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产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达
被引量：
2
1
作者
吴双
张仁利
+2 位作者
耿艺介
高世同
胡章立
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期451-454,共4页
目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋...
目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得抗血清,进行重组蛋白免疫原性分析。结果成功克隆SEA全长基因,经DNA序列分析证实与GenBank收录序列具有100%的同源性。表达蛋白相对分子质量为31000,以包涵体形式存在。纯化、复性后获得有活性的rSEA蛋白,rSEA蛋白能够识别天然的SEA。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,rSEA具备抗原性,为制备单抗、诊断试剂及金黄色葡萄球菌致病机制研究奠定了基础。
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关键词
金黄色葡萄球菌A型肠毒素
重组表达
蛋白纯化
复性
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职称材料
葡萄球菌肠毒素A基因真核表达系统的构建及其目的重组蛋白的鉴定(英文)
2
作者
孙爱华
邵浙新
+2 位作者
阮萍
毛亚飞
严杰
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第4期303-306,310,共5页
目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法 采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA...
目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法 采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA获得的 pUCm -T -SEA基因片段与真核表达载体 pPIC9K连接。采用电融合法将重组真核载体pPIC9K -SEA转化入P pastorisGS115株 ,构建成真核表达系统 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。采用含G4 18抑制剂的YPD琼脂平板和PCR筛选并鉴定 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。 0 5 % (V∶V)甲醇诱导下 ,采用SDS -PAGE检查BMMY液体培养基上清中重组SEA(rSEA)的表达情况。结果 可从S aureusATCC135 6 5株DNA中扩增获得SEA目的片段。与报道的SEA基因序列 (GenBankNo :AP0 0 4 82 8andL2 2 5 6 6 )比较 ,所克隆的SEA基因核苷酸及氨基酸序列的相似性分别高达 98 84 %～ 10 0 %和 10 0 %。在甲醇的诱导下 ,pPIC9K -SEA -P pastorisGS115能表达在SDS -PAGE图谱位于预期位置的rSEA。结论 我们成功地构建了能表达SEA的真核表达系统 ,为进一步分析SEA分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。
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关键词
葡萄球菌肠毒素A
基因
真核表达系统
构建
重组蛋白
鉴定
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职称材料
重组蛋白A亲和填料的制备及其性能评价
被引量：
3
3
作者
郭明明
王俊玲
+2 位作者
吴彦卓
徐明波
高向东
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期86-90,共5页
为了获得一种优良的抗体纯化介质,制备了重组金黄色葡萄球菌蛋白A(rProtein A)亲和填料,并考察了所制备的亲和填料的纯化性能。利用自行构建的rProtein A工程菌,经诱导表达、纯化获得rProtein A纯品,将其偶联到经环氧氯丙烷活化的Sephar...
为了获得一种优良的抗体纯化介质,制备了重组金黄色葡萄球菌蛋白A(rProtein A)亲和填料,并考察了所制备的亲和填料的纯化性能。利用自行构建的rProtein A工程菌,经诱导表达、纯化获得rProtein A纯品,将其偶联到经环氧氯丙烷活化的Sepharose 4 Fast Flow凝胶上,得到rProtein A亲和填料,并使用兔抗尿酸氧化酶抗体对该填料的性能进行验证。结果显示,在自制的rProtein A亲和填料上rProtein A浓度为1.5×10-4 mol/L。采用Scatchard模型分析,得到其解离常数和最大表观吸附量分别为2.28×10-7 mol/L和20.697 g/L,说明制得的rProtein A亲和填料对抗体有很好的结合能力。将该填料于0.1 mol/L NaOH溶液中浸泡1 h,其色谱性能未见变化。将该填料用于纯化兔抗体,湿胶结合抗体量可达19 mg/mL;一步柱色谱即可得到电泳纯度的抗体样品,回收率高于96%。本研究为rProtein A亲和填料的国产化奠定了基础。
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关键词
重组金黄色葡萄球菌蛋白A
亲和填料
制备
纯化
抗体
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职称材料
题名
产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达
被引量：
2
1
作者
吴双
张仁利
耿艺介
高世同
胡章立
机构
深圳市疾病预防控制中心
深圳大学生命科学学院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期451-454,共4页
基金
深圳市农业综合开发基金(No.2004-33)
文摘
