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云南省清华洞蝙蝠携带的冠状病毒调查与病毒定量检测方法的建立
1
作者 孔玮 韩培钰 +6 位作者 杨泽 赵俊颖 汤燚 田佳伟 徐粉慧 宗利东 张云智 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第7期704-711,共8页
目的对云南省清华洞蝙蝠粪便中冠状病毒(coronavirus,CoV)进行定性和定量检测。方法用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对CoV进行定性检测,用生物信息学软件进行同源性与遗传进化分析。建立逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,对CoV进行... 目的对云南省清华洞蝙蝠粪便中冠状病毒(coronavirus,CoV)进行定性和定量检测。方法用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对CoV进行定性检测,用生物信息学软件进行同源性与遗传进化分析。建立逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,对CoV进行定量检测。结果共采集棕果蝠粪便样本306份,RT-PCR检测CoV阳性率为7.8%(24/306),检测到的24株CoV均为β-CoV,与NCBI中其它β-CoV核苷酸相似性为86.8%~100.0%;氨基酸相似性为95.2%~100.0%;qRTPCR检测CoV阳性率为18.6%(57/306),比RT-PCR检出率高(χ^(2)=25.3,P˂0.05);β-CoV平均病毒载量为1.3×10^(3)拷贝数/μL。结论云南省清华洞蝙蝠携带β-CoV,建立的qRT-PCR方法具有很好的敏感性、准确性和重复性,qRT-PCR检出率高于RTPCR,可对蝙蝠β-CoV进行快速检测。 展开更多
关键词 蝙蝠 β冠状病毒 RT-PCR QRT-PCR
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RT-qPCR检测人IL-6 mRNA的方法建立与运用
2
作者 邹立林 吕建新 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期470-472,共3页
目的:建立实时定量检测人IL-6mRNA的方法并加以应用。方法:抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后用IL-6引物进行实时荧光定量PCR扩增,扩增体系中加入SYBR... 目的:建立实时定量检测人IL-6mRNA的方法并加以应用。方法:抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后用IL-6引物进行实时荧光定量PCR扩增,扩增体系中加入SYBRGreenⅠ。结果:该法检测IL-6mRNA线性范围广,灵敏度高,特异性好,重复性好,方法简单。结论:该法可较为精确地定量IL-6mRNA。 展开更多
关键词 白细胞介素-6 核糖核酸 信使 逆转录-聚合酶链反应 实时 定量
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玉溪市鸡新城疫抗原、抗体调查研究
3
作者 何帅 《现代畜牧兽医》 2025年第7期69-72,共4页
研究旨在调查玉溪市鸡新城疫病毒(NDV)免疫抗体水平及感染情况,从玉溪市辖区内采集鸡血清样品1 600份和咽喉拭子样品800份,采用血凝-血凝抑制试验(HA-HI)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测技术对样品进行血清学和病原学检测。结果显示,... 研究旨在调查玉溪市鸡新城疫病毒(NDV)免疫抗体水平及感染情况,从玉溪市辖区内采集鸡血清样品1 600份和咽喉拭子样品800份,采用血凝-血凝抑制试验(HA-HI)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测技术对样品进行血清学和病原学检测。结果显示,玉溪市鸡NDV抗体检测阳性率87.81%(1 405/1 600),其中规模场阳性率91.92%(1 103/1 200),散养场阳性率75.50%(302/400);NDV秋季抗体阳性率(89.75%,359/400)最高,春季抗体阳性率(86.25%,345/400)最低。玉溪市鸡NDV抗原检测阳性率0.38%(3/800),其中规模场阳性率0.25%(1/400),散养场阳性率0.50%(2/400);NDV冬季抗原检测阳性率(1.00%,2/200)最高,春、夏季抗原检测阳性率(0,0/200)最低。研究表明,玉溪市鸡NDV抗体合格率超过国家规定的群体免疫合格率大于70%的标准,玉溪市NDV群体免疫合格。调查结果明确了玉溪市鸡NDV免疫抗体水平及感染情况,可为玉溪市鸡新城疫的防控提供一定参考。 展开更多
关键词 新城疫 新城疫病毒 血凝-血凝抑制试验(HA-HI) 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)
