Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路调控缺血性卒中的研究进展

1

作者 张展 姜德龙 +1 位作者 王庆谚 王鹏琴 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期700-707,共8页

Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)是一种小的鸟苷三磷酸酶蛋白,在缺血性卒中发生发展过程中可激活Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)。RhoA/ROCK信号通路是缺血性卒中病理过程中的重要调节因子,调控该信号通路已成为促进缺血性卒中后神经细胞恢... Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)是一种小的鸟苷三磷酸酶蛋白,在缺血性卒中发生发展过程中可激活Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)。RhoA/ROCK信号通路是缺血性卒中病理过程中的重要调节因子,调控该信号通路已成为促进缺血性卒中后神经细胞恢复和改善脑缺血-再灌注损伤的研究热点,然而目前RhoA/ROCK抑制剂仅有法舒地尔上市,其余仍处于研发或临床试验阶段。作者对RhoA/ROCK信号通路对缺血性卒中发挥的调控作用及机制进行总结,并对抑制剂及调控药物的应用进行阐述,旨在为缺血性卒中防治提供新的思路。 展开更多

关键词 缺血性卒中 rhoA GTP结合蛋白质 rho相关激酶类 rhoA/ROCK信号通路 抑制剂 综述

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路与脑梗死关系的研究进展 被引量：4

2

作者 任浩 王琳 +1 位作者 刘宵 高燕军 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期603-607,共5页

Ras同源基因家族蛋白A（Ras homolog gene family member A,Rho A）/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK）信号通路参与许多细胞的调控过程,包括转录、细胞骨架的改变、收缩、黏附、运... Ras同源基因家族蛋白A（Ras homolog gene family member A,Rho A）/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK）信号通路参与许多细胞的调控过程,包括转录、细胞骨架的改变、收缩、黏附、运动、增殖、分化等,同时其与动脉粥样硬化、脑梗死、缺血-再灌注损伤的发生发展密切相关[1]。 展开更多

关键词 rho相关激酶类 脑梗死 rho相关卷曲螺旋蛋白激酶抑制剂 综述

在线阅读 下载PDF 职称材料

Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对人LECs增生、迁移及ECM合成的抑制作用 被引量：4

3

作者 任师杰 张凤妍 +1 位作者 祁颖 崔琨明 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期311-315,共5页

背景 白内障囊外摘出术后晶状体囊残留的晶状体上皮细胞（LECs）的生物学行为改变是后发性白内障的主要病理改变.Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔具有抑制细胞骨架的重构、迁移、黏附及纤维化等作用,但对LECs的作用尚不清楚.目的 探讨盐酸法... 背景 白内障囊外摘出术后晶状体囊残留的晶状体上皮细胞（LECs）的生物学行为改变是后发性白内障的主要病理改变.Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔具有抑制细胞骨架的重构、迁移、黏附及纤维化等作用,但对LECs的作用尚不清楚.目的 探讨盐酸法舒地尔对人LECs株HLEB-3细胞增生、迁移的作用及其对细胞外基质（ECM）合成的影响.方法 常规培养HLEB-3细胞,对照组细胞仍进行常规培养,药物组培养液中加入不同浓度的盐酸法舒地尔,使其终浓度分别为10、20、40和60 μmol/L,分别于培养后12、24和48 h采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测各组细胞的增生情况,计算不同剂量盐酸法舒地尔对细胞增生的抑制率;分别于处理后12、24、36和48 h采用Transwell小室迁移实验检测各组的迁移细胞数;并于上述时间点采用ELISA法检测各组细胞上清中Ⅰ型胶原（COL-Ⅰ）、纤维连接蛋白（FN）的质量浓度及细胞内α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）质量浓度,对各组间的检测结果进行比较.结果 不同浓度盐酸法舒地尔组HLEB-3细胞增生抑制率均明显高于对照组,随着盐酸法舒地尔浓度的增加,HLEB-3细胞增生抑制率明显增加,组间总体差异有统计学意义（F浓度=966.727,P=0.000）;随着盐酸法舒地尔作用时间的延长,HLEB-3细胞增生抑制率明显增加,总体比较差异有统计学意义（F时间=280.428,P=0.000）.Transwell小室迁移实验显示,实验后48 h,对照组穿过聚碳酸酯膜的细胞数为（29.20±1.28）个,10、20、40和60 μmol/L盐酸法舒地尔组迁移的细胞数分别为（24.40±1.33）、（17.00±1.10）、（14.60±0.68）和（6.60±1.29）个,随着盐酸法舒地尔浓度的增加,HLEB-3细胞的迁移数逐渐减少,差异有统计学意义（F=57.34,P＜0.05）.随着盐酸法舒地尔浓度的增加和作用时间的延长,细胞上清液中COL-Ⅰ和FN质量浓度逐渐降低,差异均有统计学意义（COL-Ⅰ：F浓度=143.992,P=0.000;F时间=113.745,P=0.000.FN：F浓度=81.761,P=0.000;F时间=69.602,P=0.000）;细胞内α-SMA质量浓度逐渐下降,差异均有统计学意义（F浓度=78.156,P=0.000;F时澡 =65.162,P=0.000）.结论 盐酸法舒地尔可抑制体外培养HLEB-3的增生、迁移及ECM的合成,其作用呈剂量和时间依赖性. 展开更多

