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SCRIB通过激活JAK-STAT3信号通路对胶质母细胞瘤增殖、凋亡和自噬的影响
1
作者
姚晓含
王志清
+5 位作者
姚明辰
李丹阳
李赫阳
申心怡
张骞
韩滨
《西安交通大学学报(医学版)》
北大核心
2025年第5期852-859,共8页
目的探讨SCRIB在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)增殖、凋亡及自噬过程中的作用及其潜在机制。方法通过BEST(Biomarker Exploration of Solid Tumors)数据库分析SCRIB在GBM组织中的表达水平。采用慢病毒介导的shRNA干扰技术下调人GBM U8...
目的探讨SCRIB在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)增殖、凋亡及自噬过程中的作用及其潜在机制。方法通过BEST(Biomarker Exploration of Solid Tumors)数据库分析SCRIB在GBM组织中的表达水平。采用慢病毒介导的shRNA干扰技术下调人GBM U87、U251细胞中SCRIB的表达,并将细胞分为阴性对照组(mock)和SCRIB shRNA干扰组(kd1、kd2),利用Western blotting(WB)和qPCR技术检测SCRIB的表达。通过流式细胞术(FCM)检测EdU掺入率及细胞凋亡率。利用CCK-8实验检测U87、U251细胞的增殖活力,并通过WB检测增殖相关蛋白的表达。利用细胞免疫荧光(IF)实验检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,并进行多视野定量分析。利用WB检测LC3、p62及JAK-STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果与正常组织相比,GBM组织中SCRIB mRNA的表达水平显著上调(P<0.05)。FCM结果显示,SCRIB低表达的U87、U251细胞中,EdU掺入率显著降低(P<0.001),细胞凋亡率显著升高(P<0.001)。CCK-8实验结果表明,与mock组相比,SCRIB低表达组U87、U251细胞的增殖活力显著下降(P<0.001)。IF结果显示,SCRIB低表达组LC3的荧光聚集程度显著增强(P<0.001),p62的荧光聚集程度显著降低(P<0.001)。WB结果显示,与mock组相比,SCRIB低表达组p27、LC3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平升高,而C-Myc、Cyclin D1、MCM、PCNA、p62蛋白表达水平下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论SCRIB的低表达可能通过抑制JAK-STAT3信号通路,促进GBM细胞自噬、凋亡,进而抑制其增殖。
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关键词
胶质母细胞瘤(GBM)
scrib
增殖
凋亡
自噬
JAK-STAT3
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职称材料
VANGL2在人hUVEC细胞中初级纤毛装配和解聚的作用
被引量：
1
2
作者
郜双林
王俊华
+1 位作者
谢夏丹
生欣
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第7期820-831,共12页
动脉粥样硬化是心血管疾病的主要发病原因。大量研究显示,动脉粥样硬化的形成与内皮细胞的初级纤毛相关。探讨内皮细胞中的初级纤毛装配和解聚的机制,对于揭示动脉粥样硬化的发病机制具有重要的理论和实践意义。目前,作为平面细胞极化(P...