目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得抗血清,进行重组蛋白免疫原性分析。结果成功克隆SEA全长基因,经DNA序列分析证实与GenBank收录序列具有100%的同源性。表达蛋白相对分子质量为31000,以包涵体形式存在。纯化、复性后获得有活性的rSEA蛋白,rSEA蛋白能够识别天然的SEA。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,rSEA具备抗原性,为制备单抗、诊断试剂及金黄色葡萄球菌致病机制研究奠定了基础。
关键词
金黄色葡萄球菌A型肠毒素
重组表达
蛋白纯化
复性
Keywords
staphylococcal
enterotoxin A
recombinant
expression
protein
purification
renaturation
分类号
R378.1 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
葡萄球菌肠毒素A基因真核表达系统的构建及其目的重组蛋白的鉴定(英文)
2
作者
孙爱华
邵浙新
阮萍
毛亚飞
严杰
机构
浙江医学高等专科学校
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第4期303-306,310,共5页
基金
ThissubjectwassupportedbyScienceReseachPlanofZhejiangProvince (No :2 0 0 3C3 40 10 )
文摘
目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法 采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA获得的 pUCm -T -SEA基因片段与真核表达载体 pPIC9K连接。采用电融合法将重组真核载体pPIC9K -SEA转化入P pastorisGS115株 ,构建成真核表达系统 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。采用含G4 18抑制剂的YPD琼脂平板和PCR筛选并鉴定 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。 0 5 % (V∶V)甲醇诱导下 ,采用SDS -PAGE检查BMMY液体培养基上清中重组SEA(rSEA)的表达情况。结果 可从S aureusATCC135 6 5株DNA中扩增获得SEA目的片段。与报道的SEA基因序列 (GenBankNo :AP0 0 4 82 8andL2 2 5 6 6 )比较 ,所克隆的SEA基因核苷酸及氨基酸序列的相似性分别高达 98 84 %～ 10 0 %和 10 0 %。在甲醇的诱导下 ,pPIC9K -SEA -P pastorisGS115能表达在SDS -PAGE图谱位于预期位置的rSEA。结论 我们成功地构建了能表达SEA的真核表达系统 ,为进一步分析SEA分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。
关键词
葡萄球菌肠毒素A
基因
真核表达系统
构建
重组蛋白
鉴定
Keywords
staphylococcal
enterotoxin A
SEA gene/cloning
eukaryotic expression system/construction
recombinant
protein
/expression
分类号
R378.11 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
重组蛋白A亲和填料的制备及其性能评价
被引量：
3
3
作者
郭明明
王俊玲
吴彦卓
徐明波
高向东
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
北京双鹭药业股份有限公司
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期86-90,共5页
基金
国家重大新药创制专项(2009ZX09401-006)
文摘
为了获得一种优良的抗体纯化介质,制备了重组金黄色葡萄球菌蛋白A(rProtein A)亲和填料,并考察了所制备的亲和填料的纯化性能。利用自行构建的rProtein A工程菌,经诱导表达、纯化获得rProtein A纯品,将其偶联到经环氧氯丙烷活化的Sepharose 4 Fast Flow凝胶上,得到rProtein A亲和填料,并使用兔抗尿酸氧化酶抗体对该填料的性能进行验证。结果显示,在自制的rProtein A亲和填料上rProtein A浓度为1.5×10-4 mol/L。采用Scatchard模型分析,得到其解离常数和最大表观吸附量分别为2.28×10-7 mol/L和20.697 g/L,说明制得的rProtein A亲和填料对抗体有很好的结合能力。将该填料于0.1 mol/L NaOH溶液中浸泡1 h,其色谱性能未见变化。将该填料用于纯化兔抗体,湿胶结合抗体量可达19 mg/mL;一步柱色谱即可得到电泳纯度的抗体样品,回收率高于96%。本研究为rProtein A亲和填料的国产化奠定了基础。
关键词
重组金黄色葡萄球菌蛋白A
亲和填料
制备
纯化
抗体
Keywords
recombinant staphylococcal protein a （rprotein a）
affinity packing
preparation
purification
antibody
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达
吴双
张仁利
耿艺介
高世同
胡章立
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
葡萄球菌肠毒素A基因真核表达系统的构建及其目的重组蛋白的鉴定(英文)
孙爱华
邵浙新
阮萍
毛亚飞
严杰
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
重组蛋白A亲和填料的制备及其性能评价
郭明明
王俊玲
吴彦卓
徐明波
高向东
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
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职称材料
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