关键词 rho相关激酶/拮抗剂和抑制剂 晶状体上皮细胞/药效 人 细胞迁移 细胞增生 Ⅰ型胶原 纤维连接蛋白 细胞外基质 盐酸法舒地尔/药理作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

Rho激酶抑制剂和解除狭窄联合治疗重度颈动脉狭窄所致认知功能障碍的研究 被引量：1

4

作者 冉昌丽 李耀彩 +1 位作者 张其梅 张强 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2010年第5期465-468,共4页

目的探讨Rho激酶抑制剂和解除狭窄联合治疗重度颈动脉狭窄所致的认知功能障碍的疗效。方法取造模成功的60只SD大鼠随机选择其中48只分为药物组,法舒地尔8.35 mg/(kg·d),狭窄解除组,联合组(解除狭窄联合法舒地尔治疗)和对照组,每组1... 目的探讨Rho激酶抑制剂和解除狭窄联合治疗重度颈动脉狭窄所致的认知功能障碍的疗效。方法取造模成功的60只SD大鼠随机选择其中48只分为药物组,法舒地尔8.35 mg/(kg·d),狭窄解除组,联合组(解除狭窄联合法舒地尔治疗)和对照组,每组12只。另选6只大鼠不结扎颈动脉为假手术组。各组以不同干预措施处理2周后,进行Morris水迷宫行为学检测大鼠的认知功能,并观察大鼠海马神经病理形态学,比较治疗前后颈动脉狭窄率。结果治疗后,与对照组比较,3个治疗组大鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),联合组较药物组和狭窄解除组改善更明显(P<0.05);狭窄解除组和联合组大鼠颈动脉狭窄率明显下降(P<0.01)。联合组狭窄率较药物组和狭窄解除组明显下降(P<0.01)。各组海马组织病理形态学变化有不同程度的改善。结论联合治疗可明显改善重度颈动脉狭窄导致的认知功能障碍,疗效优于单纯的药物治疗或解除狭窄治疗。 展开更多

关键词 rho相关激酶类 颈动脉狭窄 认知障碍 海马 rho激酶抑制剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

FBXW7和RhoA/Rho激酶蛋白表达参与糖尿病大鼠心肌纤维化 被引量：4

5

作者 申屠路媚 卢敏 +2 位作者 王燕 李杰 牟艳玲 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期1-8,共8页

目的探究F框/含蛋白7 WD-40域蛋白(FBXW7)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)的表达与糖尿病心肌纤维化的关系。方法将SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,采用一次性ip链脲佐菌素60 mg·kg^(-1)建... 目的探究F框/含蛋白7 WD-40域蛋白(FBXW7)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)的表达与糖尿病心肌纤维化的关系。方法将SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,采用一次性ip链脲佐菌素60 mg·kg^(-1)建立1型糖尿病大鼠模型,分别于2,4,8,12和16周进行检测。HE染色观察大鼠心脏组织形态变化;Masson染色和测定心肌羟脯氨酸(HYP)含量观察心肌胶原沉积程度;ELISA法检测血清中FBXW7,转化生长因子β_1(TGF-β_1)和结缔组织生长因子(CTGF)的含量;Western蛋白印迹和免疫组化法检测心肌中FBXW7,RhoA和ROCK1蛋白的表达。结果显微镜下可见糖尿病模型组大鼠心肌不同程度局灶性心肌细胞变性、坏死和纤维组织增生等。与正常对照组相比,4～16周时,模型组大鼠心肌组织中胶原沉积面积和胶原含量显著升高(P<0.05,P<0.01),呈递增趋势;2～4周时,大鼠血清中FBXW7含量显著增加(P<0.01),第8周时降低,但仍显著高于正常对照组(P<0.01);8～16周时,大鼠血清中TGF-β_1和CTGF含量逐渐升高(P<0.01)。Western蛋白印迹和免疫组化结果显示,模型组大鼠心肌RhoA和ROCK1蛋白表达在各时间点均显著高于正常对照组(P<0.05,P<0.01);2～12周模型组大鼠心肌FBXW7表达较正常对照组显著升高(P<0.01,P<0.01),第4周表达最高,8～16周表达下降,与时间呈负相关(r=-0.988,P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论 FBXW7和RhoA/Rho激酶参与糖尿病大鼠心肌纤维化的发生发展,可能成为治疗糖尿病心肌病的靶点。 展开更多

关键词 糖尿病心肌病 心肌纤维化 F框/含蛋白7 WD-40域蛋白 rhoA蛋白家族 rho相关卷曲螺旋蛋白激酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

麦冬皂苷B调节Rho A/ROCK1信号通路对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的抑制作用 被引量：1