动脉粥样硬化是心血管疾病的主要发病原因。大量研究显示,动脉粥样硬化的形成与内皮细胞的初级纤毛相关。探讨内皮细胞中的初级纤毛装配和解聚的机制,对于揭示动脉粥样硬化的发病机制具有重要的理论和实践意义。目前,作为平面细胞极化(PCP)信号通路的特有组分VANGL平面细胞极性蛋白2(VANGL2)在内皮细胞中与初级纤毛相关的研究甚少。因此,本研究构建VANGL2的慢病毒稳定干扰和过表达人脐静脉内皮细胞(hUVEC)系。从形态学上对初级纤毛分布的情况进行标记,同时用免疫荧光对VANGL2可能相互作用的蛋白质进行共定位检测,并利用免疫印迹进一步对其下游蛋白质蓬乱蛋白(DVL2)、初级纤毛装配相关蛋白质巴特-比德尔综合征8(BBS8)和纤毛内转运系统88(IFT88)、初级纤毛解聚相关蛋白质运动蛋白家族成员2A(KIF2A)和143位点处丝氨酸磷酸化的蓬乱蛋白(pDVL2)进行检测,用免疫共沉淀检测与VANGL2、下游蛋白质DVL2相互作用的蛋白质。结果表明,免疫荧光标记初级纤毛的荧光图显示,过表达VANGL2后初级纤毛数量显著增多(P<0.05),其长度也较其他组更长,其定位方向更倾向于VANGL2富集的位置,并位于初级纤毛的基部。免疫荧光共定位显示,BBS8、IFT88均与VANGL2共定位,在过表达VANGL2组中均呈极性分布,PLK1也与VANGL2存在共定位情况,但整体上PLK1的表达量较低。免疫印迹结果显示,过表达VANGL2时,其下游蛋白质DVL2上调(P<0.01)。同时,初级纤毛解聚相关蛋白质KIF2A也上调(P<0.01)。此外,与初级纤毛解聚途径激活有关的pDVL2下调(P<0.05),初级纤毛装配相关的蛋白质BBS8、IFT88发生上调(P<0.01)。免疫共沉淀结果显示,VANGL2与DVL2存在相互作用关系,且VANGL2和DVL2均与KIF2A相互作用,但DVL2与KIF2A相互作用的程度较强。综上结果表明,VANGL2可能通过上调DVL2并增加DVL2与KIF2A的相互作用而促进初级纤毛的解聚过程。同时,通过下调pDVL2、上调初级纤毛装配相关蛋白质BBS8和IFT88而增加初级纤毛的装配过程。但在过表达VANGL2组中,初级纤毛装配的过程比解聚占优势,两者最终的平衡决定初级纤毛的发生情况,为进一步研究VANGL2在内皮细胞中初级纤毛装配和解聚的机制研究提供见解。
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关键词
VANGL平面细胞极性蛋白2
蓬乱蛋白
初级纤毛装配
初级纤毛解聚
平面细胞极化
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职称材料
题名
SCRIB通过激活JAK-STAT3信号通路对胶质母细胞瘤增殖、凋亡和自噬的影响
1
作者
姚晓含
王志清
姚明辰
李丹阳
李赫阳
申心怡
张骞
韩滨
机构
郑州大学第一附属医院医学研究中心
郑州大学第一临床医学院
郑州大学基础医学院
郑州大学第一附属医院放射治疗部
出处
《西安交通大学学报(医学版)》
北大核心
2025年第5期852-859,共8页
基金
河南省创新研发专项项目(No.HNGD2024005)。
文摘
目的探讨SCRIB在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)增殖、凋亡及自噬过程中的作用及其潜在机制。方法通过BEST(Biomarker Exploration of Solid Tumors)数据库分析SCRIB在GBM组织中的表达水平。采用慢病毒介导的shRNA干扰技术下调人GBM U87、U251细胞中SCRIB的表达,并将细胞分为阴性对照组(mock)和SCRIB shRNA干扰组(kd1、kd2),利用Western blotting(WB)和qPCR技术检测SCRIB的表达。通过流式细胞术(FCM)检测EdU掺入率及细胞凋亡率。利用CCK-8实验检测U87、U251细胞的增殖活力,并通过WB检测增殖相关蛋白的表达。利用细胞免疫荧光(IF)实验检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,并进行多视野定量分析。利用WB检测LC3、p62及JAK-STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果与正常组织相比,GBM组织中SCRIB mRNA的表达水平显著上调(P<0.05)。FCM结果显示,SCRIB低表达的U87、U251细胞中,EdU掺入率显著降低(P<0.001),细胞凋亡率显著升高(P<0.001)。CCK-8实验结果表明,与mock组相比,SCRIB低表达组U87、U251细胞的增殖活力显著下降(P<0.001)。IF结果显示,SCRIB低表达组LC3的荧光聚集程度显著增强(P<0.001),p62的荧光聚集程度显著降低(P<0.001)。WB结果显示,与mock组相比,SCRIB低表达组p27、LC3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平升高,而C-Myc、Cyclin D1、MCM、PCNA、p62蛋白表达水平下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论SCRIB的低表达可能通过抑制JAK-STAT3信号通路,促进GBM细胞自噬、凋亡,进而抑制其增殖。