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RT-qPCR分析拷贝数及mRNA转录水平对表达左聚糖蔗糖酶的影响
4
作者 陈硕昌 仝秋平 +3 位作者 郭晓磊 朱萍 蒙健宗 杨辉 《中国酿造》 CAS 北大核心 2022年第4期80-86,共7页
采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术对重组毕赤酵母基因组中左聚糖蔗糖酶基因(SacB)的拷贝数及信使核糖核酸(mRNA)转录水平进行检测分析,并用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定菌株不同诱导时间下左聚糖蔗糖酶水解活力。结果表明,... 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术对重组毕赤酵母基因组中左聚糖蔗糖酶基因(SacB)的拷贝数及信使核糖核酸(mRNA)转录水平进行检测分析,并用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定菌株不同诱导时间下左聚糖蔗糖酶水解活力。结果表明,在BMMY液体培养基中经甲醇诱导24 h时,样品转录水平皆达到最大值,此时多拷贝菌株转录水平(2.13)为单拷贝菌株(0.42)的5.1倍;左聚糖蔗糖酶活力在甲醇诱导24 h后均随诱导时间不断上升,多拷贝菌株酶活(13.96 U/mL)较单拷贝菌株(5.48 U/mL)提高1.5倍。重组毕赤酵母整合的左聚糖蔗糖酶基因在1~3个拷贝范围内,随着拷贝数增加,多拷贝菌株较单拷贝菌株的mRNA转录水平及相应的蛋白表达量均显著增加(P<0.05),说明毕赤酵母是表达基因SacB的良好宿主。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合酶链式反应 毕赤酵母 左聚糖蔗糖酶 拷贝数 转录水平
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帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：2
5
作者 杨恒 李占鸿 +5 位作者 宋子昂 高林 李卓然 廖德芳 肖雷 李华春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期395-400,共6页
本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,... 本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^(-1)。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 帕利亚姆病毒 血清型鉴定 实时荧光定量RT-PCR 检测方法
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新型冠状病毒亚基因组RNA检测方法的建立及性能评估
6
作者 赵祉薇 陈茶 黄彬 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期1737-1743,共7页
目的建立检测新型冠状病毒(新冠病毒)亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)的方法,并对所建立的方法进行性能评估。方法根据新型冠状病毒sgRNA序列设计引物和探针,建立检测sgRNA的实时荧光逆转录PCR(reverse transcription polymerase cha... 目的建立检测新型冠状病毒(新冠病毒)亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)的方法,并对所建立的方法进行性能评估。方法根据新型冠状病毒sgRNA序列设计引物和探针,建立检测sgRNA的实时荧光逆转录PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,对所建立的方法进行优化,包括引物、探针的浓度及比例、延伸温度、反应体积和模板量。并对所建立的方法进行性能评估,包括最低检测限、灵敏度、特异性和重复性。对临床样本进行新冠病毒sgRNA和基因组RNA(genomic RNA,gRNA)检测,并对检测结果进行分析。结果建立了检测新冠病毒sgRNA的RT-PCR方法。所建方法的最低检测限为100 copies/mL,对常见病原体的检测结果均为阴性。对高、中、低浓度样本sgRNA进行检测,CV均<5%。115例疑似新冠病毒感染者的咽拭子样本sgRNA为阳性(115/330,阳性率为34.85%)。gRNA-N Ct值<30时,sgRNA-N的阳性率为100.00%;gRNA-N的Ct值介于30~32时,sgRNA-N的阳性率为68.75%;gRNA-N的Ct值介于32~35时,sgRNA-N的阳性率为44.44%;gRNA-N的Ct值>35时,sgRNA-N均为阴性。结论建立了新冠病毒sgRNA的RT-PCR检测方法,方法灵敏、特异、重复性好。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 亚基因组RNA 聚合酶链反应 逆转录