6

作者 徐明星 李子银 姜红梅 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第19期2180-2187,共8页

目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walke... 目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walker-256肿瘤组织建立胃荷瘤模型,OP-B低、中、高剂量组大鼠分别灌胃17.5、35、70 mg/kg的OP-B并腹腔注射等量生理盐水,激活剂组灌胃70 mg/kg的OP-B并腹腔注射1 mg/kg的Rho A/ROCK1信号通路激活剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA),模型组灌胃和腹腔注射等量的生理盐水;记录移植瘤质量及体积,计算抑瘤率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肿瘤组织形态;原位末端转移酶标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡;免疫组织化学染色检测肿瘤组织细胞核增殖抗原67(proliferating cell nuclear antigen, Ki-67)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测Ras同源基因家族蛋白A(Ras homologous gene family member A,Rho A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase1,ROCK1)的表达;Western blot检测Rho A、ROCK1蛋白表达。结果 与模型组比较,OP-B低、中、高剂量组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著降低,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著升高(P<0.05);与OP-B高剂量组比较,激活剂组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著升高,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著降低(P<0.05)。结论 OP-B可能通过抑制Rho A/ROCK1信号通路的激活,抑制胃荷瘤大鼠肿瘤生长。 展开更多

关键词 胃癌 麦冬皂苷B Ras同源基因家族蛋白A/rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1信号通路 增殖 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

氯氧喹通过下调Rho/Rho激酶信号通路抑制乳腺癌细胞转移 被引量：2

7

作者 刘婧雯 杨兴莲 +2 位作者 沈凯莉 曾玲晖 孙燕 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期631-637,共7页

目的:通过观察氯氧喹对乳腺癌细胞系细胞骨架的聚合状态及其对Rho/Rho激酶信号通路相关靶点蛋白磷酸化的作用,明确氯氧喹治疗乳腺癌的作用机制。方法:以不同浓度氯氧喹处理乳腺癌Bcap37和MDA-MB--453细胞系,划痕试验检测细胞迁移,Transw... 目的:通过观察氯氧喹对乳腺癌细胞系细胞骨架的聚合状态及其对Rho/Rho激酶信号通路相关靶点蛋白磷酸化的作用,明确氯氧喹治疗乳腺癌的作用机制。方法:以不同浓度氯氧喹处理乳腺癌Bcap37和MDA-MB--453细胞系,划痕试验检测细胞迁移,Transwell试验检测细胞侵袭,罗丹明标记鬼笔环肽染色法观察F肌动蛋白的聚解状态,免疫荧光法观察α微管蛋白的表达,蛋白质印迹法检测Rho/Rho激酶信号通路关键蛋白磷酸化水平。结果:氯氧喹可剂量依赖性地抑制细胞迁移和侵袭;Bcap37和MDA-MB-453细胞经氯氧喹处理后其细胞形态发生改变,细胞体积减少;F肌动蛋白和α微管蛋白染色形态不规则,荧光染色聚集成团,且呈现剂量依赖性;氯氧喹可下调Rho/Rho激酶信号通路中肌动蛋白解聚因子Cofilin、磷酸化蛋白激酶(Limk)、Rho关联卷曲蛋白激酶2(Rock2)磷酸化表达(均P<0.01)。结论:氯氧喹可抑制乳腺癌细胞骨架聚合从而抑制细胞迁移,该作用可能与抑制Rho/Rho激酶信号通路相关。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/病理学 细胞骨架 rho相关激酶类/拮抗剂和抑制剂 信号传导/药物作用 肌动蛋白类 微管蛋白 抗肿瘤药/药理学

在线阅读 下载PDF 职称材料

Rho激酶(ROCK)在糖尿病并发症中的研究 被引量：8

8

作者 陈曦 史运迪 铁璐 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期433-438,共6页

ROCK(Rho-associated protein kinase),即Rho相关蛋白激酶,是Rho/ROCK通路的重要蛋白。ROCK与GTP(guanosine triphosphate)结合蛋白Rho相互作用,通过磷酸化激活多种下游蛋白或核因子,在机体的各项调节功能中起到重要的作用。研究表明,... ROCK(Rho-associated protein kinase),即Rho相关蛋白激酶,是Rho/ROCK通路的重要蛋白。ROCK与GTP(guanosine triphosphate)结合蛋白Rho相互作用,通过磷酸化激活多种下游蛋白或核因子,在机体的各项调节功能中起到重要的作用。研究表明,糖尿病患者体内ROCK异常上调,可能是导致糖尿病并发症的重要原因,最终危及患者心血管系统、泌尿系统乃至生殖系统。而对ROCK的深入研究表明,使用ROCK的拮抗剂,如法舒地尔等,可有效抑制ROCK/Rho通路,最终缓解糖尿病并发症。 展开更多

