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K亚群禽白血病病毒的分离鉴定及RPA-LFD快速检测方法的建立与应用
1
作者
喻华英
曾婷婷
+8 位作者
杨宗维
王粲
牙侯勋
万丽君
罗思思
李孟
谢芝勋
于美玲
谢丽基
《中国家禽》
北大核心
2025年第7期47-55,共9页
为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检...
为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检测方法。试验首先通过细胞培养分离鉴定出一株ALV-K,并以此分离株的前病毒DNA作为建立检测方法的模板;其次,针对ALV-K gp85基因保守位置设计引物和探针,优化反应体系的引物浓度、探针浓度和反应温度,在此基础上进行敏感性预试验并以预试验检测限优化反应时间;最后,以优化反应时间进行敏感性试验、稳定性试验及特异性试验。结果显示:建立的ALV-K RPA-LFD反应体系在引物浓度为0.45 mmol/L,探针浓度为0.14 mmol/L,39℃条件下反应21 min,其检测限为4.86×10^(2) copies/反应的ALV-K DNA,并且不与其他常见禽类病原体核酸发生非特异扩增反应;30份临床病料中有14份ALV-K阳性,与单重PCR方法结果一致。研究表明,建立的ALV-K RPA-LFD检测方法具有快速、特异、操作简单,不需要复杂仪器,能够直观地观察结果的优点,适用于临床快速检测ALV-K,特别是实验室条件有限的检测场景。
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关键词
家禽
K亚群禽白血病病毒
重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条
快速检测
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题名
K亚群禽白血病病毒的分离鉴定及RPA-LFD快速检测方法的建立与应用
1
作者
喻华英
曾婷婷
杨宗维
王粲
牙侯勋
万丽君
罗思思
李孟
谢芝勋
于美玲
谢丽基
机构
广西大学动物科学技术学院
广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室
桂林力源粮油食品集团有限公司
出处
《中国家禽》
北大核心
2025年第7期47-55,共9页
基金
广西科技重大专项(桂科AA23062050)
国家现代农业产业技术体系广西家禽产业创新团队建设专项资金(nycytxgxcxtd2024-19-3)
广西八桂学者专项(2019A50)。
文摘
为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检测方法。试验首先通过细胞培养分离鉴定出一株ALV-K,并以此分离株的前病毒DNA作为建立检测方法的模板;其次,针对ALV-K gp85基因保守位置设计引物和探针,优化反应体系的引物浓度、探针浓度和反应温度,在此基础上进行敏感性预试验并以预试验检测限优化反应时间;最后,以优化反应时间进行敏感性试验、稳定性试验及特异性试验。结果显示:建立的ALV-K RPA-LFD反应体系在引物浓度为0.45 mmol/L,探针浓度为0.14 mmol/L,39℃条件下反应21 min,其检测限为4.86×10^(2) copies/反应的ALV-K DNA,并且不与其他常见禽类病原体核酸发生非特异扩增反应;30份临床病料中有14份ALV-K阳性,与单重PCR方法结果一致。研究表明,建立的ALV-K RPA-LFD检测方法具有快速、特异、操作简单,不需要复杂仪器,能够直观地观察结果的优点,适用于临床快速检测ALV-K,特别是实验室条件有限的检测场景。
关键词
家禽
K亚群禽白血病病毒
重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条
快速检测
Keywords
poultry
avian leukosis virus subgroup K
recombinant polymerase amplification-lateral flow dipstick
rapid detection
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
K亚群禽白血病病毒的分离鉴定及RPA-LFD快速检测方法的建立与应用
喻华英
曾婷婷
杨宗维
王粲
牙侯勋
万丽君
罗思思
李孟
谢芝勋
于美玲
谢丽基
《中国家禽》
北大核心
2025
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