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蟾酥醇提物对多重耐药铜绿假单胞菌头孢他啶敏感性的影响
7
作者 周鸿威 王成祥 +8 位作者 吕思缘 林英 张悦 刘国星 李磊 王玉婷 郭雨菲 薛贝 于会勇 《世界中医药》 北大核心 2024年第23期3592-3596,共5页
目的:探讨蟾酥醇提物通过铜绿假单胞菌主动外排系统(MexABOprM)对多重耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)头孢他啶敏感性的影响。方法:筛选MexAB-OprM阳性的铜绿假单胞菌菌株,通过肉汤稀释法建立MDRPA体外抑菌实验模型,测定蟾酥醇提物及其联合头... 目的:探讨蟾酥醇提物通过铜绿假单胞菌主动外排系统(MexABOprM)对多重耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)头孢他啶敏感性的影响。方法:筛选MexAB-OprM阳性的铜绿假单胞菌菌株,通过肉汤稀释法建立MDRPA体外抑菌实验模型,测定蟾酥醇提物及其联合头孢他啶时的最小抑菌浓度;蟾酥醇提物干预前后用实时荧光反转录PCR检测MDRPA铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM中mexB、mexR、oprM基因mRNA表达量。结果:蟾酥醇提物对MDRPA的最小抑菌浓度值是6.25 mg/mL。蟾酥醇提物联合头孢他啶的联合指数低于1,两药联合应用时存在相加作用。随蟾酥醇提物浓度升高,MDRPA外排泵MexAB-OprM的mexB、oprM相对表达量降低(P<0.05),mexR相对表达量升高(P<0.05)。结论:蟾酥醇提物通过抑制MexABOprM外排泵的表达提高MDRPA对头孢他啶的敏感性。 展开更多
关键词 蟾酥醇提物 多重耐药铜绿假单胞菌 体外抑菌 肉汤稀释法 实时荧光反转录聚合酶链反应 铜绿假单胞菌主动外排系统 抗耐药作用 逆转外排泵机制
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酒泉市猪繁殖与呼吸综合征的流行病学监测和分析 被引量：1
8
作者 张翠花 张溪 +1 位作者 赵燕 张若玉 《畜牧兽医杂志》 2024年第2期121-124,共4页
为掌握酒泉市猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行情况,本试验在酒泉市五个农业县市采集638份样品,采用反转录-聚合酶链式反应(荧光RT-PCR)方法进行核酸检测,对不同地域、不同生长期、不同饲养模式的流行情况进行分析。结果显示,638份样品... 为掌握酒泉市猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行情况,本试验在酒泉市五个农业县市采集638份样品,采用反转录-聚合酶链式反应(荧光RT-PCR)方法进行核酸检测,对不同地域、不同生长期、不同饲养模式的流行情况进行分析。结果显示,638份样品共检测出PRRS核酸阳性样品29份,PRRS阳性感染率为4.55%。不同地域PRRS阳性感染率介于0-7.95%;屠宰场、规模场、散养户PRRS阳性感染率分别为0、2.96、6.82%;种公猪、育肥猪、仔猪、母猪PRRS阳性感染率分别为0、3.1、5.38、6.36%。结果表明,酒泉市PRRS呈散发流行,规模养殖场标准化高,饲养管理模式先进PRRS阳性感染率低,此病仔猪和母猪更容易感染,本试验将对我市PRRS综合防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 酒泉市 反转录-聚合酶链反应 流行病学监测 分析
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猪轮状病毒OSU株对乳鼠的致病性
9
作者 桑卡娜 杨绒娟 +4 位作者 胡惠君 卞愧 徐倩 褚何红 周德刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期47-53,共7页
为建立猪轮状病毒(PoRV)OSU株感染乳鼠致腹泻模型,研究PoRV对乳鼠的致病性,本试验选用40只4日龄昆明乳鼠,将其随机分为3个攻毒组和1个空白对照组,攻毒组乳鼠经口灌胃不同剂量的PoRV培养液,分别为攻毒组1(50μL)、攻毒组2(100μL)和攻毒... 为建立猪轮状病毒(PoRV)OSU株感染乳鼠致腹泻模型,研究PoRV对乳鼠的致病性,本试验选用40只4日龄昆明乳鼠,将其随机分为3个攻毒组和1个空白对照组,攻毒组乳鼠经口灌胃不同剂量的PoRV培养液,分别为攻毒组1(50μL)、攻毒组2(100μL)和攻毒组3(150μL),病毒滴度为10~(5.2)TCID_(50)/100μL,空白对照组按同样的方法灌服细胞培养液。在感染后不同时间点观察乳鼠的临床症状、腹泻和死亡情况、解剖症状,采用苏木精-伊红(H.E.)染色进行肠道组织病理学检查,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测乳鼠肠内容物中PoRV含量。结果显示,乳鼠在接种PoRV后24 h出现明显腹泻症状,攻毒后3~4 d时发病最严重,4 d时乳鼠的腹泻率介于62.5%~100%,7 d时恢复正常,乳鼠的死亡率介于44.4%~90.0%。与空白对照组比,攻毒组小鼠在给予PoRV后,肠道出现明显的病理变化,主要表现为水肿和充血、肠上皮完整性破坏。RT-PCR检测结果显示,攻毒组部分乳鼠的肠内容物中检出PoRV。本试验利用PoRV OSU株成功建立了乳鼠腹泻模型,阐明了其致病特征。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 乳鼠 腹泻 动物模型 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)