关键词 ROCK rho相关蛋白激酶 ROCK抑制剂 糖尿病并发症 心血管 糖尿病肾病

在线阅读 下载PDF 职称材料

ROCK抑制剂Y-27632在角膜保存时对角膜缘干细胞活性的促进作用 被引量：2

9

作者 王瑶 段豪云 +2 位作者 杨玲玲 曲明俐 周庆军 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期787-792,共6页

背景 角膜缘干细胞（LSCs）对维持角膜上皮的稳定和角膜组织透明性有重要作用.Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y-27632能够促进人胚胎干细胞、角质上皮细胞等的增生,减少细胞凋亡.目的 探讨Y-27632对离体兔角膜保存和体外LSCs扩... 背景 角膜缘干细胞（LSCs）对维持角膜上皮的稳定和角膜组织透明性有重要作用.Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y-27632能够促进人胚胎干细胞、角质上皮细胞等的增生,减少细胞凋亡.目的 探讨Y-27632对离体兔角膜保存和体外LSCs扩增能力的影响. 方法 在细胞培养基MEM中加入质量分数12.5％硫酸软骨素、质量分数10.0％低分子右旋糖酐、20.0 mg/L地塞米松、100 mg/L妥布霉素注射液、9.5 g/L Hepes,使用时添加0.375 mg/L L-谷氨酰胺,制备成角膜活性保存液.将新西兰大白兔的角膜组织片分别置于含或不含Y-27632的角膜活性保存液中保存4、7、14d,采用质量分数0.25％锥虫蓝和质量分数0.2％茜素红染色法观察角膜内皮细胞密度及形态,采用Giemsa染色法并使用Image J图像分析软件计数克隆球数量和LSCs活性,计算LSCs存活率和克隆形成效率. 结果 角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞形态无明显差别,角膜片保存7d时,Y-27632保存液组角膜内皮细胞形态仍保持规则的六边形,而单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞的细胞膜轻微皱缩,少数细胞体积变大.角膜片保存14 d时单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞可见较多的茜素红斑.单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞计数为（2 262±75）/mm2,Y-27632保存液组角膜内皮细胞计数为（2 425 ±95）/mm2,差异有统计学意义（P＜0.001）.新鲜角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆球均较大,其内细胞数较多,而保存7d和14 d时,与Y-27632保存液组比较,单纯角膜中期保存液组LSCs克隆球直径明显缩小.新鲜分离的角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成率和角膜上皮细胞存活率的差异均无统计学意义（均P＞0.05）;角膜片保存7d和14d时,角膜缘上皮细胞的活性率分别为（73.00±2.12）％和（56.00±0.71）％,明显高于单纯角膜中期培养液组的（66.00±4.00）％和（49.00±0.71）％,差异均有统计学意义（t=3.098,P=0.018;t=9.798,P=0.000）;角膜片保存7d和14 d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成效率分别为（11.05±0.21）％和（3.10±1.97）％,明显高于单纯角膜中期保存液组中的（2.05±1.20）％和（0.40±0.14）％,差异均有统计学意义（t=18.107,P=0.000;t=3.184,P=0.017）.结论角膜保存液中添加Y-27632可明显提高离体角膜保存的效果,同时可维持LSCs的活性及克隆形成能力.Y-27632可作为角膜保存液的有效添加成分。 展开更多

关键词 rho相关激酶/拮抗剂& 抑制剂 细胞培养 角膜缘/细胞学 干细胞 角膜上皮 细胞生存/药物作用 角膜保存 兔

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同生长期小鼠胸腺T细胞不同亚群的变化及ROCK抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的促进作用 被引量：3

10

作者 曾艳 陈昌蓉 +5 位作者 姜晓玲 刘美 童晨曦 朱小康 宋银宏 杜德兵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期16-23,共8页

目的研究各发育阶段小鼠胸腺细胞、胸腺上皮细胞(TEC)和脾脏中T细胞的变化,探索Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的作用。方法取幼年、青年、中年及老年期C57BL/6雌鼠的胸腺和脾脏,流式细胞术分析小鼠胸腺细胞、TEC... 目的研究各发育阶段小鼠胸腺细胞、胸腺上皮细胞(TEC)和脾脏中T细胞的变化,探索Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的作用。方法取幼年、青年、中年及老年期C57BL/6雌鼠的胸腺和脾脏,流式细胞术分析小鼠胸腺细胞、TEC及脾脏中T细胞亚群;ROCK抑制剂体外处理衰老进程中小鼠TEC,荧光酶联斑点分析仪观察细胞增殖情况;ROCK抑制剂处理20月龄衰老小鼠,流式细胞术检测小鼠胸腺细胞、TEC及脾脏中T细胞亚群的变化。结果随月龄增加,胸腺细胞、TEC总数及各细胞亚群数量均显著降低;脾脏中总CD4^(+)T细胞及CD8^(+)T细胞比例无显著性改变,但CD4+初始T细胞、CD8+初始T细胞和CD4+近期胸腺迁出细胞(RTE)在脾脏中所占比例呈下降趋势;ROCK抑制剂在体外促进衰老进程中小鼠TEC增殖,ROCK抑制剂在体内使衰老小鼠胸腺细胞、TEC以及外周脾脏中T淋巴细胞各亚群数量明显增加。结论随着小鼠月龄增加,胸腺呈进行性退化。ROCK抑制剂可以显著缓解衰老小鼠胸腺的萎缩,促进衰老小鼠胸腺再生。 展开更多

