变化和以琼脂糖凝胶电泳分析 TRAIL 作用的 Saos- 2细胞 DNA片段 ,利用流式细胞术及细胞计数法比较 Smac或 Bcl- 2表达不同的细胞的凋亡程度 ,同时以 Western印迹半定量检测细胞胞质内Sm ac表达水平。结果 :Saos- 2细胞在 TRAIL 的作用下出现典型的凋亡样改变。在 TRAIL 作用 Saos- 2细胞时 ,Smac在胞质中的含量明显增加。在 TRAIL 作用 2 4 h后 ,Smac在 Saos- 2细胞中过表达 ,细胞凋亡率由 1 2 .7%增加到 31 .4 %。TRAIL 作用 Saos- 2细胞 4 8h后 ,转染 Bcl- 2的细胞与转染空载体的 Saos- 2细胞相比 ,凋亡率显著降低 (由 2 4 %降至 1 5 % ) ,且胞质中Sm ac的表达水平也明显降低。 结论 :在 TRAIL 诱导的凋亡中 Sm ac起促进作用 ,Bcl- 2可以通过阻止 Sm 展开更多
关键词 SMAC TRAIL 人骨肉瘤 SAOS-2 细胞凋亡 凋亡诱导配体
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UpIb启动子-Smac重组体促膀胱癌细胞凋亡的实验动物研究 被引量：1
4
作者 廖贵益 曾甫清 +2 位作者 王竞 顾朝辉 王智宇 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期398-400,共3页
目的:探讨携带Smac基因的膀胱癌细胞特异性表达质粒pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac用脂质体包裹后注射到实验动物瘤体内的表达及促癌细胞凋亡的效应。方法:将人膀胱癌细胞株BIU-87注射到Balb/c-nu/nu雄性裸鼠的皮下,构建膀胱癌皮下移植瘤... 目的:探讨携带Smac基因的膀胱癌细胞特异性表达质粒pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac用脂质体包裹后注射到实验动物瘤体内的表达及促癌细胞凋亡的效应。方法:将人膀胱癌细胞株BIU-87注射到Balb/c-nu/nu雄性裸鼠的皮下,构建膀胱癌皮下移植瘤模型。当移植瘤长至直径约0.5cm时,用脂质体将pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac包裹后隔天1次连续3次注射到瘤体内,间隔1天后,连续3天瘤体内注射适量丝裂霉素C诱导凋亡。设三组对照:单用脂质体质粒组、单用丝裂霉素C组和空白组。RT-PCR检测瘤组织Smac mRNA的表达,免疫组织化学法检测瘤组织Smac蛋白的表达,苏木素伊红染色镜检、DNA Ladder带凝胶电泳分析和TUNEL-荧光标记检测观察瘤组织癌细胞的凋亡情况。结果:膀胱癌裸鼠移植瘤模型构建成功。瘤体内注射脂质体包裹的pcDNA3.1-UpIbpro-moter-Smac后,与未注射脂质体质粒的对照组比较,Smac的表达增强约2.1倍;先注射脂质体质粒后丝裂霉素C处理和单用丝裂霉素C处理的瘤组织均可见典型的凋亡细胞,但前者的凋亡率为49.8%,显著高于后者的23.5%(P<0.01)。结论:膀胱癌裸鼠移植瘤模型瘤体内直接注射脂质体包裹的pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac后,所携带的Smac基因能够在瘤组织中有效表达,并对丝裂霉素C诱导的瘤细胞凋亡有显著的促进作用。该质粒配合丝裂霉素C等凋亡诱导药物的应用,可望为膀胱癌的靶向基因治疗提供一新的治疗模式。 展开更多
关键词 线粒体促凋亡蛋白 膀眈肿瘤 基因治疗
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Smac合成肽靶向下调凋亡抑制蛋白XIAP提高胰腺癌细胞化疗敏感性 被引量：1
5
作者 杜冀晖 张厚德 +4 位作者 雷萍 苏卓娃 麦丽文 郑芳 龚非力 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第3期174-178,共5页
目的:探讨包含目的蛋白功能结构域的Smac合成肽能否增强胰腺癌细胞的化疗药物敏感性及其作用机制。方法:化学合成SmacN7细胞可穿透融合多肽,共沉淀实验观察SmacN7细胞穿透肽与胰腺癌Panc-1细胞内的XIAP的相互作用,应用流式细胞术检测Sma... 目的:探讨包含目的蛋白功能结构域的Smac合成肽能否增强胰腺癌细胞的化疗药物敏感性及其作用机制。方法:化学合成SmacN7细胞可穿透融合多肽,共沉淀实验观察SmacN7细胞穿透肽与胰腺癌Panc-1细胞内的XIAP的相互作用,应用流式细胞术检测SmacN7细胞穿透肽与顺铂、5-FU联用对Panc-1细胞凋亡的影响,MTT法检测SmacN7细胞穿透肽应用前后Panc-1细胞的化疗药物敏感性。结果:SmacN7融合多肽能与内源性XIAP结合,明显下调Panc-1细胞XIAP表达水平,显著增强顺铂或5-FU诱导的Panc-1细胞凋亡,使其对顺铂、5-FU的药物半数抑制浓度(IC50)分别降低1.98倍、2.62倍。结论:应用包含目的蛋白功能结构域的Smac合成肽能靶向下调胰腺癌Panc-1细胞XIAP表达,显著提高其化疗敏感性,为胰腺癌的生物治疗协同化疗提供了新思路。 展开更多