关键词
胶质母细胞瘤(GBM)
scrib
增殖
凋亡
自噬
JAK-STAT3
Keywords
glioblastoma(GBM)
scribble
planar
cell
polarity
protein
(
scrib
)
proliferation
apoptosis
autophagy
JAK-STAT3
分类号
R739.4 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
VANGL2在人hUVEC细胞中初级纤毛装配和解聚的作用
被引量：
1
2
作者
郜双林
王俊华
谢夏丹
生欣
机构
遵义医科大学生物化学教研室
遵义医科大学附属口腔医院检验科
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第7期820-831,共12页
基金
国家自然科学基金(No.31360278)资助。
文摘
动脉粥样硬化是心血管疾病的主要发病原因。大量研究显示,动脉粥样硬化的形成与内皮细胞的初级纤毛相关。探讨内皮细胞中的初级纤毛装配和解聚的机制,对于揭示动脉粥样硬化的发病机制具有重要的理论和实践意义。目前,作为平面细胞极化(PCP)信号通路的特有组分VANGL平面细胞极性蛋白2(VANGL2)在内皮细胞中与初级纤毛相关的研究甚少。因此,本研究构建VANGL2的慢病毒稳定干扰和过表达人脐静脉内皮细胞(hUVEC)系。从形态学上对初级纤毛分布的情况进行标记,同时用免疫荧光对VANGL2可能相互作用的蛋白质进行共定位检测,并利用免疫印迹进一步对其下游蛋白质蓬乱蛋白(DVL2)、初级纤毛装配相关蛋白质巴特-比德尔综合征8(BBS8)和纤毛内转运系统88(IFT88)、初级纤毛解聚相关蛋白质运动蛋白家族成员2A(KIF2A)和143位点处丝氨酸磷酸化的蓬乱蛋白(pDVL2)进行检测,用免疫共沉淀检测与VANGL2、下游蛋白质DVL2相互作用的蛋白质。结果表明,免疫荧光标记初级纤毛的荧光图显示,过表达VANGL2后初级纤毛数量显著增多(P<0.05),其长度也较其他组更长,其定位方向更倾向于VANGL2富集的位置,并位于初级纤毛的基部。免疫荧光共定位显示,BBS8、IFT88均与VANGL2共定位,在过表达VANGL2组中均呈极性分布,PLK1也与VANGL2存在共定位情况,但整体上PLK1的表达量较低。免疫印迹结果显示,过表达VANGL2时,其下游蛋白质DVL2上调(P<0.01)。同时,初级纤毛解聚相关蛋白质KIF2A也上调(P<0.01)。此外,与初级纤毛解聚途径激活有关的pDVL2下调(P<0.05),初级纤毛装配相关的蛋白质BBS8、IFT88发生上调(P<0.01)。免疫共沉淀结果显示,VANGL2与DVL2存在相互作用关系,且VANGL2和DVL2均与KIF2A相互作用,但DVL2与KIF2A相互作用的程度较强。综上结果表明,VANGL2可能通过上调DVL2并增加DVL2与KIF2A的相互作用而促进初级纤毛的解聚过程。同时,通过下调pDVL2、上调初级纤毛装配相关蛋白质BBS8和IFT88而增加初级纤毛的装配过程。但在过表达VANGL2组中,初级纤毛装配的过程比解聚占优势,两者最终的平衡决定初级纤毛的发生情况,为进一步研究VANGL2在内皮细胞中初级纤毛装配和解聚的机制研究提供见解。
关键词
VANGL平面细胞极性蛋白2
蓬乱蛋白
初级纤毛装配
初级纤毛解聚
平面细胞极化
Keywords
VANGL
planar
cell
polarity
protein
2(VANGL2)
Dishevelled(DVL2)
primary cilia assembly
primary cilia depolymerization
planar
cell
polarity
(PCP)
分类号
Q512 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SCRIB通过激活JAK-STAT3信号通路对胶质母细胞瘤增殖、凋亡和自噬的影响
姚晓含
王志清
姚明辰
李丹阳
李赫阳
申心怡
张骞
韩滨
《西安交通大学学报(医学版)》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
VANGL2在人hUVEC细胞中初级纤毛装配和解聚的作用
郜双林
王俊华
谢夏丹
生欣
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
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