关键词 胸腺 胸腺上皮细胞 rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)抑制剂 衰老 再生

在线阅读 下载PDF 职称材料

水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响 被引量：2

11

作者 那丽莎 曲娜 +1 位作者 于雪 栗昭生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1640-1645,共6页

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HR... 目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。 展开更多

关键词 水蛭素 脑梗死 炎症 Ras同源基因家族成员A/rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶信号通路 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

TGF-β_1介导的RhoA/ROCK通路在大鼠肺肌成纤维细胞分化中的调节作用 被引量：22

12

作者 马文东 袁媛 +6 位作者 杨奕 徐洪 邓海静 于婉莹 孙月 魏中秋 杨方 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1758-1763,共6页

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞... 目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞不同时间后p-RhoA、ROCK、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(pMBS)、血清应答因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型和III型胶原蛋白表达变化;(2)将细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组和Y-27632(ROCK通路阻滞剂)干预组,免疫细胞化学染色与Western blotting法分别观察与检测ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白在细胞内的定位分布与表达。结果:(1)经TGF-β1诱导24 h后,大鼠肺成纤维细胞胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝。随着TGF-β1诱导刺激时间的延长,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达逐渐增高,其中RhoA/ROCK信号(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分别在诱导后6 h、12 h和24 h达到高峰。I型胶原和III型胶原蛋白表达均在24 h达高峰,分别为诱导前的2.19和3.04倍(P<0.05)。(2)与TGF-β1诱导分化组比较,当给予Y-27632干预后,在相应时点ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1通过ROCK信号转导通路的活化,刺激了大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,进而促进了胶原蛋白的合成,可能在(矽)肺纤维化形成过程中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 转化生长因子Β rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 肌成纤维细胞 肺纤维化

在线阅读 下载PDF 职称材料

米哚妥林对P糖蛋白介导的多药耐药的逆转作用 被引量：2

13

作者 魏寅祥 赵青 +5 位作者 任志广 贾砚寒 李新颖 黎燕 彭晖 马远方 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期77-83,共7页

目的评价新型激酶抑制剂类抗癌药米哚妥林逆转P糖蛋白(P-gp)介导肿瘤细胞多药耐药的作用,并探讨其可能机制。方法米哚妥林0.5,1和5μmol·L-1分别加入P-gp高表达的K562/A02和K562细胞中培养72 h,MTS法测定细胞存活率以检测细胞毒性... 目的评价新型激酶抑制剂类抗癌药米哚妥林逆转P糖蛋白(P-gp)介导肿瘤细胞多药耐药的作用,并探讨其可能机制。方法米哚妥林0.5,1和5μmol·L-1分别加入P-gp高表达的K562/A02和K562细胞中培养72 h,MTS法测定细胞存活率以检测细胞毒性。米哚妥林0.125,0.25和0.5μmol·L-1在K562/A02和K562细胞中与无毒剂量的P-gp底物多柔比星、紫杉醇或长春新碱共培养72 h,MTS法测定细胞存活率以检测逆转耐药作用。米哚妥林0.5和10μmol·L-1与P-gp荧光底物罗丹明123在耐药和敏感细胞中共同孵育30 min后用流式细胞术分析底物积累的变化。米哚妥林0.5μmol·L-1与耐药和敏感细胞共同孵育72 h,Western印迹法检测耐药蛋白和信号分子的表达,定量PCR检测MDR1基因表达的变化。将米哚妥林与P-gp膜蛋白共孵育,化学发光法测定剩余ATP的量,检测米哚妥林对P-gp ATP酶活性的影响。结果米哚妥林对P-gp高表达的K562/A02和亲本敏感细胞K562的细胞毒性无明显的差异,其中米哚妥林0.5μmol·L-1时2种细胞的存活率均达80%以上。米哚妥林0.5μmol·L-1在细胞水平即可有效逆转K562/A02对多种底物的耐药,而对敏感细胞无显著作用;米哚妥林能显著抑制P-gp的外排作用,增加底物Rh-123在K562/A02细胞中的积累,且效果好于阴性对照维拉帕米0.5和10μmol·L-1;米哚妥林对P-gp基因和蛋白表达以及AKT和ERK的表达与磷酸化水平均无影响;米哚妥林对P-gp的ATP酶活性具有明显的抑制作用。结论米哚妥林可抑制P-gp介导的药物外排并逆转P-gp介导的肿瘤多药耐药。 展开更多

关键词 米哚妥林 多药耐药相关蛋白 糖蛋白类 蛋白激酶抑制剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

Rock可能通过抑制PI3K/Akt通路促进缺氧诱导的心肌细胞凋亡 被引量：3

14

作者 董家龙 李菊香 +1 位作者 孙国芳 洪葵 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2071-2075,共5页