关键词 SMAC/DIABLO X-相关凋亡抑制蛋白 合成肽 胰腺癌 化疗敏感性
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非小细胞肺癌XIAP和Smac的表达与临床病理特征及预后的关系 被引量：8
6
作者 叶闻远 欧阳学农 余宗阳 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期444-448,共5页
目的:探讨XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)和Smac(second mitochondria-derived activator of cas-pase,Smac)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法:采... 目的:探讨XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)和Smac(second mitochondria-derived activator of cas-pase,Smac)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法:采用免疫组织化学法检测70例非小细胞肺癌组织及70例对应癌旁肺组织中XIAP、Smac的表达。结果:XIAP在70例NSCLC组织中有59例阳性表达,其中高表达16例;对应70例癌旁肺组织中有52例表达,其中高表达5例,两组XIAP表达强度比较差异有统计学意义(Z=-4.049,P<0.001);Smac在70例肺癌组织中有63例阳性表达,其中高(强阳性)表达32例;对应70例癌旁肺组织有53例表达,其中高(强阳性)表达5例,两组Smac表达强度比较差异有统计学意义(Z=-5.484,P<0.001)。NSCLC组织中XIAP、Smac的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织类型、分化程度、吸烟与否等无明显关系(P>0.05);但二者的表达均与临床分期、淋巴结转移与否有关系(P<0.05)。通过Kaplan-Meier法分析得出,XIAP和Smac在NSCLC中的表达与患者的预后均无明显关系(P>0.05)。结论:1)XIAP和Smac在非小细胞肺癌组织及其对应癌旁肺组织中均有表达,但存在表达量的差异。2)XIAP和Smac在非小细胞肺癌中的表达与患者的预后均无显著关系。 展开更多
关键词 X连锁凋亡抑制蛋白 第二个线粒体衍生的半胱天冬酶激活蛋白 非小细胞肺癌 免疫组化 预后
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富氢液对大鼠全脑缺血-再灌注损伤后XIAP和Smac的影响 被引量：3
7
作者 戴琼艳 惠康丽 +5 位作者 赵琳 张露 高宇 吴淋 龙云 段满林 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1118-1121,共4页
目的探讨富氢液对大鼠全脑缺血-再灌注损伤后X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAP)和第2个线粒体源胱天蛋白酶激活剂(Smac)的影响。方法成年雄性SD大鼠30只,随机均分为三组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)和富氢液组(H组)。采用经食管起搏诱... 目的探讨富氢液对大鼠全脑缺血-再灌注损伤后X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAP)和第2个线粒体源胱天蛋白酶激活剂(Smac)的影响。方法成年雄性SD大鼠30只,随机均分为三组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)和富氢液组(H组)。采用经食管起搏诱发室颤建立大鼠全脑缺血模型。H组于再灌注即刻和6h时腹腔注射富氢液5ml/kg,IR组同时腹腔注射等容量生理盐水。再灌注24h行神经功能缺损评分(NDS评分)后处死,应用HE染色,光镜下观察海马CA1区病理学改变,计数海马CA1区锥体细胞,Western blot法检测脑组织中caspase-9,XIAP和Smac的蛋白表达,免疫组化法检测海马CA1区caspase-3的表达。结果与S组比较,IR组NDS评分明显降低,海马CA1区正常锥体细胞数明显减少(P<0.05),再灌注24hXIAP表达减少,Smac和caspase-9表达明显增加(P<0.05);与IR组比较,H组大鼠神经功能损伤明显减轻,海马CA1区正常锥体细胞数明显增加(P<0.05),再灌注24hXIAP表达增加,Smac和caspase-9表达明显减少(P<0.05)。结论富氢液能有效减轻大鼠全脑缺血-再灌注损伤,其机制可能是促进XIAP和抑制Smac表达,提高XIAP/Smac比值,从而发挥脑保护的作用。 展开更多
关键词 氢 脑缺血-再灌注 凋亡 X连锁凋亡蛋白抑制剂 第2个线粒源胱天蛋白酶激活剂
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