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胃泌素和生长抑素在糖尿病胃轻瘫中作用的研究 被引量：32
10
作者 吴波 杜强 +1 位作者 郑长青 李倩 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期783-785,共3页
目的探讨胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)在糖尿病胃轻瘫(DGP)发生中的作用。方法选患者103例,分为正常对照(CO)组17例、单纯胃轻瘫(GP)组30例、单纯糖尿病(DM)组23例和DGP组33例,应用放免法及RT-PCR方法测定血清中GAS、SS蛋白水平及其组织中... 目的探讨胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)在糖尿病胃轻瘫(DGP)发生中的作用。方法选患者103例,分为正常对照(CO)组17例、单纯胃轻瘫(GP)组30例、单纯糖尿病(DM)组23例和DGP组33例,应用放免法及RT-PCR方法测定血清中GAS、SS蛋白水平及其组织中mRNA的表达。结果GP组、DM组血清GAS、SS蛋白水平及其组织中mRNA的表达均与CO组存在显著性差异(P<0.05)。GAS及SS在DGP组中的血清蛋白水平及其组织mRNA的表达与CO组比较差异非常显著(P<0.01);与GP组、DM组比较差异显著(P<0.05)。结论GAS的升高、SS的降低是DGP发生、发展的重要因素。 展开更多
关键词 糖尿病胃轻瘫 胃泌素 生长抑素 反转录聚合酶链式反应
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中国人前列腺特异性膜抗原基因的克隆及鉴定 被引量：10
11
作者 黄海 黄健 +5 位作者 潘秋辉 林天歆 郭正辉 许可慰 江春 韩金利 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期84-87,共4页
【目的】克隆中国人前列腺特异性膜抗原(prostatespecificmembraneantigen,PSMA)的cDNA全长,并将其连接到原核表达载体pET-30(a),构建PSMA的原核表达重组子。【方法】从前列腺癌患者活检组织中提取RNA,利用PSMA的cDNA中的EcoRⅠ位点,将P... 【目的】克隆中国人前列腺特异性膜抗原(prostatespecificmembraneantigen,PSMA)的cDNA全长,并将其连接到原核表达载体pET-30(a),构建PSMA的原核表达重组子。【方法】从前列腺癌患者活检组织中提取RNA,利用PSMA的cDNA中的EcoRⅠ位点,将PSMA分成两段分别做RT-PCR,然后再将其分别连接到pET-30(a)中,从而得到完整PSMA的cDNA的原核表达重组子pET-30(a)-PSMA,并对其进行鉴定。【结果】首次成功克隆到全序列的中国人PSMA的cDNA,并构建了PSMA的原核表达重组子pET-30(a)-PSMA,为以后的PSMA表达、纯化及其抗体库的筛选奠定了基础。【结论】分段克隆基因,然后将基因分别连接到同一载体,是有效地对一些长片段基因进行克隆的方法之一。 展开更多
关键词 PSMA 前列腺特异性膜抗原 克隆基因 克隆 中国人 DNA 原核表达载体 重组子 原基 RNA
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神经肽Y和5-羟色胺在腹泻型肠易激综合征模型大鼠中表达的研究 被引量：40
12
作者 唐洪梅 房财富 +3 位作者 廖小红 李得堂 姚楠 何嘉仑 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期916-920,共5页
目的探讨神经肽Y(NPY)和5-羟色胺(5-HT)对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)发病机制的影响,为从脑肠轴方面分析研究D-IBS的发生机制提供理论依据。方法采用母乳分离+醋酸刺激+四肢束缚制作D-IBS大鼠模型,通过免疫组化法检测大鼠结肠组织中5-H... 目的探讨神经肽Y(NPY)和5-羟色胺(5-HT)对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)发病机制的影响,为从脑肠轴方面分析研究D-IBS的发生机制提供理论依据。方法采用母乳分离+醋酸刺激+四肢束缚制作D-IBS大鼠模型,通过免疫组化法检测大鼠结肠组织中5-HT的蛋白表达水平,采用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠下丘脑和结肠组织中NPY mRNA的表达。结果与正常组相比,NPY mRNA表达在肠易激综合征模型大鼠结肠和下丘脑组织均降低(P<0.05)。5-HT蛋白表达在模型大鼠结肠中升高(P<0.05)。结论脑肠肽NPY和5-HT可能参与D-IBS脑肠轴异常机制的调节。 展开更多