目的：通过建立体外心肌细胞缺氧模型,观察Rho相关的卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）在不同缺氧时点的表达,探讨其在心肌细胞凋亡中的作用。方法：（1）原代培养SD乳鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。（2）利用缺氧液... 目的：通过建立体外心肌细胞缺氧模型,观察Rho相关的卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）在不同缺氧时点的表达,探讨其在心肌细胞凋亡中的作用。方法：（1）原代培养SD乳鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。（2）利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌细胞缺氧模型,分别缺氧培养1 h、3 h、6 h、9 h,以正常氧培养的心肌细胞作为对照。（3）用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,MTT检测细胞存活率,Western blotting检测ROCK-1、ROCK-2、caspase-3活化片段、PI3K和p-PI3K的表达情况。结果：（1）缺氧1 h、3 h、6 h、9 h后,心肌细胞凋亡率分别为（8.76±1.51）%、（15.36±2.34）%、（26.50±3.43）%、（41.96±4.22）%,与对照组[2.60±0.34）%]比较均有显著差异（P〈0.01）;存活率分别为（93.20±4.12）%、（86.14±3.10）%、（75.53±7.25）%、（60.21±6.75）%,与对照组[（97.60±1.12）%]比较均有显著差异（P〈0.05）。（2）ROCK-1和ROCK-2缺氧1 h即开始升高,3-6 h表达达高峰,9 h开始回落,且均明显高于对照组（P〈0.05）。（3）Caspase-3在缺氧1 h开始逐渐活化,在随后观察的时点内持续处于活化状态,与对照组比较均有显著差异（P〈0.01）。（4）p-PI3K在缺氧1 h后开始升高,3 h达高峰,6 h开始回落,9 h表达基本消失,各时点比较差别有统计学意义（P〈0.05）。结论：ROCK-1和ROCK-2在缺氧后表达逐渐升高,与细胞凋亡的过程相一致。ROCK可能通过抑制p-PI3K信号途径,促进缺氧心肌细胞凋亡。 展开更多

关键词 心肌细胞 缺氧 rho相关的卷曲螺旋蛋白激酶 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

Rho/ROCK信号通路在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征大鼠急性缺血性卒中发生中的作用 被引量：2

15

作者 嵇朋 郭向东 +4 位作者 孙根 寇启星 屈雪萍 孙雅静 江利敏 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1178-1186,共9页

目的:研究小GTP结合蛋白(Rho)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)大鼠急性缺血性卒中发生中的作用,为OSAHS后急性缺血性卒中病变的防治提供参考。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、OS... 目的:研究小GTP结合蛋白(Rho)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)大鼠急性缺血性卒中发生中的作用,为OSAHS后急性缺血性卒中病变的防治提供参考。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、OSAHS组、卒中组、OSAHS后卒中组和Rho抑制剂组(C3转移酶5μg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射),每组10只。采用慢性间歇性低氧建立OSAHS模型,线栓法阻断大脑中动脉建立急性脑卒中模型。观察各组大鼠建模后的一般情况和脑皮质区组织病理形态表现,计算脑梗死体积。比较各组大鼠呼吸频率和神经功能损伤评分,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Westernblotting法检测各组大鼠脑组织中肌球蛋白轻链(MLC)、Rho和ROCKmRNA及蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,其他各组大鼠均有精神状态不佳和脑皮层结构损伤等改变,其中OSAHS后卒中组大鼠变化最严重,Rho抑制剂组变化较轻。与假手术组比较,OSAHS组大鼠呼吸频率增加(P<0.05);与OSAHS组比较,卒中组大鼠呼吸频率降低(P<0.05);与卒中组比较,OSAHS后卒中组大鼠呼吸频率和Longa评分增加(P<0.05),Rho抑制剂组大鼠Longa评分降低(P<0.05);与OSAHS后卒中组比较,Rho抑制剂组大鼠呼吸频率与和Longa评分均降低(P<0.05)。与假手术组比较,OSAHS组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05);与OSAHS组比较,卒中组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05);与卒中组比较,OSAHS后卒中组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05);与OSAHS后卒中组比较,Rho抑制剂组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.05)。与卒中组比较,OSAHS后卒中组大鼠脑梗死体积增大(P<0.05);与OSAHS后卒中组比较,Rho抑制剂组大鼠脑梗死体积缩小(P<0.05)。与假手术组比较,OSAHS组大鼠脑组织中Rho和ROCKmRNA和蛋白表达水平及p-MLC/MLC比值升高(P<0.05);与OSAHS组比较,卒中组大鼠脑组织中Rho和ROCKmRNA及蛋白表达水平及其p-MLC/MLC比值升高(P<0.05);与卒中组比较,OSAHS后卒中组大鼠脑组织中Rho和ROCKmRNA及蛋白相表达水平及其p-MLC/MLC比值升高(P<0.05);与OSAHS后卒中组比较,Rho抑制剂组大鼠脑组织中Rho和ROCKmRNA及蛋白表达水平及其p-MLC/MLC比值降低(P<0.05)。结论:OSAHS的间歇性缺氧状态可损伤神经功能,Rho/ROCK信号通路可能在OSAHS大鼠急性缺血性卒中发生中起一定作用。 展开更多

关键词 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 急性缺血性卒中 小GTP结合蛋白 rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 肌球蛋白轻链

在线阅读 下载PDF 职称材料

PDGF/ROCK通路在AcSDKP抑制大鼠矽肺纤维化形成中的作用 被引量：12

16

作者 张丽娟 李倩 +4 位作者 徐洪 李淑钰 裴鑫 张文丽 杨方 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期496-500,I0004,共6页

目的:探讨血小板源性生长因子/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(PDGF/ROCK)通路在肺纤维化发病机制中的作用以及N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)能否通过对PDGF/ROCK的调节而发挥抗矽肺纤维化作用。方法:采用非暴露式气管... 目的:探讨血小板源性生长因子/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(PDGF/ROCK)通路在肺纤维化发病机制中的作用以及N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)能否通过对PDGF/ROCK的调节而发挥抗矽肺纤维化作用。方法:采用非暴露式气管二氧化硅混悬液灌注法制备大鼠矽肺模型。60只SPF级健康成年Wistar大鼠随机分为模型对照4周组、模型对照8周组、矽肺模型4周组、矽肺模型8周组、AcSDKP治疗组和AcSDKP预防治疗组,每组10只。免疫组织化学染色法检测各组大鼠肺组织中phospho-PDGFR-β的表达与分布,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PDGFR-β、phosphoPDGR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:与相应模型对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织中α-SMA、PDGFR-β、phospho-PDGFR-β、ROCK以及Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);形态学检测可见较多的phospho-PDGFR-β阳性表达细胞分布在矽结节与间质纤维化区域。与矽肺模型4周组和模型8周组比较,AcSDKP治疗组和预防治疗组大鼠肺组织中α-SMA、PDGF-β、phospho-PDGFR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);免疫组织化学染色,phospho-PDGFR-β蛋白表达明显减少。结论:PDGF介导的ROCK信号转导通路可能通过促进大鼠肌成纤维细胞转化而促进矽肺大鼠肺组织中的胶原合成,进而促进矽肺纤维化的形成。AcSDKP可能通过PDGF/ROCK通路抑制矽肺大鼠肺内肌成纤维细胞的分化,减少其胶原的合成与分泌,进而发挥抗矽肺纤维化的作用。 展开更多

关键词 N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸 血小板源性生长因子 rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 Α-平滑肌肌动蛋白 肌成纤维细胞 矽肺

在线阅读 下载PDF 职称材料

沉默Ras同源物家族成员C对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭和迁移的影响

17

作者 于汶源 赵鹏 +6 位作者 邵禹 徐勇 徐进 谢磊 于承浩 何秋萍 陈正岗 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期723-734,共12页

目的探讨沉默Ras同源物家族成员C(RhoC)对唾液腺腺样囊性癌(SACC)增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例,... 目的探讨沉默Ras同源物家族成员C(RhoC)对唾液腺腺样囊性癌(SACC)增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例,通过蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测RhoC的表达水平。针对RhoC基因序列设计3条小干扰RNA(siRNA),转染至SACC-LM和SACC-83细胞系中并评估转染效率。通过Western blot比较RhoC、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、扭曲家族bHLH转录因子1(TWIST1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。CCK-8实验、流式细胞术、Transwell侵袭实验、伤口愈合实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的差异。生物信息学方法预测RhoC可能的上游微小RNA(miRNA)及其在SACC中的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证二者的结合位点。结果RhoC在SACC中的表达显著上升(P<0.05)。沉默RhoC后,实验组ROCK1、p-p38MAPK、TWIST1、N-cadherin、Vimentin的表达显著下降,E-cadherin的表达显著上升(P<0.05);p38MAPK的表达无明显差异(P>0.05);细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降,凋亡率显著上升(P<0.05)。miR-138-5p在SACC中低表达,miR-138-5p micmic可以显著下调转染RhoC野生型质粒后293T细胞的荧光素酶活性(P<0.05)。结论RhoC在SACC中高表达,沉默RhoC可能靶向下游ROCK1/p38MAPK/TWIST1信号通路从而抑制SACC的增殖、侵袭、迁移和EMT,同时促进其凋亡。miR-138-5p在SACC中低表达,是RhoC潜在的上游基因,二者可能存在结合位点。 展开更多

关键词 唾液腺腺样囊性癌 Ras同源物家族成员C rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1 上皮-间充质转化 miR-138-5p

在线阅读 下载PDF 职称材料

Rock2对细胞周期检查点Cdc25A的调节作用 被引量：5

18

作者 刘天德 余新 +3 位作者 袁荣发 王庆诺 杨志强 邵江华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期961-968,共8页