关键词 神经肽Y 5-羟色胺 腹泻型肠易激综合征 脑肠轴 实时荧光定量PCR 下丘脑 结肠
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耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌外排泵AdeABC的研究 被引量：20
13
作者 马真 蔡绍曦 +2 位作者 佟万成 阮世冲 王辉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1378-1381,共4页
目的从外排泵表型和基因型两个方面探讨外排泵系统在鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制中所起的作用。方法外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)对138株鲍曼不动杆菌的外排泵进行表型检测;荧光定量PCR测定外排泵adeABC在51株鲍曼不动... 目的从外排泵表型和基因型两个方面探讨外排泵系统在鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制中所起的作用。方法外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)对138株鲍曼不动杆菌的外排泵进行表型检测;荧光定量PCR测定外排泵adeABC在51株鲍曼不动杆菌中的表达情况。结果泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)和美罗培南协同实验的结果显示:138株临床分离菌中,CCCP抑制实验共筛选出泵阳性菌株28株,其中对美罗培南耐药的39株菌中有15株即38.4%的菌株为泵阳性株,对美罗培南敏感的99株菌中有13株即13.1%的菌株为泵阳性株。经卡方检验统计学分析,差异有显著意义(χ2=12.477b,P=0.01);荧光定量PCR检测菌株的adeB和16s rRNA后,根据检测结果计算出adeB表达量差异。经t检验统计学分析结果显示碳青霉烯类抗生素敏感组的adeB的表达量是0.899±1.172,耐药组的表达量是21.101±21.443,敏感组的表达量显著低于耐药组的表达量,差异有统计学意义(t=4.403,P=0.000)。结论主动外排泵机制在临床分离的鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制中起作用。adeB基因或者adeABC外排泵机制可能在临床菌株对碳青霉烯类抗生素的耐药机制中起作用。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 外排泵 碳青酶烯类 实时定量PCR
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环磷酰胺对成年大鼠卵巢的损伤以及GnRHR在卵巢的表达 被引量：13
14
作者 罗璐 杨冬梓 +3 位作者 王箴 莫亚勤 张清学 郑澄宇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1714-1717,共4页
目的探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制。方法将成年SD大鼠分为2组:生理盐水组和环磷酰胺组。大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目;免疫组化法检测GnRHR在卵巢的表达。RT-PCR法检测... 目的探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制。方法将成年SD大鼠分为2组:生理盐水组和环磷酰胺组。大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目;免疫组化法检测GnRHR在卵巢的表达。RT-PCR法检测对侧卵巢GnRHR mRNA的表达。结果环磷酰胺可引起卵巢皮质区原始卵泡发生大量丢失,卵巢间质严重损害,血管发生特征性病理改变;局部发生纤维化。GnRHR mRNA和蛋白质可表达于大鼠卵巢。与对照组相比,环磷酰胺组颗粒细胞GnRHR蛋白表达减少;化疗组GnRHR mRNA表达量低于对照组(P<0.05)。结论GnRHR在化疗卵巢较低水平的表达,提示化疗晚期卵巢局部微环境的紊乱。 展开更多
关键词 环磷酰胺 卵巢 GnRHR 免疫组化 RT-PCR
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复方861对HSC-T6细胞基质分解素1mRNA表达水平影响的研究 被引量：14
15
作者 阴赪宏 马红 +3 位作者 王爱民 马雪梅 贾继东 王宝恩 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2002年第3期168-170,共3页