目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染... 目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用。结果:Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。结论:Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。 展开更多

关键词 rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2 细胞分裂周期蛋白25A 细胞周期 肝肿瘤

在线阅读 下载PDF 职称材料

ROCK在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响 被引量：4

19

作者 钟立 孙彤 刘祖翠 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1537-1541,共5页

目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)在人卵巢癌组织中的表达及其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法:免疫组化SP法检测ROCK在80例人卵巢上皮性肿瘤中的表达。用ROC... 目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)在人卵巢癌组织中的表达及其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法:免疫组化SP法检测ROCK在80例人卵巢上皮性肿瘤中的表达。用ROCK抑制剂Fasudil处理SKOV3细胞,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞凋亡水平,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)活性,Western blot检测凋亡相关蛋白p53表达,比较不同浓度Fasudil对细胞增殖、细胞凋亡、caspase-3活性以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果:ROCK在恶性卵巢上皮性肿瘤的阳性表达明显高于良性肿瘤(χ2=20.961,P=0.000),在晚期上皮性卵巢癌组织中其表达高于早期肿瘤(χ2=16.675,P=0.000)。不同浓度Fasudil处理组SKOV3细胞24 h增殖抑制率和凋亡率均明显高于未加药组(F=402.537,P=0.000;F=124.251,P=0.000),并均随药物浓度增加而逐渐升高,且Fasudil呈浓度依赖性地增强caspase-3活性(F=32.423,P=0.000)和p53蛋白的表达(F=31.599,P=0.000)。结论:ROCK在卵巢癌组织中有较高表达,可能在卵巢癌细胞增殖和凋亡抑制中扮演一定角色。 展开更多

关键词 卵巢癌 rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 增殖 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

匹鲁卡品致小鼠癫痫神经元模型的建立及其F-actin、Calponin 3和ROCK2的表达 被引量：3

20

作者 古小云 张舒岩 +3 位作者 袁羽帆 杨立彬 李艳超 李树蕾 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期47-51,I0002,I0003,共7页

目的:探讨匹鲁卡品所致小鼠癫痫神经元中细胞骨架丝状肌动蛋白(F-actin)、调宁蛋白3(Calponin 3)和Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(ROCK2)的表达,研究癫痫发作后RhoA/ROCK2通路与Calponin 3和F-actin解聚和重构之间的关系。方法:采用木瓜... 目的:探讨匹鲁卡品所致小鼠癫痫神经元中细胞骨架丝状肌动蛋白(F-actin)、调宁蛋白3(Calponin 3)和Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(ROCK2)的表达,研究癫痫发作后RhoA/ROCK2通路与Calponin 3和F-actin解聚和重构之间的关系。方法:采用木瓜蛋白酶消化法分离ICR新生小鼠乳鼠皮层神经元,生长至第7天时用微管关联蛋白2(MAP2)抗体进行免疫组织化学染色鉴定神经元。将培养7d的神经元分为对照组和癫痫模型组,对照组用神经元培养基培养,癫痫模型组在神经元培养基中分别加入终浓度为2、3和4mmol·L^(-1)匹鲁卡品,24h后换为正常培养基。分别在造模后不同时间点取出各组细胞固定,进行免疫组织化学染色和荧光染色。采用Alex-546标记的phalloidin进行荧光染色观察神经元中F-actin分布;免疫组织化学染色观察神经元中Calponin 3、ROCK2和磷酸化ROCK2(p-ROCK2)表达和分布。结果:光镜下观察和F-acitn荧光染色,与对照组比较,造模24h后,2mmol·L^(-1)匹鲁卡品组细胞无明显变化;3mmol·L^(-1)匹鲁卡品组神经元中F-acitn出现解构,神经元部分突起消失,但在更换正常培养基后,细胞形态和F-actin结构在造模7d后逐渐恢复;4mmol·L^(-1)匹鲁卡品组神经元中F-actin结构崩解破坏严重,神经元突起不可逆性消失。免疫组织化学染色,对照组Calponin 3和ROCK2弥散分布于胞质中;在造模1d时癫痫模型组(3mmol·L^(-1)匹鲁卡品)神经细胞中Calponin 3和ROCK2明显聚集在细胞膜下方,随培养时间延长其表达量明显上调,位于细胞膜下方的p-ROCK2表达量也较对照组明显增加,同样随培养时间延长其表达量逐渐升高。结论:利用3mmol·L^(-1)匹鲁卡品成功建立癫痫神经元模型。3mmol·L^(-1)匹鲁卡品可使神经元细胞内ROCK2活化为p-ROCK2,并上调神经元内的ROCK2和p-ROCK2表达量,促使F-actin解聚导致神经元突起部分消失,p-ROCK2激活Calponin 3磷酸化,促进F-actin重构和神经元形态结构的恢复。 展开更多

关键词 癫痫 神经元 匹鲁卡品 细胞骨架丝状肌动蛋白 调宁蛋白3 rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2

在线阅读 下载PDF 职称材料