为观察复方 86 1对HSC -T6细胞基质分解素 1(MMP3 )mRNA表达水平的影响 ,复方 86 1以 0 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等浓度作用于HSC -T6细胞 48小时 ,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC -T6细胞MMP3 mRNA表达水平的影响。结果表明 ,... 为观察复方 86 1对HSC -T6细胞基质分解素 1(MMP3 )mRNA表达水平的影响 ,复方 86 1以 0 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等浓度作用于HSC -T6细胞 48小时 ,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC -T6细胞MMP3 mRNA表达水平的影响。结果表明 ,复方 86 10 2 5mg/ml、0 5mg/ml、1 0mg/ml等不同浓度的HSC -T6细胞mRNA表达水平依次为 2 75± 0 35、3 0 0± 0 0 1、3 5 0± 0 71,与空白对照组比较 ,可明显提高MMP3 mRNA表达水平 (P <0 0 5或P <0 0 1)。因此 ,复方 86 1提高HSC -T6细胞MMP3 mRNA表达水平 ,可能是其促进胶原降解 ,抗肝纤维化的作用机理之一。 展开更多
关键词 表达水平 基质分解素 复方861 HSC-T6细胞 MMP3 MRNA 逆转录PCR 肝纤维化
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枸杞多糖对衰老小鼠原癌基因c-myc表达的影响 被引量：28
16
作者 陈智松 农志飞 +2 位作者 吴志奎 蔡永春 王蕾 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期356-359,共4页
目的 :探讨枸杞多糖抗衰老的分子机理。方法 :采用老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠两种衰老动物模型 ,分别连续灌服枸杞多糖 2个月和 1个月 ,应用半定量逆转录 聚合酶链式反应技术 (RT PCR)检测小鼠骨髓原癌基因c myc表达的变化。结果 :... 目的 :探讨枸杞多糖抗衰老的分子机理。方法 :采用老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠两种衰老动物模型 ,分别连续灌服枸杞多糖 2个月和 1个月 ,应用半定量逆转录 聚合酶链式反应技术 (RT PCR)检测小鼠骨髓原癌基因c myc表达的变化。结果 :老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠骨髓原癌基因c myc表达量明显高于青年小鼠和正常对照小鼠 (P <0 .0 0 1) ,给药后则可明显得到抑制 (P <0 .0 5 )。结论 :抑制原癌基因c myc表达是枸杞多糖抗衰老分子机理之一。 展开更多
关键词 枸杞多糖 逆转录-聚合酶链反应 RT-PCR 原癌基因 c-myc D-半乳糖 衰老 中医药治疗
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以梭鱼金属硫蛋白基因表达监测海洋重金属污染 被引量：13
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作者 安立会 郑丙辉 +3 位作者 付青 赵兴茹 尚晶晶 张雷 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1383-1389,共7页
分离了梭鱼金属硫蛋白132个碱基对应44个氨基酸的部分基因序列,以此为基础建立了分析梭鱼金属硫蛋白基因表达的实时定量PCR方法,并用于分析渤海南戴河和大神堂近岸海域野生梭鱼金属硫蛋白基因的表达.结果表明,南戴河野生梭鱼金属硫蛋白... 分离了梭鱼金属硫蛋白132个碱基对应44个氨基酸的部分基因序列,以此为基础建立了分析梭鱼金属硫蛋白基因表达的实时定量PCR方法,并用于分析渤海南戴河和大神堂近岸海域野生梭鱼金属硫蛋白基因的表达.结果表明,南戴河野生梭鱼金属硫蛋白基因的表达水平(雄鱼:0.012±0.0064 copies/copyβ-actin;雌鱼:0.0099±0.0042 copies/copyβ-actin)明显高于大神堂野生梭鱼的表达水平(雄鱼:0.0017±0.0011 copies/copyβ-actin;雌鱼:0.0014±0.00095 copies/copyβ-actin).该结果与两地野生梭鱼体内重金属残留水平相一致,提示梭鱼金属硫蛋白基因可作为监测海洋重金属污染的敏感标志物之一. 展开更多
关键词 梭鱼 金属硫蛋白mRNA 实时定量PCR 重金属
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趋化因子受体CXCR4在乳腺癌组织中的表达及其意义 被引量：16
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作者 李红霞 姚丽华 +7 位作者 欧阳涛 李金锋 王天峰 范照青 范铁 林本耀 解云涛 李吉友 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期78-81,共4页
目的:探讨趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与临床病理学参数的关系。方法:采用半定量RT-PCR和免疫组织化学法分别检测121例乳腺癌新鲜组织及对应75例石蜡组织中CXCR4 mRNA及蛋白的表达。结果:乳腺癌中CXCR4m RNA及蛋白的表达阳... 目的:探讨趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与临床病理学参数的关系。方法:采用半定量RT-PCR和免疫组织化学法分别检测121例乳腺癌新鲜组织及对应75例石蜡组织中CXCR4 mRNA及蛋白的表达。结果:乳腺癌中CXCR4m RNA及蛋白的表达阳性率分别为30.58%、68%;CXCR4 mRNA表达与蛋白表达呈显著正相关(χ2=5.049,P<0.05),且均与淋巴结转移关系密切,淋巴结转移阳性组CXCR4表达明显高于阴性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CXCR4表达可能在促进乳腺癌淋巴结转移过程中起重要作用,其表达可作为判断乳腺癌恶性生物学行为并预测转移风险的一个指标,抑制CXCR4表达及其活性可为临床阻断癌细胞转移提供新的抗趋化治疗途径。 展开更多
关键词 趋化因子受体CXCR4 乳腺癌 免疫组织化学 RT—PCR
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逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术同时检测水中多种肠道病毒 被引量：17
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作者 张崇淼 刘永军 +1 位作者 王晓昌 薛小平 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期137-141,共5页
建立了一种利用通用引物RT-PCR技术检测水中肠道病毒的方法.利用脊髓灰质炎病毒1～3型,柯萨奇病毒B3型作为参考病毒株,根据肠道病毒RNA5′非编码区中具有高度同源性的序列来设计通用引物.比较了M-MLV酶和AMV酶的逆转录效果,AMV酶能够成... 建立了一种利用通用引物RT-PCR技术检测水中肠道病毒的方法.利用脊髓灰质炎病毒1～3型,柯萨奇病毒B3型作为参考病毒株,根据肠道病毒RNA5′非编码区中具有高度同源性的序列来设计通用引物.比较了M-MLV酶和AMV酶的逆转录效果,AMV酶能够成功地从地表水和生活污水中逆转录病毒RNA,更适于实际应用.对比研究了PCR过程中的退火温度,c(Mg2+)等因素对RT-PCR检测结果的影响,选择退火温度55℃,c(Mg2+)为2 mmol/L的反应条件,优化了RT-PCR检测方法.通过检测水样中接种的连续稀释的病毒,确定了该检测方法的灵敏度为38 CCID50.考察人工污染的地表水、污水、二级处理出水样品发现,检测灵敏度基本一致.该方法可应用在实际环境的肠道病毒检测中. 展开更多
关键词 肠道病毒 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 通用引物 同时检测 水
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乳腺癌前哨淋巴结微转移分子检测及其临床意义 被引量：7
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作者 郑雄伟 林贤东 +4 位作者 陈刚 陆丽莉 翁秀琴 应敏刚 叶韵彬 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期266-268,共3页
目的探讨乳腺癌前哨淋巴结(SLN)定位和SLN微转移检测的临床意义。方法对66例乳腺癌患者行术前Y探测仪SLN定位,用RTPCR法检测SLN中CK19mRNA的表达。同时与常规病检法比较其检测敏感性。并比较转移组、微转移组、无转移组患者的临床病理... 目的探讨乳腺癌前哨淋巴结(SLN)定位和SLN微转移检测的临床意义。方法对66例乳腺癌患者行术前Y探测仪SLN定位,用RTPCR法检测SLN中CK19mRNA的表达。同时与常规病检法比较其检测敏感性。并比较转移组、微转移组、无转移组患者的临床病理资料。结果SLN定位成功率为97%,RTPCR法与常规病检法转移的检出率相比较差异有统计学意义(P<0.05)。在常规病检阴性的38例淋巴结中,RTPCR法检出8例有微转移。同时乳腺癌转移组与微转移组患者在肿物大小与淋巴管浸润上有相似性,而同无转移组差异有统计学意义(P<0.05)。结论RTPCR法较常规病理检查更为敏感,通过SLN定位和RTPCR的联合使用,可明显提高乳腺癌SLN微转移的检出率。同时也证明RTPCR法是可靠的,SLN微转移有可能作为肿瘤预后的指标。 展开更多
关键词 前哨淋巴结微转移 临床意义 分子检测 乳腺癌前哨淋巴结 PCR法检测 临床病理资料 常规病理检查 SLN 转移组 微转移检测 乳腺癌患者 淋巴管浸润 CK19 mRNA 肿物大小 联合使用 高乳腺癌 肿瘤预后 统计学 检出率 RT 敏感性
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